Apresys pro 550: Apresys — лучшие лазерные дальномеры!

Содержание

Лазерный дальномер Apresys PRO 550 Black

Apresys PRO 550 — компактный 6-ти кратный недорогой лазерный дальномер. Измеряемые расстояния от 10 до 550 метров. Несмотря на доступную цену, лазерный дальномер Апресис обладает всеми необходимыми стрелку и туристу функциями. Прибор способен измерять и отображать прямое расстояние до цели, угол, под которым производится измерение, высоту цели и горизонтальную проекцию линии замера. Все дальномеры Apresys имеют функцию сканирования, которая помогает измерить расстояние до сложной, малоразмерной цели или в условиях отсутствия опоры для рук. Результат измерения отображается в метрах или ярдах. Многослойное просветляющее покрытие линз обеспечивает яркое и насыщенное изображение. Дальномер имеет диоптрийную подстройку окуляра. Корпус дальномера защищен от попадания влаги и брызг. Ресурс батарейки — более 3000 измерений. Комплект поставки: дальномер Apresys,  батарейка, защитный чехол, ремешок для ношения на плече, инструкция на русском языке, гарантийный талон.  Гарантия производителя 1 год.

Цвет — черный.

ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЛАЗЕРНОГО ДAЛЬНОМЕРА APRESYS PRO 550

Модель:

Pro 550

Powerline 800

Powerline 1000

Powerline 1200

Дальность (м):

9…550 +/-1

9…800 +/-1

9…1000 +/-1

9…1200 +/-1

Объектив (мм):

6×25

6х25

6×25

6×25

Дисплей:

ЖК

ЖК

ЖК

ЖК

Замер по прямой:

Есть

Есть

Есть

Есть

Замер по горизонтали:

Есть

Есть

Есть

Есть

Замер высоты цели:

Есть

Есть

Есть

Есть

Индикация угла

Есть

Есть

Есть

Есть

Одновременный вывод показаний на дисплей

Нет

Нет

Нет

Нет

Режим «Охота»

Нет

Есть

Есть

Есть

Режим «Гольф»

Нет

Есть

Есть

Есть

Диапазон угломера

+- 60 Град

+- 60 Град

+- 60 Град

+- 60 Град

Режим сканирования

Есть

Есть

Есть

Есть

FOV (m. @ 1000 meters)

121

121

121

121

Настройка диоптрий:

Есть

Есть

Есть

Есть

Габариты (мм)

120x70x39

120x70x39

120x70x39

120x70x39

Вес нетто (грамм):

190

190

190

190

Питание:

3V, CR2

3V, CR2

3V, CR2

3V, CR2

Индикатор разряда батареи

Есть

Есть

Есть

Есть

Товары, Сделано в Китае Apresys (Shanghai) Precision Photoelectric Limited

Перечень Продукций(Всего

10 Товаров)

Функции:установленным монокуляром легко вести/лазерного дальномера со смотровым расстояние (SD), КРЕНОМЕР …

MOQ:

200 шт.
Стандарт: CE, RoHs
Происхождение: China
Код ТН ВЭД: 9015100000
Производительность: 500PCS/Month

Свяжитесь Сейчас

Одноразовые USB температура сухого льда регистратора данныхрегистратор одноразового использования для …

MOQ:

50 шт.
Использование: Кондиционер
Использование: Холодильник
Использование: Сушильное Оборудование
Использование: Вентиляция
Использование: Очиститель Воздуха
Сертификация: ISO

Свяжитесь Сейчас

Одноразовые USB-регистратора данных температуры для однократного применения модели # …

MOQ: 200 шт.
Использование: Холодильник
Сертификация: CE
Тип управления: Цифровой
Тип: Датчик Температуры

Свяжитесь Сейчас

Apresys USB-регистратора данных температуры с точностью ± 0.5C точности модели#: 179-UTтехнические …

MOQ: 50 шт.
Использование: Кондиционер
Использование: Холодильник
Использование: Сушильное Оборудование
Использование: Вентиляция
Использование: Очиститель Воздуха
Сертификация: CE

Свяжитесь Сейчас

Лазерный дальномер Apresys PowerLine 800

Дальномер лазерный Apresys PowerLine 800 предназначен для быстрого определения дистанции, углов и высоты объекта. Представляет из себя комбинированный прибор состоящий из оптического монокуляра и непосредственно лазерного дальномера.

PowerLine 800 излучает невидимые и безопасные для человеческого глаза инфракрасные лазерные импульсы. Условия освещенности (пасмурное небо или солнечный день) влияют на измерения прибора. Наименьшее освещение (пасмурный день) дают максимальную дальность. На результаты измерения также оказывает влияние и цвет и форма объекта. Черный цвет является поглощающим, а красные и блестящие поверхности обладают большим отражением и дают возможность для определения дальности более удаленных предметов. Малые размеры цели наиболее трудны для измерения дальности. Если поверхности цели перпендикулярны лазерному лучу, то обