Отзывы стелс ермак 800: о чем молчит отечественный производитель — BRP в Москве

Снегоход «Стелс-Ермак» лан фитур-фитурня

Ing wektu kita, nalika saben wong cepet-cepet lan kanthi cepet, tanpa piranti, ing ngendi wae. Nanging mobil-mobil konvensional ora bisa tansah ngatasi alangan Sing nunggu.Contone, salju gedhe bakal dadi penghalang sing ora bisa diatasi. Нананг ана вилайах петь кабех далан дитутупи каро ляписан петь кандель. Mulane, kanggo wilayah kasebut, jinis transportasi khusus — снегоходы — diciptakake. Кая инг вилайах лияне, ана перушахан пой нгасилаке баранг касебут. Антаране вонг — тенан «Ермак». Padha banget populer karo снегоход «Стелс-Ермак», Sing duwe ski lan loro ulat.

Produsen Perusahaan

Perusahaan Domestik «Ermak» mrodhuksi снегоходы, поют kanthi ciri kasebut ora kalah karo аналогично.Продукт-продукт касебут каголонг келас палинг дхувур.

Модель terus diupdate kanggo penggemar. Пилихан поют акэ нгидини сампеян туку модель поют дизенэнги, ора ана туджуан, вариан утава бия. Модель палинга народного яику «Стелс-600» лан «Стелс-800».

Снегоход «Стелс-Ермак»: технические характеристики

«Стелс-Ермак» nuduhake kategori snowmobiles kanthi rong trek. Ики дикаврухи денинг месин лоро-ход утава папат-ход канти объемом 0,6 литра. Лан 0,8 л.Местин. Kapisan duweni pendinginan udara lan daya kekuwatan sèket. Ingkang kapindho ing охлаждая liwat cairan lan 67 литров. Канти. Дайя.

Коробка передач, гадхах себаликня. Transmisi dialihake kanthi cara Sing Padha karo transmisi otomatis transmisi otomatis.

Гарпу телескопик нгареп, ход канти, 15 сантиметров. Suspensi mburi luwes, ролик для джини. Iki ngidini sampeyan pindhah ing lumahing tanpa salju, contone — es. Penyerap kejut loro duwe stroke 19 сантиметров.

Pigura kasebut modular, dikuatake nganggo pérak pipa baja.Saka niate es nglindhungi terowongan saka aluminium dicelup. Дхасар дигаве сака пластик тахан лама.

Sing luwih apik tape buluh luwih adhapur ing lemah. Канго нгресики Улер сака сальджу ана саранг поет ана инджеро.

Танк bahan bakar utama nduweni объемом 58 л, тамбахан — лияне 32 л. Бахан Бакар Сака Тангки Утама Чукуп Канго Даване Ронг Ратус километр Танпа Пенгизиан Бахан Бакар.

Kenyamanan, desain lan peralatan

Снегоход «Stealth-Ermak» ngijini sampeyan kanggo nyedhiyakake nyaman driver lan penumpang.Курси ики дигавэ кантхи гая «Викинг», петь объем нингкатаке наяву. Kursi penumpang rampung dibusak. Лан Бали Сака Ику Биса Дисет Мэньян водитель.

Dandan rod nduweni rong mode.

Rasa percaya maneh sajrone gerakan kasebut bakal mbantu приборная панель, петь bakal nemu kabeh tren modern, lan cahya. Нанинг ики маш пакет дхасар сака грибов поют ндувени снегоход «Стелс-Ермак». Karakteristik kasebut mung bakal nambah sawise instalasi unsur tambahan. Дади, сампеян биса номер:

• Бампер нагареп синг диперкуат.

• Pengukuran Suhu Gas Buang.

• Датчик tingkat bahan bakar yaiku jinis listrik.

«Стелс-600»

Снегоход «Стелс-600» дипродхукси в версии: S lan L. Модель писанан рада цилик. Loro-lorone dilengkapi karburator dua-silinder loro-stroke kanthi объем kerja 0,565 л. Ику нгиджини сампеян кангго нджалук дайа сака секет дайа куда.

Воздушное охлаждение. Система впуска dilengkapi глушитель впуска kanggo gangguan.Lan sistem выхлопной duwe резонатор Sing dibangun ing глушитель.

Panularan kasebut nduweni sawetara posisi: netral, kurang, dhuwur, kuwalik, вариатор.

Снегоход «Стелс-Ермак» с дисковым тормозом амерга, гидраулик.

Sistem ignisi ora kontak. Запуск ручного анализа в режиме utawa listrik.

Suspensi ngarep iku teleskopik kanthi dawa, ход 15 миллиметров. Suspensi mburi diwakili dening rong penyerap gas hidrolik independen kanthi stroke sembilan belas sentimeter.

Mempercepat mobil salju kanggo sangang puluh km saben jam.

Dilengkapi kanthi sebaliknya, pemicu gas pemanasan lan setang, cermin depan, punggung penumpang, спидометр, фаркоп, lan lampu галоген

Stealth-800

«Ermak V800L» bedo karo model sadurunge nganggo mesin четырехтактный luwih kuat kanthi kapasitas 67 tenaga kuda lan объемом 0,8 литра. Система бахан бакар яику пеньюнтик. Sistem pendinginan cair. Bobot rada gedhe lan 340 килограмм.

Канго кабех чири лияне, модель мех падха.

Снегоход «Стелс-Ермак»: обзор saka pemilik

Teknologi model iki bisa DISBABAKE karo klompok produk sing mung muncul ing pasar. Nganti saiki, sampeyan mung bisa ndeleng обзор сака модель. Нанкин канго дина ики вис ана петь луви берунтунг петь туку мобил «Стелс-Ермак» канго мобил. Ulasan Sing ora Suwe. Сенадян «хрупкость» нджаба, канти пемериксаан лувих ринчи месин лувих куалитатиф. Мобильный снегоход Nggoleki dhuwur.Iku luwih dhuwur tinimbang аналог. Нанангинг векту спой падха, ора ана сиджи-сиджи. Ики амарга касунятан манава унсу петь палинг о анаинг нгисор ики. Dheweke nggawe pusat gravitasi «tengen».

Ulasan converge ing siji — снегоход исих «ментахан» лан мбутухаке доработка. Nanging prodhut nggarap iki. Lan wektu Sing suwe, bakal ngetokake produk конкурентоспособные menyang pasar.

Снегоход «Стелс-Ермак» bisa disbabake karo generasi anyar, kang isih bisa ngolehake posisi sing utama ing pasar.

Габаритные размеры снегохода, обзор модели

На отечественном рынке представлен самый широкий ассортимент снегоходов. Размеры и мощность машин подбираются в зависимости от пожеланий будущего владельца и назначения техники. Вы можете приобрести как бюджетные отечественные модификации, так и профессиональные версии от лучших мировых производителей. Ниже представлен обзор популярных моделей, среди которых есть варианты для дальних экстремальных путешествий, охоты и рыбалки, соревнований и помощи по хозяйству.

Габариты снегохода «Буран АЕ»

Это один из самых доступных автомобилей. При этом у него привлекательный современный дизайн, продуманное размещение «начинки» моторного отсека. Основной материал корпуса — литой пластик, который не боится перепадов температур и устойчив к механическим воздействиям. Запуск оборудования осуществляется с помощью электростартера.

Силовой агрегат — двухтактный «двигатель» объемом 635 «кубиков». Максимальная мощность агрегата — 34 лошадиные силы.Мотор охлаждается атмосферными массами. Конструктивные особенности включают укороченную раму и рисунок сцепления с одной лыжей и парой гусениц. Такая конфигурация позволяет легко маневрировать по лесным тропам даже для начинающих пользователей. Модель отличается высокой ремонтопригодностью, без проблем ремонтируется в полевых условиях. Минусы — «прожорливость», невысокая степень комфорта и устойчивости.

Габаритные размеры и технические параметры:

• коробка передач — АКПП с вариатором;
• объем топливного бака — 28 литров;
• масса буксируемого прицепа — до 250 кг;
длина
• (с лыжами / без лыж) — 2,45 / 2,27 м;
• ширина — 0,9 м;
• высота стекла — 1,32 мм;
• масса снаряженная — 0,5 т;
• скоростной порог — 60 км / ч.

Габаритные размеры снегохода «Тайга 500» («Варяг»)

Модификация оснащена накачанным рулевым механизмом, что обеспечивает удобство использования техники как в положении сидя, так и стоя. Среди полезных опций — сиденье с двумя уровнями, подогрев газового курка и руля, мощный элемент головного света, высокое лобовое стекло.

«Тайга 500» оснащена двухтактным силовым агрегатом на 500 «кубиков» мощностью 43 «лошадки». Техника разгоняется до максимальной скорости 90 км / ч всего за девять секунд.Двухрежимная коробка передач с понижающей скоростью агрегатируется с двигателем. Средний расход топлива составляет около 21 л / 100 км. Комфортность передвижения по пересеченной местности и глубокому снегу обеспечивает передняя телескопическая подвеска с ходом 105 мм, а также задний аналог с рабочим ходом 190 мм. В качестве материала корпуса используется армированный пластик, устойчивый к любым деформациям.

Характеристики и габариты снегохода:

• Топливная система — карбюратор;
• тормоза — дисковые;
электростартер
• — отсутствует;
• емкость топливного бака — 40 литров;
• лыжня — 0,9 м;
• длина / ширина / высота — 2,99 / 1,05 / 1,38 м;
• сухой вес — 260 кг.

«Тайга-патруль»

Это гражданский вариант снегохода, ранее использовавшегося военными. Среди особенностей — наличие широкой колеи, повышающей устойчивость автомобиля. Высота проушины составляет 22 мм, что является нормой для «утилитарных» модификаций. Задняя подвеска работает по принципу газомасляного амортизатора, что позволяет легко маневрировать, в том числе задним ходом.

Двигатель двухтактный с парой цилиндров. Его мощность достигает 60 лошадиных сил, чего вполне достаточно для преодоления различных снежных препятствий.Охлаждение двигателя жидкостное, количество карбюраторов — два, трансмиссия — двухпозиционная коробка передач с понижающим режимом.

Параметры и габариты снегохода:

• Емкость топливного / масляного бака — 55 / 2,5 литра;
объем мотора
• — 553 «кубика»;
• максимальная скорость — 100 км / ч;
• длина / ширина / высота — 2,95 / 1,15 / 1,46 м;
• сухой вес — 320 кг;
Размер гусеницы
• — 3,93 / 0,6 / 0,2 м.

Yamaha BR250

Указанная версия выпускается с 1982 года.Рестайлинг модели был проведен в 1992 году, в результате чего повысились практичность, функциональность и надежность автомобиля. Агрегат оснащен одноцилиндровым двухтактным двигателем, трансмиссионный агрегат оснащен вариатором, тормоза дискового типа.

Недостатком является отсутствие задней передачи, что негативно сказывается на характеристиках маневренности. Силовой агрегат запускается без задержек, что подтверждает японское качество. Его вместимость сравнительно небольшая — 18 «лошадок» при объеме 246 кубических сантиметров.Несмотря на это, модель показывает хорошую проходимость, уверенно разгоняется до 60 км / ч. Особенность — усиленная защита от ветра и повышенный уровень комфорта.

Основные характеристики и габариты снегохода Yamaha Bravo:

• охлаждение — атмосферного типа;
• пуск двигателя — ручной;
• материал каркаса — металл;
• сухой вес — 175 кг;
• емкость топливного бака — 24 литра;
• длина / ширина / высота — 2,95 / 0,95 / 1,12 м.

«Рысь-119»

Данная модификация относится к категории туристических, выпускается с 1991 года. Техника ориентирована на работу в самых суровых условиях. «Сердце» автомобиля — двухтактный двигатель с парой цилиндров. При этом он создает довольно много шума и обладает завидным «аппетитом». К плюсам «движка» можно отнести неприхотливость в обслуживании и надежность. Мощности вполне хватает для оживленного преодоления заснеженных склонов.

Следует отметить, что посадка для пассажира не совсем удобная.Ему не за что держаться, кроме багажника, что не очень удобно. Среди плюсов — наличие вместительных ступенек для ног. Сиденье мягкое, но имеет выдвижной чехол.

Технические характеристики и габариты снегохода «Рысь»:

• Объем двигателя — 431 куб. см;
• тип охлаждения — воздушная система;
Силовой параметр
• — 46 л. из.;
• Ёмкость топливного бака — 24 л;
• средний расход топлива на 100 км — 18 литров;
• ограничение скорости — 110 км / ч;
вес
• — 250 кг;
• длина / ширина / высота — 3,24 / 1,08 / 1,22 м;
• ширина колеи — 38 см.

«Ямаха Викинг»

Указанная версия относится к многофункциональной утилитарной технике. Инженеры прислушались к мнению пользователей и полностью изменили переднюю часть автомобиля, а также доработали элементы освещения, сиденья водителя и пассажира. Предусмотренные кромки и штамповки на капоте эффективно отводят потоки воздуха и снега от водителя. Дополнительный комфорт обеспечивают ручки с подогревом и козырек.

Надежная защита от попадания снега в моторный отсек гарантируется улучшенными решетками и герметизацией указанного отсека.За плавный старт отвечает точно настроенный вариатор, мощность агрегата в глубоком снегу реализуется за счет хорошей амортизации и гусениц с ярко выраженными зацепами для грунта. Для перевозки вещей предусмотрен вместительный багажник и отделение под сиденьем.

Тактико-технические характеристики снегохода «Викинг»:

• Объем «паровоза» — 535 куб. см;
Показатель мощности
• — 46 л. из.;
Тип двигателя
• — двухтактный вариант с парой цилиндров;
• емкость топливного бака — 31 литр;
• сухой вес — 316 кг;
• длина / ширина / высота — 3,05 / 1,19 / 1,35 м.

Polaris Waidtrack

Эта модель считается самой популярной среди утилитарных представителей. Известность обусловлена ​​надежностью конструкции и высоким качеством сборки. Среди достоинств также отмечают уверенный запуск мотора, который способен эффективно работать при критически низких температурах. Двухтактный «двигатель» гарантирует необходимый показатель тяги, не перегревается на высоких оборотах, так как рубашка жидкостного охлаждения исправна. К другим преимуществам можно отнести простоту обслуживания и эксплуатации большинства узлов.

Мощность двигателя 85 «лошадей», два цилиндра оснащены отдельным карбюратором. Система смазки имеет раздельную конфигурацию. Хорошую управляемость обеспечивает подвеска переднего рычага, которая хорошо ведет себя даже на скорости 100 км / ч. Задний аналог — торсионный амортизатор.

Параметры и габариты снегохода:

• объем двигателя — 488 «кубиков»;
трансмиссия
• — вариатор с пониженной передачей и реверсом;
• масса буксируемого прицепа — 300 кг;
• сухой вес — 278 кг;
• длина / ширина / высота — 3,25 / 1,10 / 1,29 м;
• Размер гусеницы — 3,45 / 0,5 м.

«Стелс Фрост»

Уникальный снегоход имеет современный дизайн и достойные технические характеристики. В оснащение входит только одна лыжа, с ориентиром на северные регионы страны. Эта техника доступна в двух модификациях, параметры которых идентичны друг другу. Отличие заключается в удлиненной базе и весе (320 и 295 кг).

Автомобиль приводится в движение двухтактным двигателем с парой цилиндров с собственными карбюраторами.Система зажигания разработана на основе специального программирования; блок защищен от перегрева принудительным атмосферным охлаждением. Усиленная рулевая колонка — регулируемая конфигурация, рукоятки и курок дроссельной заслонки с подогревом. Гидравлический тормоз отвечает за остановку. Водительское кресло мягкое, удобное, нескользящее. На современном капоте предусмотрены специальные отверстия для перенаправления воздушного потока на мотор.

Характеристики

Параметры и габариты снегохода Frost Stealth:

• Рабочий объем — 564 «кубика»;
Показатель мощности
• — 49 л.из.;
блок трансмиссии
• — вариатор с реверсом;
подвеска
• — эллипсы-рессоры спереди и пружинные амортизаторы сзади;
• пуск — электростартер;
• максимальная скорость — 80 км / ч;
• длина / ширина / высота — 2,7 / 0,91 / 1,33 м;
• объем топливного бака 28 л.

«Стелс Ермак 800»

Данная модификация заменила морально и технически устаревший «Буран». Ермак имеет такой же вес, но динамика и комплектация намного лучше.Особенность расположения бензобака (между ног водителя) исключает возможность его повреждения ветками. Оборудование защищено от пней и бревен снизу алюминиевым щитком.

Автомобиль приводится в движение четырехтактным двигателем мощностью 67 «лошадей». Средний расход топлива около 20 л / 100 км. Бак вмещает 50 литров топлива. Газовая рукоятка и руль подогреваются. Специальная конфигурация линз на световых элементах гарантирует хорошее освещение.

Характеристики и габариты снегохода Stealth Ermak 800:

• подвеска — телескопы спереди, независимый навески сзади;
трансмиссия
• — автоматическая трансмиссия с вариатором;
винт
• — одна гусеница, шириной 38 см;
• тормоза — гидравлическая дисковая система;
• длина / ширина / высота — 3,1 / 1,02 / 1,33 м;
высота выступов
• — 17,5 мм;
Конструкционная масса
• — 290 кг.

В-клетки модулируют системные ответы на инфекцию легких Pneumocystis murina и защищают гематопоэз по требованию с помощью Т-клеточно-независимых врожденных механизмов при отсутствии передачи сигналов интерферона I типа

Abstract

ВИЧ-инфекция приводит к сложному иммунодефициту из-за потери CD4 ⁺ Т-клетки, нарушение ответа интерферона I типа (IFN) и дисфункция В-клеток, вызывающая восприимчивость к оппортунистическим инфекциям, таким как пневмония Pneumocystis murina, пневмония и необъяснимые сопутствующие заболевания, включая дисфункцию костного мозга.IFNs типа I и B-клетки критически влияют на иммунитет к легочной инфекции Pneumocystis . Недавно мы также определили В-клетки как сторонников гематопоэза по требованию после инфекции Pneumocystis , которая в противном случае была бы затруднена из-за системных иммунных эффектов, инициированных в контексте дефектной системы IFN типа I. Изучая роль IFNs типа I в иммунитете к инфекции Pneumocystis , мы обнаружили, что у мышей, лишенных как лимфоцитов, так и рецептора IFN типа I (IFrag ^{— / —} ), развивалась прогрессирующая недостаточность костного мозга после инфекции, в то время как лимфоцит-компетентный тип I. Мыши с дефицитом рецептора IFN (IFNAR ^{— / —} ) показали временную депрессию костного мозга и экстрамедуллярный гемопоэз.Восстановление лимфоцитов у мышей IFrag ^{— / —} с дефицитом лимфоцитов указывало на то, что В-клетки играют ключевую роль в защите костного мозга. Здесь мы определяем, как В-клетки защищают кроветворение по требованию после легочной инфекции Pneumocysti в нашей модели. Мы демонстрируем, что адоптивный перенос В-клеток в мыши IFrag ^{— / —} защищает раннюю гематопоэтическую активность предшественников во время системных ответов на инфекцию Pneumocystis , тем самым способствуя восполнению истощенных клеток костного мозга.Эта активность не зависит от помощи Т-лимфоцитов CD4 ⁺ и специфичности рецептора В-клеток и не требует миграции В-клеток в костный мозг. Кроме того, мы показываем, что В-клетки защищают кроветворение по требованию частично за счет индукции механизмов, опосредованных интерлейкином-10 (ИЛ-10) и ИЛ-27. Таким образом, наши данные демонстрируют важную иммуномодулирующую роль В-клеток во время легочной инфекции Pneumocystis , которая дополняет модулирующую роль IFN типа I для предотвращения системных осложнений.

ВВЕДЕНИЕ

Pneumocystis — это широко распространенный внеклеточный легочный грибковый патоген со строгой видовой специфичностью. Вероятно, он передается воздушно-капельным путем от людей, часто временно инфицированных, и обычно вызывает несколько или неспецифические симптомы у здоровых людей, приводящих к иммунитету (см. Ссылки 1 и 2). Однако Pneumocystis может вызывать тяжелую и прогрессирующую интерстициальную пневмонию у пациентов с нарушенным приобретенным иммунитетом со смертностью до 60% (3).В то время как общее количество функциональных CD4 ⁺ Т-клеток критически определяет повышенную восприимчивость к легочной инфекции Pneumocystis , пациенты с дефектами В-клеток также находятся в группе риска. В связи с этим пневмония Pneumocystis (PCP) является СПИД-определяющим состоянием во время прогрессирования ВИЧ-инфекции и обычно возникает, когда количество CD4 ⁺ Т-клеток падает ниже 200 клеток / мкл (4). Кроме того, иммуносупрессивная и клеточная абляционная терапия после трансплантации твердых органов, аутоиммунитета или лечения рака снижает количество CD4 ⁺ T-клеток и / или B-клеток и ухудшает функции у пациентов, не инфицированных ВИЧ (см. Ссылки 5 и 6).Схемы лечения, предрасполагающие к тяжелым инфекциям Pneumocystis , включают лечение высокими дозами глюкокортикоидов и В-клеточную абляционную терапию ритуксимабом (7, –11). Кроме того, низкосортная инфекция Pneumocystis обнаруживается у пациентов с потенциально тонкими иммуносупрессиями, таких как младенцы, ВИЧ-положительные пациенты, получающие ВААРТ (высокоактивная антиретровирусная терапия), или пациенты, получающие низкие дозы и ингаляционные глюкокортикоиды (12, — 14). Это может способствовать гиперреактивности бронхов, связано с синдромом внезапной детской смерти (СВДС) и обострением хронических обструктивных заболеваний легких (15, –19).

Колонизация Pneumocystis также усиливает признаки системного воспаления (20, 21). Таким образом, Pneumocystis может действовать как серьезный фактор сопутствующей патологии, который также может усиливать вторичные системные заболевания, связанные с хроническими легочными заболеваниями и ВИЧ-инфекцией, такие как остеопороз или дисфункции костного мозга (22, –28).

Иммунитет к Pneumocystis требует присутствия функциональных CD4 ⁺ Т-клеток для стимуляции антиген-специфической продукции иммуноглобулина В-клетками и опосредованного макрофагами фагоцитоза (4, 29, –38).Кроме того, ранняя продукция врожденного интерферона I типа (IFN) модулирует этот ответ и ускоряет дифференцировку B-клеток в плазматические клетки и, таким образом, способствует продукции антител, специфичных для Pneumocystis murina (39). Однако В-клетки также обеспечивают важные независимые от Т-клеток и IFN-типа I функции, критические для индукции иммунитета к Pneumocystis . Одна из этих функций — выработка встречающихся в природе антител IgM против общих грибковых антигенов, которые помогают в клиренсе Pneumocystis (40).Кроме того, продукция фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), происходящая из В-клеток, была идентифицирована как критический врожденный и независимый от антител механизм, способствующий правильному праймированию Т-лимфоцитов CD4 ⁺ во время ответов на легочную инфекцию Pneumocystis (41, 42). Хотя эти опосредованные В-клетками функции относятся к локализованным легочным ответам и индукции выведения патогенов, мы обнаружили, что В-клетки также обладают важными иммуномодулирующими функциями, относящимися к поддержанию тканевого гомеостаза в удаленных участках органов, чтобы предотвратить вызванное иммунитетом повреждение тканей после системных ответов на . Pneumocystis легочная инфекция.

Функции лимфоцитов и ответы на IFN типа I могут быть нарушены в результате ВИЧ-инфекции и иммуносупрессивного лечения, например, глюкокортикоидами (43, –49). Изучая независимую роль как IFN типа I, так и лимфоцитов в формировании иммунитета к легочной инфекции Pneumocystis , мы недавно случайно обнаружили, что как передача сигналов IFN типа I, так и B-клетки имеют решающее значение для регуляции не только местных, но и системных иммунных ответов на . Pneumocystis , инфекция легких, и, таким образом, они защищают кроветворение по требованию после системных воспалительных реакций на стресс.Мы обнаружили, что у мышей, лишенных как лимфоцитов, так и рецептора IFN типа I (IFrag ^{— / —} ), развилась быстро прогрессирующая недостаточность костного мозга после легочной инфекции Pneumocystis в течение 16 дней, в то время как у мышей с лимфоцитами, но с дефицитом рецептора IFN типа I ( IFNAR ^{— / —} ) демонстрируют преходящий криз костного мозга с угнетением костного мозга и экстрамедуллярным кроветворением. Эти системные симптомы возникают без доказательств системного распространения патогена и в то время, когда нагрузка патогена на легкие все еще низка (50, 51).Исследования восстановления иммунитета с переносом спленоцитов от мышей дикого типа, IFNAR ^{— / —} или с дефицитом В-клеток μMT мышам с дефицитом лимфоцитов IFrag ^{— / —} показали, что В-клетки являются ключевым игроком в защите костного мозга (50 ).

Дисфункция костного мозга как у лимфоцит-компетентных, так и у лимфоцитодефицитных мышей с IFN-дефицитом I типа ассоциирована с чрезмерной иммунной активацией, опосредованной инфламмасомами, с повышенным высвобождением интерлейкина-1 (ИЛ-1) и ИЛ-18 с последующей чрезмерной индукцией нижестоящие медиаторы, такие как гамма-интерферон (IFN-γ), и усиление ответов TNF-α (51, 52).Однако механизмы, с помощью которых В-клетки модулируют эти эффекты и, таким образом, защищают от недостаточности костного мозга, все еще неясны.

Здесь мы демонстрируем, что адоптивный перенос очищенных В-клеток мышам IFrag ^{— / —} до инфицирования защищает раннюю активность гематопоэтических предшественников во время системных ответов на инфекцию легких Pneumocystis , тем самым способствуя восполнению истощенных клеток костного мозга. Эта активность не требует помощи Т-лимфоцитов CD4 ⁺ , не включает клиренс Pneumocystis и опосредуется врожденными антиген-независимыми функциями В-клеток.Перенесенные В-клетки преимущественно мигрируют обратно в селезенку и легкие, но не в костный мозг, что предполагает роль растворимых факторов в роли системной защиты, опосредованной В-клетками. Кроме того, мы показываем, что B-клетки дополняют защитную активность IFN типа I в отношении костного мозга, по крайней мере частично, за счет индукции опосредованных IL-10 и IL-27 механизмов, возможно, посредством взаимодействия с макрофагами / дендритными клетками и их стимуляции.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Мыши.

Все мыши, перечисленные ниже, были выведены и содержались в Центре ресурсов животных Университета штата Монтана (MSU).Мышей помещали в клетки для вентиляции и получали стерильный корм и воду. Мыши SCID C.B17 в качестве источника организма Pneumocystis murina (PC) и мыши RAG1 ^{— / —} (фон C57BL / 6) были первоначально приобретены в лаборатории Джексона (каталожные номера 001803 и 002096, соответственно). Мыши IFrag ^{— / —} были получены путем скрещивания мышей IFNAR ^{null / null} (фон C57BL / 6) (любезно предоставлены E. Schmidt, MSU) с мышами RAG1 ^{— / —} (фон C57BL / 6), как ранее описано (50).Мыши C57BL / 6 дикого типа были приобретены в Charles River Laboratories (каталожный номер 027), а мыши IL-10 ^{— / —} были приобретены в Jackson Laboratory (штамм B6.129-IL-10 ^{Tm / cgn / J} ). B6.129P2- Igh-J ^tm1Cgn / J с дефицитом B-клеток (мыши μMT) были приобретены в лаборатории Jackson (номер по каталогу 002438), а мыши, несущие B-клетки, способны экспрессировать только трансгенные B-клетки человека. клеточный рецептор, специфичный к лизоциму куриного яйца (HEL) [C57BL / 6-Tg (IghelMD4) 4Ccg / J], скрещивали с B-клеточным B6, дефицитным.129P2- Igh-J ^tm1Cgn / J мышей для получения мышей, способных продуцировать только В-клетки с В-клеточным рецептором (BCR), специфичным для HEL, любезно предоставленных Ф. Лундом (53).

Экспериментальных животных интратрахеально инфицировали 1 × 10 ⁷ ядер Pneumocystis murina (в настоящем документе обозначаемых как Pneumocystis ) в 100 мкл гомогената легких от инфицированных исходных мышей, разведенных в фосфатно-солевом буфере (PBS). Pneumocystis Легочную нагрузку оценивали микроскопически путем подсчета ядер трофозоидов и кист в гомогенатах легких в 10-50 полях иммерсии в масле, как описано ранее (54). Предел обнаружения для этой техники log ₁₀ 4,43.

Адаптивный перенос клеток и другие методы лечения.

Исследования восстановления иммунитета мышей IFrag ^{— / —} проводили с использованием либо общих спленоцитов, полученных от мышей C57BL / 6 дикого типа, мышей μMT с дефицитом В-клеток, либо мышей с трансгенными В-клетками, экспрессирующих В-клеточный рецептор, специфичный для курицы. яичный лизоцим (мыши HELμMT).Животных-доноров умерщвляли с помощью наркоза СО ₂ и стерильно удаляли их селезенки. Одноклеточная суспензия клеток селезенки была приготовлена ​​путем гомогенизации селезенки путем их пропускания через сетчатый экран. Суспензию клеток неоднократно фильтровали через сетку Nitex 100 мкм, чтобы убедиться в отсутствии скоплений клеток. Животным вводили от 2 × 10 ⁷ до 3 × 10 ⁷ общих клеток в объеме 200 мкл раствора сбалансированного солевого раствора (HBSS) через хвостовую вену за 5-7 дней до заражения патогеном Pneumocystis ( 50).Для экспериментов по переносу В-клеток все клетки селезенки выделяли от мышей C57BL / 6 дикого типа или IL-10 ^{— / —} . Для этих экспериментов у донорских мышей стерильно удаляли селезенки и измельчали, а клетки пропускали через сито 100 мкм для получения суспензий отдельных клеток. Эритроциты лизировали с использованием буфера для лизиса ACK (0,15 M NH ₄ Cl, 10,0 мМ KHCO ₃ , 0,1 мМ Na ₂ EDTA [pH 7,2]). Общее количество клеток определяли с помощью гемоцитометра, а выделение В-клеток выполняли путем отрицательной селекции с использованием набора для выделения В-клеток с помощью магнитно-активированной сортировки клеток (MACS) (Miltenyi Biotec) в соответствии с протоколом производителя.Чистота выделенных В-клеток стабильно составляла> 95%. Конечные концентрации клеток доводили до 5 × 10 ⁷ B-клеток / мл в стерильном PBS для переноса мышам, и мыши получали всего 1 × 10 ⁷ B-клеток в 200 мкл посредством инъекции в хвостовую вену.

Для отслеживания in vivo В-клетки, выделенные, как описано выше, были помечены клеточным индикатором Vybrant CDFA / SE в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen / Molecular Probes). После процедуры мечения 1 × 10 ⁷ B-клеток дикого типа вводили мышам IFrag ^{— / —} , и их селезенки, легкие и костный мозг оценивали на предмет накопления перенесенных клеток на 1, 3, 5 дни. , и 7 постинфекций.Клетки можно было уверенно контролировать до 5-го дня постинфекции с помощью сортировки клеток, активируемой флуоресценцией (FACS), с использованием анализатора клеток LSR (Becton Dickinson [BD]). В отдельном подтверждающем эксперименте образцы миграции В-клеток в ходе инфекции отслеживали в селезенке, легких, средостенных лимфатических узлах и костном мозге путем обнаружения клеток с использованием мышиных В-клеток-специфических антител, окрашенных коктейлем маркеров, как описано ниже.

Некоторые группы мышей IFrag ^{— / —} получали человеческий рекомбинантный антагонист рецептора IL-1 (Kineret; Swedish Orphan Biovitrum) в концентрации 25 мг / кг массы тела / день (55) в течение инфекции, в то время как другие группы получали подкожно 0.25 мкг рекомбинантного ИЛ-27 без носителя (Biolegend) через день (56) или 0,4 мкг ИЛ-10 без носителя (57) в течение инфекции легких Pneumocystis .

Сбор и дифференциация клеток костного мозга (КМ) и легких.

ВМ-клеток из бедренных и большеберцовых костей собирали, как описано ранее, путем промывания 2 мл PBS через костный канал с использованием иглы 26,5 калибра и приготовления одноклеточной суспензии (58).

ВМ разводили 1:10 в PBS. Определяли количество клеток, центрифугировали их на предметных стеклах и окрашивали раствором Diff-Quik (Siemens).Дифференцировку клеток проводили на основе морфологии и паттерна окрашивания для различения миелоидных (включая стадии миелобластов-миелоцитов и метамиелоцитов), полосчатых и сегментированных нейтрофилов, эозинофилов и других (включая эритроидные, мегакариоцитарные и лимфоидные клетки) (58).

FACS-анализ также применялся к клеткам костного мозга в качестве дополнительной объективной меры дифференцировки клеток, а также для обнаружения и отслеживания перенесенных В-клеток. Перед окрашиванием FACS лизис BM эритроцитами выполняли с использованием буфера для лизиса ACK.Затем клетки суспендировали при 1 × 10 ⁷ / мл в буфере для FACS (PBS, содержащем 10% телячью сыворотку), содержащем блок Fc (клон мыши 24G2; Pharmingen) при разведении 1: 800. Наборы из 5 × 10 ^{5 клеток} были окрашены специфическими антителами, в частности, характеризующими миелоидный клон: главный комплекс гистосовместимости класса II (MHCII) (перидинин хлорофилл протеин [PerCP] –Cy5-5, клон M5 / 114.15.2, eBioscience), анти-CD11b (Alexa Fluor 700, клон M1 / ​​70, BioLegend), анти-Ly-6G / 6C (аллофикоцианин [APC] -Cy7, клон RB6-8C5, Pharmingen), как описано ранее (52).Образцы были получены с использованием аппарата LSR BD FACS и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo.

FACS-анализ был выполнен из легких, селезенки, костного мозга и средостенных лимфатических узлов (MLN) для отслеживания миграции В-клеток, перенесенных в мышей IFrag ^{— / —} в ходе инфекции. Для этого анализа у мышей извлекали органы и получали одноклеточные суспензии следующим образом. Левые доли легкого удаляли, разрезали ножницами и помещали в 10 мл PBS, содержащего 1 мг / мл коллагеназы D (Roche), и инкубировали в течение 30 мин при 37 ° C.Затем легкие помещали в сетку фильтра с размером ячеек 100 мкм и осторожно проталкивали в чистую пробирку. Селезенки и MLN удаляли у мышей и гомогенизировали, проталкивая их через сетку фильтра 100 мкм. Лизис эритроцитов выполняли, как описано выше, с использованием буфера для лизиса ACK. Окрашивание FACS проводили, как описано выше, с использованием следующей смеси антител: анти-CD19 (фикоэритрин [PE] -Cy7, клон eBio1D3 eBioscience), анти-B220 (PE, клон RA3-6B2, eBioscience), анти-IgM (APC, клон RMM-1, BioLegend) и анти-IgD (eFluor450, клон 11-26c, eBioscience).

Образцы сыворотки.

Образцы сыворотки были собраны на протяжении всего периода инфицирования путем сбора образцов цельной крови в каждый момент времени, которые были центрифугированы, и лейкоцитарная пленка была отделена от сыворотки. Образцы замораживали до дальнейшего анализа.

Анализ цитокинов.

Образцы сыворотки оценивали на уровни IFN-γ, IL-1β, IL-18, IL-12p70, IL-10 и IL-27 с использованием планшетов для мультиплексного анализа цитокинов от Multiplex или Bio-Rad Life Sciences и измеряли с использованием система анализа Bioplex (Bio-Rad).В некоторых экспериментах концентрации белка IL-1β измеряли отдельно с использованием реагентов для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) от R&D Systems (мышиный IFN-γ DuoSet). Кроме того, концентрации антагонистов рецептора IL-1 измеряли отдельно с использованием реагентов ELISA от R&D Systems (мыши DuoSet IL1ra / IL1F3).

Анализ колониеобразующих клеток для клеток костного мозга мыши.

Активность гемопоэтических клеток-предшественников в костном мозге мышей IFrag ^{— / —} и RAG ^{— / —} оценивали по гемопоэтическим колониеобразующим единицам (КОЕ) в среде с метилцеллюлозой, как описано ранее (52).Для этого анализа 1 × 10 ⁵ ВМ-клеток на животное и группу в каждый момент времени помещали в среду MethoCult GF M3534 (StemCell Technologies), состав которой был разработан для поддержки оптимального роста клеток-предшественников гранулоцитов и макрофагов. Клетки из каждого образца высевали в двух экземплярах согласно протоколу производителя в 35-миллиметровые стерильные чашки для культивирования (StemCell Technologies), помещенные в 100-миллиметровые чашки Петри в присутствии одной 35-миллиметровой чашки, содержащей стерильную воду. Культуры инкубировали в течение 7 дней в инкубаторе с водяной рубашкой, в котором поддерживали 5% CO ₂ .Распознавание колоний (гранулоцитарные макрофаги [GM] -, G-, M-образующие колонии) и подсчет выполнялись в соответствии с рекомендациями StemCell Technologies.

Гистология.

Печень и селезенку мышей фиксировали в 10% растворе формалина от 24 до 48 часов и заливали парафином, и на микротоме Leica RM2255 вырезали срезы толщиной 5 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином (H&E) с использованием реагентов от Richard Allan Scientific.

Микроскопия.

Микроскопические исследования гистологических и цитоспиновых препаратов проводили с использованием микроскопа Nikon Eclipse E200 при увеличениях × 200 и × 1000 и масляной иммерсии.Анализ количества колоний в костном мозге (анализ КОЕ) выполняли с использованием микроскопа Zeiss Axiovert и увеличения × 25 и × 50.

Статистический анализ.

Данные были нанесены на график с использованием Prism (GraphPad Software, Inc.), и статистический анализ был выполнен с использованием одностороннего или двустороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим posthoc-тестом Тьюки или Бонферрони, соответственно. Для попарного сравнения был проведен тест Стьюдента t .

РЕЗУЛЬТАТЫ

B-клетки обеспечивают Т-клеточные и антиген-независимые механизмы для поддержания гемопоэза во время системных ответов на инфекцию легких

Как ранее сообщалось и показано в, Pneumocystis инфекция легких вызывает временную депрессию костного мозга у лимфоцит-компетентных мышей IFNAR ^{— / —} и полную недостаточность костного мозга у лимфоцитодефицитных мышей IFrag ^{— / —} в течение 16 дней. постинфекция. Эксперименты по переносу спленоцитов на мышей IFrag ^{— / —} подтвердили специфическую защитную роль В-клеток в костном мозге в нашей системе (50).

В-клетки защищают кроветворение во время реакции на легочную инфекцию Pneumocystis с помощью механизмов, независимых от В-клеточных рецепторов.(A) Общее количество клеток костного мозга (BM), полученное от лимфоцит-дефицитных мышей IFrag ^{— / —} и лимфоцит-компетентных мышей IFNAR ^{— / —} в течение 16-дневного курса инфекции легких Pneumocystis murina (PC). (B) Общий подсчет костного мозга у мышей IFrag ^{— / —} , инфицированных Pneumocystis , на 16 день постинфекции по сравнению с мышами IFrag ^{— / —} , у которых либо спленоциты, полученные от мышей дикого типа (WT), либо B-клетки -дефицитных мышей μMT или спленоцитов мышей, экспрессирующих исключительно В-клеточный рецептор из лизоцима куриного яйца, адоптивно переносили.Также показаны результаты для мышей IFrag ^{— / —} , которым клетки не были перенесены (нетрансифицированные). (C) Относительное количество нейтрофилов, выраженное в процентах от общего количества клеток костного мозга, проанализированных под микроскопом из тех же групп (без восстановления, иммунная система не восстановлена), отображается на панели B. Для статистического анализа данных на панели A два Был проведен двухфакторный дисперсионный анализ с последующим posthoc-тестом Бонферрони. Для статистического анализа данных на панелях B и C выполняли однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Tukey posthoc.Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: **, P <0,01; ***, P <0,001; ###, P <0,001 при сравнении различий между IFrag ^{— / —} и селезенкой WT по сравнению с IFrag ^{— / —} и селезенкой HELμMT.

В этих новых исследованиях мы намеревались выяснить механизмы, с помощью которых В-клетки действуют для защиты от недостаточности костного мозга после системных иммунных ответов на легочную инфекцию Pneumocystis в нашей модели.Чтобы оценить, требуется ли опосредованное антиген-специфическим B-клеточным рецептором распознавание Pneumocystis для этой защитной активности костного мозга, мышей IFrag ^{— / —} восстановили иммунитет спленоцитами, выделенными от любой из мышей дикого типа, с дефицитом B-клеток. Мыши μMT или мыши HELμMT, у которых В-клетки способны экспрессировать только В-клеточный рецептор, специфичный для лизоцима куриных яиц. Затем реакции костного мозга этих мышей определяли через 16 дней после инфицирования легких Pneumocystis и сравнивали с неиммуно-восстановленными (невосстановленными), но инфицированными мышами IFrag ^{— / —} .Как показано в, мыши IFrag ^{— / —} , которые получали спленоциты, содержащие В-клетки, от мышей дикого типа или HELμMT, были защищены от быстрой потери клеток костного мозга, в то время как невосстановленные мыши IFrag ^{— / —} , а также мыши, получавшие спленоциты дефицитные B-клетки (μMT) не были защищены. Эти данные свидетельствуют о том, что опосредованная В-клетками активность, относящаяся к защите функций костного мозга, не управляется антигенами и может включать в себя еще не определенные врожденные функции В-клеток. Однако мыши IFrag ^{— / —} , которые получали спленоциты дикого типа, имели значительно более высокое общее количество клеток костного мозга по сравнению с теми мышами, которые получали спленоциты, содержащие B-клетки со специфичностью B-клеточного рецептора к нерелевантному антигену (HEL).Это также отражается в более низком проценте количества зрелых и созревающих нейтрофилов в костном мозге мышей IFrag ^{— / —} с перенесенными спленоцитами от мышей HELμMT по сравнению с мышами с перенесенными спленоцитами дикого типа (). Это предполагает преимущество клеток дикого типа, экспрессирующих поликлональные рецепторы В-клеток.

Чтобы еще раз подтвердить, что B-клеточные механизмы ответственны за защитную активность костного мозга у мышей IFrag ^{— / —} и IFNAR ^{— / —} , мы адаптивно перенесли очищенные B-клетки дикого типа в группы IFrag ^{— / —} мышей и сравнили их реакции костного мозга с животными, которым были перенесены общие спленоциты дикого типа, или с животными, которым не были перенесены клетки (непереносимые) в течение инфекции легких Pneumocystis .Как показано на фиг.4, мыши IFrag ^{— / —} с перенесенными тотальными спленоцитами и очищенными B-клетками сохранили одинаково высокое количество клеток костного мозга, в то время как у непереносимых мышей IFrag ^{— / —} развилась недостаточность костного мозга за 16 дней. после инфекции легких Pneumocystis . Эти эксперименты подтвердили, что только В-клетки защищают функции костного мозга во время системных ответов на легочную инфекцию Pneumocystis , и эта защитная активность не требует родственной помощи со стороны CD4 ⁺ Т-клеток, присутствующих в селезенке.Однако, как ранее также наблюдалось у лимфоцит-компетентных мышей IFNAR ^{— / —} , экстрамедуллярный гематопоэз как в печени, так и в селезенке был очевиден гистологически в обеих перенесенных группах как отражение продолжающегося стрессового ответа костного мозга (), который не присутствует ни в одной из них. лимфоцитарно-компетентные мыши дикого типа или лимфоцитарно-дефицитные мыши RAG ^{— / —} с интактной экспрессией рецептора IFN-α / β (альфа / бета-интерферона) (IFNAR) (50). Интересно, что компенсаторный экстрамедуллярный гематопоэз не может быть обнаружен у непереносимых, но инфицированных мышей IFrag ^{— / —} , у которых развилась недостаточность костного мозга.Это свидетельствует либо о роли В-клеток в создании благоприятной нишевой среды для предшественников гемопоэтических клеток / гемопоэтических стволовых клеток в экстрамедуллярных участках, либо о роли В-клеток в механизмах нейтрализации, которые в противном случае нарушили бы функции циркулирующих кроветворных стволовых клеток / предшественников.

В-клетки не нуждаются в опосредованной Т-клетками помощи для облегчения защиты от недостаточности костного мозга в результате легочной инфекции Pneumocystis , но они способствуют экстрамедуллярному кроветворению в качестве доказательства стрессовой реакции костного мозга.(A) Общее количество клеток костного мозга неинфицированных мышей IFrag ^{— / —} по сравнению с таковыми из мышей IFrag ^{— / —} , инфицированных Pneumocystis murina на 16-й день постинфекции, которые были либо оставлены невосстановленными, либо получили либо полностью дикие животные. спленоциты -типа или очищенные В-клетки дикого типа до инфицирования. Оценивали по пять мышей на группу. (B) Окрашенные H и E гистологические срезы фиксированных формалином и залитых парафином печени и селезенки мышей в сравниваемых группах, демонстрирующие доказательства экстрамедуллярного кроветворения в виде гнезд клеток в печени (отмечены звездочкой) и скопления мегакариоцитов. в селезенке (отмечено стрелками).Для статистического анализа данных выполняли однофакторный дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Тьюки. Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: *, P <0,05; **, P <0,01; ***, P <0,001. Также указаны значения, которые существенно не отличаются (n.s).

Учитывая доказательства продолжающегося гематопоэтического стресса, мы оценили, был ли перенос В-клеток мышам IFrag ^{— / —} достаточным для поддержания устойчивой активности гематопоэтических предшественников в костном мозге.Таким образом, 10 ⁵ клеток костного мозга, выделенных из B-клеток, перенесенных или непереносимых мышей IFrag ^{— / —} на 16 день после инфицирования Pneumocystis , высевали в гемопоэтическом колониеобразующем анализе (анализ КОЕ), и колония -образующую активность клеток-предшественников гранулоцитов сравнивали с клетками костного мозга, выделенными от неинфицированных мышей IFrag ^{— / —} . Как показано в, активность КОЕ костного мозга оставалась стабильной и обычно была выше базовой активности в ответ на снижение числа нейтрофилов CD11b ⁺ Gr-1 ^hi в результате инфекции ().Эти данные свидетельствуют о том, что перенос В-клеток защищает функции гематопоэтических предшественников, несмотря на продолжающийся повышенный клеточный оборот, и ускоряет потерю нейтрофилов.

Перенос В-клеток в мыши IFrag ^{— / —} способствует устойчивой активности гематопоэтических предшественников в костном мозге во время ответов на инфекцию легких Pneumocystis . (A) Сравнение общего количества клеток костного мозга у неинфицированных мышей IFrag ^{— / —} (день 0) с таковыми у мышей IFrag ^{— / —} , которым были перенесены В-клетки от мышей дикого типа, и мышей, которым не были перенесены В-клетки переносили на 16 день после инфицирования легкого Pneumocystis .Оценивали по пять мышей на группу. (B) Сравнительный анализ активности гематопоэтических предшественников для гранулоцитарной / моноцитарной линии был выполнен путем посева 1 × 10 ⁵ общих клеток костного мозга на мышь в анализах гемопоэтических колониеобразований (анализы КОЕ) с использованием реагентов от StemCell Technologies. Все образцы помещали на планшеты в двух экземплярах. (C) Дифференциация клеток костного мозга проводилась под микроскопом и с помощью анализа FACS. Показано относительное количество (процент) CD11b ⁺ Gr-1 ^hi -экспрессирующих нейтрофилов в костном мозге групп сравнения.Для статистического анализа данных выполняли однофакторный дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Тьюки. Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: *, P <0,05; **, P <0,01; ***, P <0,001.

Адаптивно перенесенные В-клетки защищают кроветворение во время легочной инфекции

Для дальнейшего понимания того, как В-клетки защищают кроветворение во время системных ответов на легочную инфекцию Pneumocystis , мы отслеживали перемещение перенесенных В-клеток у мышей IFrag ^{— / —} в ходе инфекции.Для этого использовались две разные методологии. Сначала мы перенесли B-клетки, меченные флуоресцентным мембранным красителем (Vybrant dye) на день -1, и исследовали селезенку, костный мозг и легкие на накопление флуоресцентно меченых клеток с помощью анализа FACS в день 0 (день заражения) и дни 1, 3. и 5 постинфекций. Как показано на фиг.4, флуоресцентно меченые клетки можно было легко обнаружить в селезенке и легких мышей, перенесших В-клетки, в день 0 и день 1, но они были менее заметны на 3 день постинфекции и не обнаруживались на 5 день (данные не показаны).Напротив, в костном мозге после 0 дня (дня заражения) убедительно не было обнаружено никаких клеток. Используя этот подход, было неясно, были ли клетки быстро необнаруживаемыми из-за эффекта разбавления мембранного красителя после пролиферации клеток или клетки погибли. Таким образом, мы отслеживали перенесенные В-клетки внутри мышей IFrag ^{— / —} в ходе инфекции легких Pneumocystis в независимых экспериментах с использованием окрашивания специфичных для В-клеток антител (анти-B220 и анти-IgM) и обнаружения с помощью анализа FACS.показана стратегия стробирования, основанная на профиле прямого / бокового рассеяния и двойном окрашивании на IgM и B220 у лимфоцит-компетентных мышей IFNAR ^{— / —} в качестве положительного контроля и примененная к лимфоцит-дефицитным мышам IFrag ^{— / —} перед переносом в при этом ни в одной тестируемой ткани не было обнаружено IgM ⁺ B220 ⁺ B-клеток. Напротив, IgM ⁺ B220 ⁺ B-клетки могли быть обнаружены у перенесенных мышей IFrag ^{— / —} в селезенке, легких и MLN на 3, 7 и 10 день постинфекции, но никогда убедительно в костном мозге, что было в соответствии с экспериментами по отслеживанию красителя Vybrant.

Перенесенные В-клетки преимущественно накапливаются в селезенке, легких и прилегающих лимфатических узлах, но не в костном мозге, в течение инфекции легких Pneumocystis . (A) Меченные красителем Vybrant (Vybrant ⁺ ) В-клетки дикого типа переносили мышам IFrag ^{— / —} за 1 день до инфекции легких Pneumocystis (день -1) и их накопление в селезенке, легких. , лимфатические узлы средостения и костный мозг отслеживали с помощью анализа FACS в день 0 (до инфицирования), а также в день 1 и день после заражения.Графики FACS показаны в виде бокового рассеяния (SSC) (ось y ) по сравнению с Vybrant ⁺ (ось x ). Затвор помещали на ячейки Vybrant ⁺ с низким боковым разбросом и применяли ко всем образцам. (B) FACS-анализ клеток селезенки, костного мозга и легких на наличие зрелых В-клеток путем оценки клеток на коэкспрессию специфичных для В-клеток маркеров IgM и B220 (CD45R) в компетентном для лимфоцитов IFNAR ^{— / —} и мыши IFrag ^{— / —} с дефицитом лимфоцитов.Тканеспецифические ворота помещали в популяции клеток IgM ⁺ B220 ⁺ на основе уровней экспрессии маркеров, присутствующих у компетентных по лимфоцитам мышей, и применяли к мышам IFrag ^{— / —} . Затем установленные ворота применяли для анализа тканеспецифического накопления В-клеток у мышей IFrag ^{— / —} , перенесших В-клетки, в ходе инфекции легких Pneumocystis . (C) Накопление IgM ⁺ B220 ⁺ B-клеток, перенесенных в IFrag ^{— / —} мышей в селезенку, костный мозг, легкое (LD) и средостенные лимфатические узлы (MLN) в течение Pneumocystis легкого инфицирование на 3, 7 и 10 день после инфицирования.

Опосредованная В-клетками защита от недостаточности костного мозга связана с индукцией иммуномодулирующих цитокинов.

Отказ костного мозга у мышей IFrag ^{— / —} связан с повышенными уровнями в сыворотке крови цитокинов IL-1β и IL-18, обработанных инфламмасомами, а также IL-12 и IFN-γ, начиная с 7-10 дней после инфицирования. . Важно отметить, что этот системный эффект не наблюдается у мышей RAG ^{— / —} , у которых отсутствует стресс костного мозга (51). Чтобы определить, модулируется ли профиль системных воспалительных цитокинов непосредственно переносом В-клеток мышам IFrag ^{— / —} , был проведен сравнительный анализ некоторых сигнатурных цитокинов сыворотки на непереносимых Pneumocystis -инфицированных и перенесенных B-клетками IFrag ^{— / —} мыши.Как было продемонстрировано на примере как непереносимых, так и перенесенных В-клеток мышей с легочными инфекциями Pneumocystis , сывороточные уровни IL-1β, IL-12 и IFN-γ были явно повышены в обеих группах к 10-му дню постинфекции. Однако в то время как уровни цитокинов продолжали расти у непереносимых мышей IFrag ^{— / —} , уровни воспалительных цитокинов снижались у мышей, перенесших В-клетки, к 16-му дню постинфекции.

В-клеток в мыши IFrag ^{— / —} не вызывает значительного изменения профиля сывороточной экспрессии провоспалительных медиаторов, связанных с индукцией дисфункции костного мозга после инфекции легких Pneumocystis .(A) Изменения общего числа клеток костного мозга у мышей IFrag ^{— / —} , которым клетки не были перенесены (неперенесенные), и мышей IFrag ^{— / —} , которым были перенесены B-клетки в дни 0, 10 и 16 из Pneumocystis легочная инфекция. (B) Сравнение нагрузки легких Pneumocystis , отображаемой как количество ядер в логарифме ₁₀ единиц между неперенесенными и перенесенными B-клетками мышами IFrag ^{— / —} в течение 16-дневного курса инфекции. (C — E) Концентрации сывороточных цитокинов для IL-1β (C), IL-12p70 (D) и IFN-γ (E), обнаруженные в группах перенесенных и перенесенных B-клеток в ходе инфекции, отображаются параллельно.Для статистического анализа данных между двумя группами с течением времени на панелях A и B был проведен двухфакторный дисперсионный анализ с последующим posthoc-тестом Бонферрони. Для статистического анализа данных внутри одной группы с течением времени на панелях от C до E выполняли однофакторный дисперсионный анализ с последующим posthoc-тестом Тьюки. Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: *, P <0,05; **, P <0,01. Для панелей C – E значения сравнивали со значением для дня 0.

Опосредованная B-клетками индукция IL-10 и IL-27 вносит вклад в защиту гемопоэза при отсутствии передачи сигналов IFN I типа.

Чтобы определить, обеспечивают ли В-клетки или вызывают ли они программу регуляторных цитокинов в других типах клеток, возможно, способных модулировать пути воспалительной иммунной активации после их индукции, мы сравнили сывороточные уровни IL-10, IL-27 и антагониста рецептора интерлейкина 1 (IL1Ra). . Как показано на фиг.6, эти цитокины, хотя и индуцированные у нетрансферных мышей, были значительно выше у мышей IFrag ^{— / —} , перенесенных В-клетками, на 10-й день постинфекции по сравнению с непереносимыми мышами IFrag ^{— / —} .

В-клеток в мыши IFrag ^{— / —} связан с повышением сывороточных уровней иммунорегуляторных цитокинов в ответ на инфекцию легких Pneumocystis . (От A до C) Сравнительный анализ сывороточных уровней интерлейкина-10 (A), интерлейкина-27 (B) и антагониста рецептора интерлейкина-1 (C) у непереносимых мышей IFrag ^{— / —} в сравнении с перенесенными B-клетками в день 0, 10 и 16 после инфекции легких Pneumocystis . Для статистического анализа данных между двумя группами с течением времени был проведен двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони posthoc.Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: *, P <0,05; ***, P <0,001; ###, значительно выше у непереведенных животных. Для панелей C - E значения сравнивали со значением для дня 0.

Таким образом, чтобы исследовать функциональный вклад этих потенциально регуляторных цитокинов в опосредованную В-клетками защиту кроветворения по требованию, мы сначала сравнили ответы костного мозга на IFrag ^{— / —} мышей, у которых В-клетки, полученные от мышей-доноров дикого типа или IL-10 ^{— / —} , были перенесены в клетки нетрансферных мышей после инфекции легких Pneumocystis .Как показано на фиг.3, после начального падения общее количество клеток костного мозга, а также колониеобразующая активность оставались устойчивыми в обеих группах переноса В-клеток, в то время как эти числа постоянно снижались у непереносимых животных в течение 16 дней (и). Хотя это сначала предполагало незначительную роль ИЛ-10, полученного из В-клеток, в их защитной активности в отношении костного мозга, мы были удивлены, обнаружив, что сывороточные уровни ИЛ-10 в обеих группах переноса В-клеток продолжали быть выше на 10-й день после Pneumocystis легочная инфекция по сравнению с непереносимыми мышами ().Хотя эти уровни были все еще выше у мышей, которым были перенесены В-клетки дикого типа, по сравнению с теми, у которых были перенесены В-клетки IL-10 ^{— / —} , это предполагает возможную роль В-клеток в индукции IL- 10 в других дополнительных клетках во время системных ответов на легочную инфекцию Pneumocystis . Кроме того, сравнительная морфологическая оценка клеток костного мозга с помощью микроскопии показала, что мыши, получавшие B-клетки IL-10 ^{— / —} , показали меньшую широту стадий клеточной дифференцировки, особенно для предшественников нейтрофилов, по сравнению с мышами, которые получали B-клетки дикого типа. ().Это также отражалось в значительном снижении процента числа зрелых нейтрофилов по сравнению с мышами, перенесшими В-клетки дикого типа (). Несмотря на различия в ответах костного мозга, не было различий в легочной нагрузке Pneumocystis в сравниваемых группах (). Таким образом, мы пришли к выводу, что IL-10, продуцируемый B-клетками и индуцируемый в других дополнительных клетках, может модулировать иммунологические механизмы, влияющие на повышенный оборот созревающих нейтрофилов в костном мозге.

ИЛ-10, полученный из В-клеток, в сочетании с опосредованной В-клетками индукцией ИЛ-10 в дополнительных клетках защищает кроветворение по требованию во время реакции на легочную инфекцию Pneumocystis .(A) Общее количество клеток костного мозга от мышей IFrag ^{— / —} , которые либо не были перенесены, либо получили В-клетки, выделенные от мышей дикого типа или мышей-доноров IL-10 ^{— / —} в дни 0, 10 и 16 после инфекции легких Pneumocystis . (B) Сравнительный анализ активности гематопоэтических предшественников для гранулоцитарной / моноцитарной линии был выполнен путем посева 1 × 10 ⁵ общих клеток костного мозга на мышь каждой группы сравнения в анализах гемопоэтического колониеобразования (анализы КОЕ) с использованием реагентов от StemCell Technologies. .Все образцы помещали на планшеты в двух экземплярах. Были нанесены общие числа КОЕ. (C) Уровни IL-10 в сыворотке измеряли в каждой группе в ходе инфекции (от 0 до 16 дней после заражения) с использованием реагентов ELISA от R&D Systems. (D) Свеже промытые клетки костного мозга центрифугировали на предметных стеклах и оценивали морфологически с помощью световой микроскопии после окрашивания Diff-Quik. Клетки костного мозга от неинфицированных и непереносимых мышей IFrag ^{— / —} показаны в сравнении с мышами IFrag ^{— / —} с инфекциями легких Pneumocystis , которые получили В-клетки либо от дикого типа, либо от IL-10 ^{— / —} мышей в 16 дней (d.16) или не были переданы. (E) Показан процент зрелых (полосчатых и сегментированных) нейтрофилов, идентифицированных с помощью морфологического анализа и подтвержденных анализом FACS в группах сравнения в течение инфекции легких Pneumocystis . (F) Pneumocystis нагрузка в легких отображается как количество ядер в логарифме ₁₀ единиц между тремя группами в течение 16-дневного курса инфекции. Для статистического анализа данных между двумя группами с течением времени был проведен двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони posthoc.Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: * или #, P <0,05; **, P <0,01; *** или ###, P <0,001. Каждую группу с перенесенными В-клетками сравнивали отдельно с группой без переноса IFrag ^{— / —} . Значения по сравнению с мышами, перенесшими В-клетки дикого типа, показаны звездочками, а значения по сравнению с мышами, перенесшими В-клетки IL-10 ^{— / —} , показаны в виде чисел или знаков решетки.

IL-27 представляет собой плейотропный цитокин, уровень которого также повышен у мышей IFrag ^{— / —} с переносом В-клеток, чем у непереносимых мышей IFrag ^{— / —} , и он служит вышестоящим регулятором продукции IL-10 (см. 56, 59 и 60).Чтобы дополнительно оценить комбинированный и индивидуальный вклад IL-10 и IL-27 в опосредованную В-клетками защиту кроветворения по требованию во время системных ответов на легочную инфекцию Pneumocystis , мы сравнили ответы костного мозга инфицированных IFrag ^{— / —} мышей, которые получали комбинированное или индивидуальное лечение ИЛ-10 и ИЛ-27, по сравнению с необработанными, но инфицированными мышами IFrag ^{— / —} на 10-й день постинфекции. Первоначально была выбрана ранняя временная точка, поскольку мы ожидали, что только частичная защита, скорее всего, проявится на ранней стадии, но не в более поздние временные точки.Действительно, как продемонстрировано, общее количество клеток костного мозга у тех мышей, которые получали комбинированное или индивидуальное лечение, содержащее ИЛ-10, имело значительно более высокое общее количество клеток костного мозга, чем у тех мышей, которых не лечили в результате большего числа зрелых и созревающих. нейтрофилы. Кроме того, хотя и не всегда значимо, те мыши, которые получали только ИЛ-27, постоянно демонстрировали более высокое общее количество клеток по сравнению с необработанными мышами, но меньшее общее количество клеток, чем те, которые получали ИЛ-10.Чтобы определить, могут ли IL-10 и IL-27 модулировать отдельные аспекты путей, ответственных за прогрессирование недостаточности костного мозга в нашей модели, мы затем обработали Pneumocystis -инфицированных IFrag ^{— / —} мышей с помощью IL-10 или IL. -27 отдельно и оценивали влияние на прогрессирование недостаточности костного мозга по сравнению с необработанными мышами на 16 день после инфицирования. Хотя ни одно лечение не могло в конечном итоге предотвратить прогрессирующую потерю зрелых клеток костного мозга в ответ на инфекцию (и), только лечение ИЛ-27 могло значительно улучшить гематопоэтическую активность предшественников в течение 16 дней после инфицирования, что отражалось в повышенной колониеобразующей активности кости. клетки костного мозга по сравнению с необработанными мышами, в то время как те мыши, которые получали IL-10, постоянно демонстрировали большую вариабельность, которая не достигла статистической значимости (и).

Введение рекомбинантных IL-10 и IL-27 обеспечивает отдельную и частичную защиту от недостаточности костного мозга у мышей IFrag ^{— / —} . (A) Общее количество клеток костного мозга в группах мышей IFrag ^{— / —} на 10 день после инфицирования, которые получали комбинированное лечение рекомбинантным IL-10 и IL-27 или получали только IL-10 или IL-27, или оставались без лечения. Все цитокины вводили подкожно в концентрации 400 нг / день для IL-10 и 250 нг / день для IL-27. (B — E) В двух отдельных экспериментах индивидуальное лечение IL-27 (B и C) или IL-10 (D и E) продолжалось в течение 16 дней после инфицирования, и общее количество клеток костного мозга сравнивали с необработанными, но инфицированными. у мышей (B и D) и активность гематопоэтических предшественников оценивали в анализах колоний (C и E).Для статистического анализа все сравнения проводили с необработанными мышами и выполняли либо однофакторный дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Тьюки, либо тест Стьюдента t для парных сравнений. Значения, которые значительно отличаются, указаны следующим образом: *, P <0,05.

ОБСУЖДЕНИЕ

В-клетки играют важную роль в ликвидации легочной инфекции Pneumocystis (31, 32, 40, 41, 61). Кроме того, мы смогли вовлечь В-клетки в качестве сторонников гематопоэза по требованию после легочной инфекции Pneumocystis , которая в противном случае была бы затруднена в результате системных иммунных отклонений, инициированных в контексте дефектной системы IFN типа I.Эти опосредованные В-клетками механизмы оказались независимыми от механизмов, необходимых для клиренса Pneumocystis (50, 51). Это представляет интерес, поскольку дисфункции костного мозга, приводящие к сопутствующим заболеваниям, связанным с панцитопенией, распространены не только у пациентов со СПИДом, но и у пациентов, получающих лечение от аутоиммунных заболеваний. Обе группы пациентов имеют повышенную восприимчивость даже к легочной инфекции Pneumocystis низкой степени, которая может способствовать отклонению системных врожденных иммунных ответов, что также может затруднять кроветворение (4, 62, –65).

Хотя Pneumocystis считается исключительно легочным грибковым патогеном, у людей были зарегистрированы редкие случаи внелегочных проявлений. Сюда входят три независимых случая, о которых сообщил Росси и его коллеги, которые продемонстрировали диссеминированный пневмоцистоз с поражением костного мозга у пациентов со злокачественной лимфомой или ВИЧ-инфекцией (66). Однако, хотя уровни циркулирующего грибкового β-глюкана могут быть обнаружены на ранних этапах инфицирования, мы еще не смогли доказать распространение самого патогена в костный мозг мышей IFrag ^{— / —} .Следовательно, на основании наших текущих и ранее опубликованных результатов, кажется, что дисфункции костного мозга в нашей модели являются скорее результатом отклонения врожденных функций с глубокими системными эффектами, чем из-за распространения патогенов в костном мозге (50, 51).

Здесь мы решили определить механизм, с помощью которого В-клетки вносят вклад в защиту кроветворения после инфекции легких Pneumocysti в нашей модели. Мы обнаружили, что когда В-клетки переносятся в мышей IFrag ^{— / —} , они обеспечивают защиту костного мозга с помощью механизмов, которые поддерживают активность гематопоэтических предшественников, что позволяет восполнить истощенные клетки.Они делают это независимо от специфичности своего антигенного рецептора и независимо от Т-клеток. Эти данные свидетельствуют о том, что B-клетки передают свой защитный эффект на костный мозг с помощью механизмов, которые не требуют ни образования иммунологического синапса между B и CD4 ⁺ T-клетками, ни секреции антиген-специфических антител (67). Исследования клеточного отслеживания перенесенных В-клеток мышам IFrag ^{— / —} не показали признаков их накопления в костном мозге, но показали, что они преимущественно находятся в селезенке и, в меньшей степени, в легких и прилегающих лимфатических узлах.Эти данные убедительно свидетельствуют о том, что В-клетки могут влиять на исход системных воспалительных эффектов легочной инфекции Pneumocystis , либо напрямую модулируя врожденные иммунные пути, инициированные в легких, либо обеспечивая регуляторные функции, которые мешают нижестоящим специфическим воспалительным путям. Хотя кроветворение стимулируется воспалительными сигналами, предназначенными для ускорения клеточного созревания и мобилизации воспалительных клеток к месту инфекции (см. Ссылки 68 и 69), обильные воспалительные стимулы могут быть вредными для функций гемопоэтических стволовых клеток, частично за счет индукции функционального старения, например результат пролиферативного истощения (63, 70).Однако механизмы, которые уравновешивают эти эффекты на кроветворение, все еще плохо определены, и наша модель демонстрирует критическую роль В-клеток в защите кроветворения во время ранних врожденных ответов на легочную инфекцию Pneumocystis .

В соответствии с этим наблюдением, В-клетки с регуляторной иммуносупрессивной активностью (Breg) были определены в популяциях клеток как фолликулярной, так и маргинальной зоны (см. Ссылки 71 и 72). Breg фолликулярного происхождения являются регуляторами адаптивного иммунитета и способствуют этой активности антиген-специфическим и зависимым от В-клеточного рецептора образом.Напротив, В-клетки маргинальной зоны действуют как привратники врожденного иммунитета, которые модулируют созревание и функцию клеток врожденного иммунитета, включая дендритные клетки (ДК), что приводит к глубокому подавлению иммунитета. Связь между этими «врожденными» В-клетками и DC, по крайней мере, частично облегчается за счет секреции IL-10 и взаимодействия лиганда CD40-CD40 (CD40L) (73, 74). Хотя как фолликулярные В-клетки, так и В-клетки маргинальной зоны способны продуцировать значительные количества ИЛ-10, врожденные В-клетки способны продуцировать ИЛ-10 независимо от стимуляции, опосредованной В-клеточными рецепторами, но в результате активации врожденного иммунитета (75 ).

Точно так же IFN типа I могут быть иммунорегулирующими и способствовать продукции IL-10 и IL-27 в клетках врожденного иммунитета, таких как дендритные клетки, и подавлять опосредованную воспалением иммунную активацию (56, 76, –78). Это представляет интерес, поскольку предыдущая работа на нашей модели дисфункции костного мозга, вызванной инфекцией легких Pneumocystis , показала, что эти системные эффекты могут быть вызваны избыточным количеством Toll-подобных рецепторов (TLR) и, особенно, путями иммунной активации, опосредованными воспалениями, вероятно из-за отсутствие IFN-индуцированной иммунной регуляции (51, 52).Неожиданно мы обнаружили, что перенос В-клеток мышам IFrag ^{— / —} не изменял профиль индикаторных цитокинов сыворотки IL-12, IL-1β и IFN-γ после инфекции легких Pneumocystis по сравнению с непереносимыми мышами. Однако уровни сывороточного IL-10 в сочетании с IL-27 и антагонистом рецептора IL-1 (IL1Ra) были значительно выше у мышей IFrag ^{— / —} , перенесших В-клетки, по сравнению с непереносимыми мышами. В-клетки могут продуцировать ИЛ-10; однако, IL-27 и IL1Ra в первую очередь являются медиаторами, происходящими из моноцитарных / дендритных клеток, с иммуномодулирующей активностью.В частности, IL-27 функционирует как вышестоящий регулятор продукции IL-10 в клетках врожденного и адаптивного иммунитета, тогда как IL1Ra индуцируется IL-10 и модулирует опосредованную IL-1 активность (79, –82). Это предполагает модулирующую роль В-клеток в ответах ДК / макрофагов в нашей системе.

Работа других исследователей уже продемонстрировала иммуномодулирующую роль IL-10 в легочном ответе на инфекцию Pneumocystis . Куреши и др. показали, что мыши IL-10 ^{— / —} демонстрируют повышенную кинетику клиренса у CD4 ⁺ Т-компетентных мышей, но повышенное повреждение легких на моделях с истощением Т-лимфоцитов CD4 ⁺ (83).Кроме того, Ruan et al. продемонстрировали, что локальная доставка вирусного ИЛ-10 в подходе, аналогичном генной терапии, на модели мышей способна подавить легочное повреждение, вызванное гипервоспалительным ответом, который обычно следует за восстановлением иммунитета в результате легочной инфекции Pneumocystis низкой степени злокачественности. (84). Таким образом, мы сначала оценили, в какой степени полученный из В-клеток ИЛ-10 способствует защите от недостаточности костного мозга в нашей системе, сравнивая эффективность В-клеток, неспособных продуцировать ИЛ-10 (ИЛ-10 ^{— / —} В-клетки). к клеткам дикого типа для защиты от недостаточности костного мозга при переносе мышам IFrag ^{— / —} .Хотя мы были удивлены, увидев, что В-клетки, перенесенные от мышей IL-10 ^{— / —} , были так же способны поддерживать активность гематопоэтических предшественников в костном мозге, как и В-клетки дикого типа в течение инфекции легких Pneumocystis , количество количество зрелых нейтрофилов явно снижалось по сравнению с мышами, перенесшими В-клетки дикого типа, на 16 день после инфицирования. Это предполагает, что IL-10 может играть важную роль в защите от механизмов, которые ускоряют повышенный клеточный оборот созревающих клеток костного мозга, но что он не имеет отношения к защите функций предшественников.Хотя это наблюдение согласуется с нашим представлением о двустороннем механизме патогенеза недостаточности костного мозга в нашей модели (51), анализ цитокинов сыворотки показал, что сывороточные уровни IL-10 ^{— / —} B-клеток — количество перенесенных мышей все еще было выше, чем у непереносимых мышей, и почти так же высоко, как и у мышей, которым были перенесены В-клетки дикого типа. Таким образом, перенесенные В-клетки действительно могут модулировать функции клеток врожденного иммунитета в легких и селезенке, чтобы также стимулировать регуляторные дендритные клетки или макрофаги, способные продуцировать IL-10 и другие регуляторы врожденного иммунитета (см. Ссылки 85 и 86).Это открытие согласуется с сопутствующей активацией IL-10, IL-27, а также IL1Ra, наблюдаемой у мышей IFrag ^{— / —} , перенесших В-клетки (80, 87, 88). В подтверждение этого мы обнаружили в предварительных экспериментах, что совместное культивирование В-клеток с легочными CD11b ⁺ MHC ⁺ CD11c ⁺ или CD11c ^— клетками (макрофагами / DC), выделенными из IFNAR-дефицитных мышей на 10-й день после Pneumocystis Инфекция легких значительно усилила секрецию иммуномодулирующего цитокина IL-27 после стимуляции сложным эфиром форбола по сравнению с культурами из легких CD11b ⁺ CD11c ⁺ или только макрофагов CD11c ^— / DC (данные не показаны).

Поскольку IL-27 является как непосредственно иммуномодулирующим, так и вышестоящим регулятором IL-10 (56, 60, 89), мы затем обрабатывали мышей IFrag ^{— / —} IL-10 и IL-27 либо отдельно, либо комбинировали в течение инфекции легких Pneumocystis , чтобы оценить исход при недостаточности костного мозга в нашей модели. Эти эксперименты показали, что IL-10 и, в меньшей степени, IL-27 уменьшали потерю зрелых клеток костного мозга, обычно видимых на 10-й день после инфицирования, а IL-27 был особенно способен улучшать активность предшественников в течение 16 дней после инфицирования.Хотя эти методы лечения были не так эффективны, как сам перенос В-клеток, они подтверждали роль обоих цитокинов в защитной способности В-клеток костного мозга. Одним из аспектов, вероятно, способствующих снижению эффективности лечения цитокинами, может быть неспособность поддерживать постоянные уровни цитокинов, достаточные для обеспечения оптимальной защиты. Кроме того, дополнительные факторы, еще не определенные и / или не протестированные, могут усиливать опосредованные В-клетками эффекты. Учитывая, что мы прогнозируем значительную роль обильных иммунных эффектов, опосредованных инфламмасомами, которые, по крайней мере, частично ответственны за наблюдаемые системные осложнения в нашей модели, повышенные уровни IL1Ra в сыворотке, наблюдаемые после переноса B-клеток, также могут играть значительную роль в B-клетках. -опосредованные защитные эффекты.Предварительные эксперименты с ежедневным введением более низкой дозы человеческого рекомбинантного IL1Ra (Kineret, 25 мг / кг / день) (55) не привели к удовлетворительным эффектам, а уровни человеческого рекомбинантного белка в сыворотке практически не определялись. Поэтому мы продолжим оценивать этот путь, используя увеличивающиеся дозировки и комбинированное лечение с другими иммуномодуляторами, чтобы четко определить роль IL1Ra в модулировании степени дисфункции костного мозга после инфекции легких Pneumocystis в нашей модели.Еще одним кандидатом, который в высокой степени продуцируется В-клетками и который еще не изучен, является иммуномодулятор остеопротегрин. Остеопротегрин действует как рецептор-ловушка для проапоптотического фактора TRAIL (TNF-связанный лиганд, индуцирующий апоптоз), а также фактора дифференцировки остеокластов RANKL (активатор рецептора лиганда NF-κB) (90, 91). И TRAIL, и RANKL однозначно активируются в костном мозге как лимфоцит-компетентных, так и дефицитных по IFNAR линий мышей по сравнению с IFNAR-интактными мышами и в результате легочной инфекции Pneumocystis .Мы знаем, что дисбаланс между этими игроками действительно существует, по крайней мере, у мышей IFrag ^{— / —} (92).

В заключение, мы смогли определить новую и расширенную роль В-клеток в модулировании результатов врожденного иммунного ответа на строго легочный патоген Pneumocystis , который в противном случае может иметь глубокие системные эффекты. Результаты, полученные с помощью нашей мышиной модели, могут отражать сценарии, актуальные для людей в условиях, когда IFN типа I могут быть подавлены и, следовательно, способствовать опосредованной воспалением иммунной активации (51).Помимо потери CD4 ⁺ Т-клеток, у ВИЧ-инфицированных существуют нарушения функций IFN и B-клеток типа I, и те же функции могут быть нарушены у пациентов, получавших глюкокортикоиды (44, –46, 48, 49, 93, 94). В частности, хотя гиперактивность В-клеток присутствует на ранних стадиях ВИЧ-инфекции, увеличение оборота В-клеток, функциональное истощение и потеря функции памяти сопровождают прогрессирование заболевания, связанного с ВИЧ (95, 96). Кроме того, лечение глюкокортикоидами не только подавляет ответы IFN I типа, но также вызывает апоптоз в различных иммунных клетках, включая B-клетки (97).Ответы на IFN типа I и функции В-клеток также снижаются при старении (98, –101), что приводит к латентной стадии подавления иммунитета и восприимчивости даже к инфекции Pneumocystis низкой степени (102). При любом из этих состояний системное воспаление является обычным явлением, а о дисфункции костного мозга часто сообщают без четкой патогенной связи (63, 64, 103, –110).

Хотя легочная инфекция Pneumocystis , безусловно, не является основной причиной всех дисфункций костного мозга, наша модель иллюстрирует взаимосвязь систем органов во время воспаления и расширенную роль, которую Pneumocystis может играть не только как легочный условно-патогенный микроорганизм, но также и как триггер серьезных системных сопутствующих заболеваний.В этой работе подчеркивается критическая роль, которую IFN типа I играют в модулировании местных ответов на этот вездесущий, часто недооцененный патоген, и более широкие функции, которые B-клетки выполняют в обеспечении успешных иммунных ответов во время инфекции Pneumocystis . Они делают это, также регулируя индукцию ранних врожденных иммунных путей, независимо от их роли в очищении от патогенов.

Составление, стабилизация и инкапсуляция бактериофага для фаговой терапии

На фоне глобальной устойчивости к антибиотикам и растущего осознания важности микробиоты человека возродился интерес к потенциальному использованию бактериофагов в терапевтических целях, известных как фаги. терапия.Ряд клинических испытаний фазы I и II фаговой терапии завершился, и они показали, что фаги не вызывают серьезных проблем с безопасностью. В этих клинических испытаниях использовались простые фаговые суспензии без какой-либо рецептуры, и стабильность фага имела второстепенное значение. Фаги имеют ограниченную стабильность в растворе и претерпевают значительное падение титра фага во время обработки и хранения, что неприемлемо, если фаги должны стать регулируемыми фармацевтическими препаратами, где стабильная дозировка и четко определенные фармакокинетика и фармакодинамика составляют de rigueur .Исследования на животных показали, что эффективность результатов фаговой терапии зависит от концентрации фагов (т. Кроме того, исследования in vitro и на животных показали важность использования фаговых коктейлей, а не отдельных фаговых препаратов для достижения лучших результатов терапии. Снижение концентрации фагов in vivo из-за взаимодействий с антителами хозяина или другими механизмами клиренса может потребовать повторного дозирования фагов или подходов с замедленным высвобождением.Моделирование динамики популяций фагов и бактерий подтверждает эти положения. Удивительно мало внимания было уделено влиянию состава на результаты фаговой терапии, учитывая потребность в коктейлях с фагами, где для каждого фага в коктейле может потребоваться существенно другой состав, чтобы сохранить достаточно высокую инфекционную дозу.

В этом обзоре в первую очередь рассматриваются клинические потребности и проблемы (полученные из обзора ключевых исследований на животных по оценке фаговой терапии), связанные с лечением острых и хронических инфекций, и движущие силы инкапсуляции фага.Важным фактором для разработки и инкапсуляции является срок годности и хранение фага для обеспечения воспроизводимых дозировок. Другие движущие силы включают составление фага для инкапсуляции в микро- и наночастицы для эффективной доставки, инкапсуляцию в реагирующие на раздражители системы для инициированного контролируемого или длительного высвобождения в целевом месте инфекции. Инкапсуляция фага (например, в липосомы) также может использоваться для увеличения времени циркуляции фага для лечения системных инфекций, для профилактического лечения или для лечения внутриклеточных инфекций.Затем мы переходим к документированию подходов, используемых в опубликованной литературе по составлению и стабилизации фага для хранения и инкапсуляции бактериофага в микро- и наноструктурированных материалах с использованием сублимационной сушки (лиофилизации), распылительной сушки, в эмульсиях, например мази, полимерные микрочастицы, наночастицы и липосомы. Поскольку фаговая терапия приближается к фазе III клинических испытаний, обзор завершается рассмотрением многообещающих новых подходов к микро- и наноинкапсуляции фагов и того, как они могут устранить пробелы в этой области.

баяни далла-далла, да саке дубава

A asashe da dama na duniya a cikin hunturu snow. Кума я таба саука дага дуце фи. Дук локачин да мутане сун ƙirƙira na’urorin дон таймака тафи кан снежная поверхность ба таре да нитсева вараи. А коли на ваданнан на’урори сун зама на мусамман инджи — снегоходы. Суна Халаттар да Вани Мутум Зува Ба Кавай Моцава Та Цикин Дусар Шанхара, Амма Кума Йи Ши Да Саури Кума Ба Таре Да Кокарин. Мусамман вури не шагалтар да дуцэн снегоходы.Ваннан дабара не ака йи нуфи яфи га ниша, кума амма мафи яван ши ан йи айки та ханьяр м мафита кан ши. Сабода хака, абин да аке кира «Горник» — технологически мафи м да цада, да кума хава кан су — да ява да карфи да кума м.

Царин да снегоход

Горные снегоходы daga takwarorinsu halin da ikon matsawa a matsananci kusassari kan sako-sako da kuma zurfin snow. Тун кавай хаскен абин хава за а ия кома (хар зува 250 кг), цикин абин да лоу науи он же саму сики хар да та ярость таазийя.

Снегоход Caterpillar dutsen dogon (144-163 inci) m, tare da manyan lugs. Ваннан зане яна ба ка дамар вауринта дук дрейфует, снегоход амма ши дагула гуданар да вани. Saboda haka, ma’adinai kayan kafa ma fadi da kayan gudun kan. Амма га ваƙои, абин да ши не фади, мафи барга, кума управляемая наура. Superwide matafila a kan dũtse snowmobile ya kira nuna alama Biyu hanya inji.

Двигатель снегохода dutsen ya zama m, na ba kasa da 600 куб.м. Дуби, идан лита, кума, камар йадда май мулкин (саке, гвагвармаяр науи асара), бийу-бугун дзини.Кума да значок ракаа он же кага та йи айки разреженный иска а сако-сако да дусар Шанƙара саньяя царин ба дон хака доле, дон хака да радиаторы гуду сосай кананан.

Подвеска га тафияр да ал’амарин моци санье взять пневмоамортизатором.

Kuma, увы, da fasinja tafi a kan dutsen en za su kasa — da snowmobile Single.

Снегоходы-кроссоверы Very kusa da tuddai, amma suna da fadi ski, mafi tasiri, amma kuma mafi tsanani sanyaya tsarin, mafi makamashi m dakatar dampers ya kuma inganta da yawa fiye da nauyi.

снегоходов masana’antun

Горные снегоходы samar da yawa kera irin wannan kayan aiki. Domin daukaka и cikin kasuwar yãƙi iri: Canadian Ski-Doo, Kawasaki Asiya da American Polaris kuma Arctic Cat.

Горнодобывающая промышленность Канадский ири Ски-Ду санье берет да бию-бугун джини инджуна амфани E-Tec fasahar kyale man fetur allura a karkashin babban matsin lamba kai tsaye a cikin konewa jam’iyya. Камара да канта не а наурар да дамар йа он да человек фетур габа Шайа а чикин йадудука, камар дизал инджуна.Бугу да кари, да канад инджи дандали самар саукака саукова диребан да кума высокая управляемость та чанджава куса да чибияр да науи на матукин джиргин да кума вурин зама — габа. Wannan shafin ba ka damar sarrafa na’urar tsaye снегоход.

Rarrabe fasali na snowmobiles Kawasaki — yana da gaske gudu da kuma AMINCI, управляемость да kuma ‘yanci. Двигатель Injiniyoyi Amfani Ba Kawai Aluminium, Amma Titanium Da Magnesium Gami.

Снегоходы Polaris Rush ne sauki su shiga cikin jũya, suna kara zuwa high gudu, abin dogara da kuma samun kyakkyawan.Daidaitacce dakatar gyara karkashin nauyin musamman matukin jirgi.

Зимний инджи арктический кот — не дзимири да кума Чарфин хали. Shasi Twin Spar, ci gaba da kamfanin, qara permeability na snowmobile, da raya dakatar Fas Track tare da ara arfin iya tsayayya ko da karfi naushe.

AMINCI — отличительная черта hunturu motoci Manyan Waje masana’antun. Mafi m sassa na snowmobiles — shi SUPPLiES da kuma sassan da za a maye gurbin lokacin shirya tabbatarwa.

Раша кера ОАО «Раша камфанин», «Веломоторс» да сауран карами Предприятия нуна яфи утилитарные снегоходы, абин догара да кума м, м на дауке да ба кавай фасиндзёдзи амма кума кая а кан аке инь дусар Шанƙара ханья.

Снегоходы Domin Ski-Doo duwãtsu

Снегоход A shekarar 2015, mafi kyau dutsen aka gane a matsayin Ski-Doo T3 taron koli.

Модель biyu sabon на гусеницах mallakar tajirai nisa с 16-дюймовыми гребнями уку.

Мусамман дон ваннан инджи да ака Шулло да вани сабон матафила дзане на самар да аке будата жесткость да кума способствует высокому гудун зирга-зирга и кан вани м гангара.

New gaban dakatar Response Angle Suspension bambanta daga ta — аналоги удлиненных шпинделей диаметром 10 мм.Снегоход Ba su ƙara nauyi zuwa ga, amma kiyaye hanci a kasa da kuma yin shi sauki don sarrafa dogon shasi на поворотах.

Canza da kuma raya dakatar tMotion, da kuma kayan gudun kan. Новый каян гудун кан пилот DS3 саму я кару выступы да ребристые сама на санья на хур каян.

Hur garwa zanen wuya, Hur Luma sunã mãsu kasãla, кума шкивы кома дага модель на байя.

Снегоходы для скоростного спуска bambance-bambancen karatu X163 da X174 ne waƙoƙi daban-daban tsawon: 4.14 да кума 4,5 м, би да би.

Снегоход Ski-Doo: отзывы

Gwaji da sabon mota da mafi tsawo matafila, da matukan jirgi sake biya haraji ga Rotax 800 engine damar 163 lita. вани. га м бугун кира на шаури, бабу хаяки да кума абин ƙи сева для бию-бугун дзини нехарактерно.

Ваданда м иса я хау вани сабон самфурин да вани кусан бияр-мита матафила, ба мурна сосай. Мун лура сева га чикаккен ватсувар да м букатар снегоход снег сосай сева вурарен да сева гамсар да ваннан янайин, а Раша не кавай ян, да кума дуния ба яфи.Wannan shi ne na farko, ba za mu iya ce cewa rashin, amma … saura ragowar.

Na biyu shi ne ba ma m lokacin, tam nasaba da farko, shi ne cewa dogon hanya, duk da gagarumar fasaha mafita, но модель танадина ярости. Идан вани снегоход дон самун то да уя ко науи ригар снег, саан нан саррафа су зама кавай да дан васа-тяжелоатлет. Kuma ya haƙa a cikin dusar anƙara, da kuma idan kasa, sa’an nan ba yawa, fiye da da «uwan» tare da wani guntu ski.

Снегоходы Nawa ne wadannan? ваданнан фарашин: милиян 1.2 руб. Доле му бия домин модель X163 да милиян 1,3 руб. — Домин X174 2015 года выпуска. Новый X174 камар на шекара та 2016 я касанс а куса да милиян 1,6 руб.

Снегоходы ga zafi Polaris

Polaris 800 RMK Pro ƙasa Dominator 2015 выпусканедаром кира мафи м. Автор: Яван Кяутаюва А Дайя Модель Ши Не Шугаба Цикин Аджин. Дая матсалар — издание вата ияка, дон хака ба су саму дук масоя на мацананчи спускается дага маке инь дусар Шанхара кололува.

Снегоход Dukan kewayon Polaris RMK Pro yana da matukar low nauyi, shi ne kasa da 200 kg an yi amfani da aluminium da kumshin kayan a yi.

Model 800 Polaris Switchback Assault — кроссовер, amma tare da dutsen matafila Series 4.0 iya samu nasarar isa da na fi duwãtsu. Ба камар гаргаджия туддай, он же шигар да вани карфи саркар чанджа вури да саркар звездочки. А на бая дакатар сака матафила 144 инчи догон, ванда я самар да вани м м снег кьяу проницаемость.

Tuƙi tara tare da mai lankwasa iyawa kasa da wurin zama fadi da kuma dan kadan fiye da dutsen model, m Gudun allon ba su tsoma baki tare da Hybrid crossover ji m, kuma a kan dutsen gangara (ko da tare da wuya asa май сананин крутизна дигири), кума м лебур снег.

Отзывы на снегоход Polaris

Polaris 800 Switchback Assault da wani двигатель damar 154 lita. c., куна хукунта да сакэ дубава, ши ведет себя на снегоходе камар настоящий дуцен. Ya aka mugun gudu a cikin wani karamin yanki, shan m hawa, clings ta mikawa Trakia ga gangara har lokacin giciye-zirga-zirga. Инджи ши не ия райайе равар даджи, хар ма да на догон локачи дон моцава а кан дайа ваа таре да каян гудун кан да кума баббан цалле, май гаскатава га хукума габатар да баянаи.

Net na gogaggen matukan jirgi la’akari kawai babban isa bushe nauyi. Ko sama da 10 кг, idan aka kwatanta da gaske dutsen model, управление снегоходом rinjayar. Амма модель таре да вани ико да двигатель да икон цалле да кума равар даджи да ака ба асали нуфин сабон шига. Амма ши не на кова да кова кума заи ия баяр да ярдарса зува га маи ши да кума а цикин дувацу, да кума кан cushe hunturu ханья.

Каян аики Arctic Cat

Arctic Cat M7000 Sno Pro 153 модель кира мафи кяу мафари дуцен матукан джирги.Caterpillar 153 inci — da cewa talakawan tsawon — снегоход инь маневренный isa kuma a lokaci guda hõrarriya ko gangara har zuwa 80 °.

Двигатель cikin wannan model hudu, a teku matakin, shi jimloli damar 135 lita. вани. Производитель — Kawasaki. Снегоход с 600-кубовым двигателем wanda aka dauka kai tsaye daga Arctic Cat, iya samar da 114 lita. вани. ProClimb M6000 Sno Pro — это новая модель.

M7000 shasi ga mota ba sabon, na Kawasaki injuna riga an shigar da a kan snowmobiles Arctic Cat, amma da zane — sabon.Caterpillar PowerClaw баяр с проушинами 2.6 inci ba ga tsawo. Задний дакатар да иска дакатар Фокс тасо кан рува 3 и бая да кума Arctic Cat IFP gaban. Спереди — передняя подвеска Arctic Cat Race, рычаги с разнесенными шпинделями A-dimbin yawa. A gaskiya wannan tsarin shi ne mafi kyau dace da sabon shiga, sai ka ce m, ya ce dumi sake dubawa game da shi.

Domin da wuya jinsi a kan gangara ne wani sabunta model — Arctic Cat HCR 8000. Yana sanye take da wani biyu-bugun jini engine damar 800 cc Suzuki.cm zuwa 163 лит. вани.

Модель Ваннана, да низа цаканин каян гудун кан 1016-1041 мм, кан релуве да слизь кан коване цинкая не м иякоки да сева каре матафила дага лалачева идан ка ба зато ба цаммани хаду ледяная ханьяна цынджед янкин а. Домин када я кара да таро, да занен выбрал цайе туи шафи да цаяйен мисали цаво на 139 мм, амма санья ши иува а майе гурбин ши кан тара вани дабан-дабан цаво. Su ne a cikin производителя ta kasida.

Shasi Arctic Cat ProClimb Sabon ba.An riga an yi kokari a kan sauran model.

Жесткие поглотители буга a hade tare da wani ajali dabaran da kuma kunkuntar ski sigogi, matafila da high ridges da kuma taurin 85 baki A, da kuma ko da wani haske racing wurin zama — duk da nufin lashe tseren a kan m snow a cikin duwatsu .

kawasaki

Все снегоходы Япония kamfanin sanye take da hudu-bugun jini injuna. Су не масу ико, амма довольно науи. Снегоход тогия не «Кавасаки 540 Викинг», двигатель cikin wanda wani hur biyu-bugun jini, утилитарная модель amma Sia, duk da mun gwada low nauyi da kuma fadi da waƙoƙi.

Длинногусеничная гяра Phazer M-CA силовая установка да Farawa 80FI гирма на 0,5 литра да 80 литров. вани. да фарко калло, ши не ба су даце дон шаво кан дуцен эн. Амма да наура май сауки нэ, тун да м рама не я санья дага алюминий, казалика да ява васу ака гьяра да кума каяйякин гьяра, цики хар да вани бию-фистан суппорт диск бирки, да кума проворный, м менеджмент. Kuma mafi muhimmanci — снегоходы abin dogara, kamar yadda duk «Kawasaki».

снегоход Halaye Kawasaki MTX 153 daga MPI Turbo маневренный shasi matafila PowerClaw да высокие проушины да кума на ƙwarai high matsa lamba buga амортизаторы кан габа да рая дакатар дамар сака ваннан модель а лайи таре инджи ва мафи гайау много шугмо самар сугмо duwatsu, da kuma abin da suke Polaris Ski- doo.

Снегоход Kawasaki: отзывы

Bisa ga matukan jirgin, снегоход kananan Motors Phazer — kadai drawback na inji, wanda aka nuna ne kawai a wani sosai sako-sako da kuma zurfin snow.

Амма да взять дауки га рада да кума м на поворотах, ванда я нуна да «фазер», доминировать на длинногусеничных снегоходах непривычно.

Shin muhimmi da wani amfani — ikon sauƙi canja wurin wani saukowa bayan tsalle жесткость, abin da ya bambanta кроссовер снегоходы «Кавасаки».

Халайе на ваннан царин ши нэ, ба шакка, мафи шарри дага яу цанани туддай. Амма да дакатар, ванда яна да баббан гефе да аминчи, абин догара да кума, мафи мухимманчи, бережливый двигатель, казалика да сосай мулкин демокра фарашин — май кьяу фарко га вани мафари.

Снегоход «Ermak»

Rasha matukan jirgin, tare da kwarewa da shekaru goma ko fiye tuna da rashin zabi a cikin waɗancan kwanaki, idan kawai samuwaardar ya «Buran» — m biyu snowmobile tsarawan liki da kuma .

Яу знатоки габатар Раша та сабон снегоход «Ермак» дага камфанин Веломоторс «, да нуфин майе гурбин м» Бурана «. Амма ши нэ, ба вани васа, кума ба ко да вани дуце — ши не на яу да кулум ма’аикачин утилитарный нуфи. Ко да яке дайа дага чикин ири бийу байяр да вани догон матафила на вани абу а чикин ваннан мота бию, кума дайа ски. Двигатель Biyu-Silinda на каса да 600 cc iska sanyaya jimloli ikon kawai 50 lita. wani kuma. Двигатель 800cc да рува саньяя, амма ши не худу.

Генерал, снегоход кира ба вани абу да дуцен ко да васанни ба кунна харше.

Кума яу ши не кавай сабон Раша масана’антун. Har yanzu ba su dõgara a kan tsada nisha kayan aiki, fifita, don samar da low cost, matsayin karshe mafaka, модель снегохода yawon shakatawa. Kuma magoya matsananci wasanni a kan yi dusar anƙara, kololuwa har yanzu suna da zabi — at muhimmanci mafi girma farashin — daga sanannun касашен вадже бренды снегоходов gaske dutsen.

Цены на снегоходы

Taron SP 600HO E-TEC 146 Saki 2014, wanda farashin — 950.000 рублей, яна дауке да мафи цада инги Ski-Doo канадский камфанин. Снегоход мафи цада да та — вани сабон тарон коли XT3 174 800R E-TEC $ милиян 1,6 руб.

Daga kamfanin Polaris Snowmobile 600 PRO-RMK 155 (2014) с двигателем мощностью 125 л.с. вани. Яна за а ия сая дон 760 дубу рублей. Яу ши не мафи арха модель на «Полярис». Мафи цада — 800 PRO-RMK 163 3 inci (2016) тара с 154-сильным двигателем. Яна за а ия сая дон 1,33 милиян руб.

Горный снегоход с 500-кубовым двигателем wanda tasowa a gwada low ikon (80 л..) — Kawasaki Phazer M-CA (2015) — za a iya saya don dubu 700, da kuma sabon SR Viper X-CA (2015) tare da hudu-bugun jini engine juz’i na fiye da dubu cubes — за 1,1 милиян руб.

Farashin tuddai daga Arctic Cat dabam daga 650 dubu ga M 8000 153 HCR (2015) тара на 800 куб. См двигатель 160 л. вани. har zuwa 780 дубу руб. га М 8000 162 СНО ПРО (2015).

Сабода хака, дуцен снегоходы а ​​кан Раша касувар яу ба надири, дук да чева м кера майар да ханкали кан самар да инги дон амфанин яу да куллум а цикин сарарин аке инь дюсар Шанхара просторы на Сибири да кума Дальний Август.дон такамаиман каян айки фарашин су нэ довольно высоко, амма горный экстрим — ниша ба га кова да кова. Амма сасса на снегоходах Самува, Диллалай м да Кума модель и сабунта кусан в Коваче шекара.

сополимерных наночастиц PCL / PEG: потенциальные наноплатформы для доставки противоопухолевых агентов

Тянь Чжоу, 1 Цинлей Донг, 1 Ян Шэнь, 2 Вэй Ву, 1 Хайде Ву, 1 Сянлинь Ло, 3 Сяолин Ляо, 4 Гуйсуэ Вангиор 1 Научная лаборатория Кей для биологических исследований и технологии Министерства образования, Государственная и местная совместная инженерная лаборатория сосудистых имплантатов, Биоинженерный колледж Чунцинского университета, Чунцин, 2 Институт биомедицинской инженерии, Школа доклинической и судебной медицины, Сычуаньский университет, 3 Колледж полимеров и инженерии, Сычуаньский университет, Чэнду, Сычуань, 4 Ключевая лаборатория нано / микрокомпозитных материалов и устройств в Чунцине, Школа металлургии и материаловедения, Чунцинский университет науки и технологий, Чунцин, Китайская Народная Республика Резюме: Микро / наночастицы могут оказывать неблагоприятное воздействие на сердечно-сосудистую систему и увеличивать риск событий, связанных с сердечно-сосудистыми заболеваниями.Наночастицы, полученные из поли (этиленгликоля) (ПЭГ) -b-поли (ε-капролактон) (PCL), а именно PEG-b-PCL, широко изученного биоразлагаемого сополимера, являются многообещающими носителями для систем доставки лекарств. Однако неизвестно, вызывают ли полимерные нано-мицеллы PEG-b-PCL потенциальные осложнения сердечно-сосудистой системы. Рыбок данио использовали в качестве модели in vivo для оценки воздействия нано-мицелл PEG-b-PCL на развитие сердечно-сосудистой системы. Результаты показали, что нано-мицелла PEG-b-PCL вызывала гибель эмбрионов, а также пороки развития эмбрионов и личинок в зависимости от дозы.Чтобы определить влияние нано-мицелл PEG-b-PCL на эмбриональный ангиогенез, с помощью флуоресцентной стереомикроскопии исследовали критический процесс сердечно-сосудистого развития рыбок данио, рост межсегментарных сосудов (ISV) и каудальных сосудов (CV) у трансгенных эмбрионов flk1-GFP рыбок данио. Также была проанализирована экспрессия киназы 1 печени плода (flk1), ангиогенного фактора, с помощью количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (кПЦР) и гибридизации in situ целиком.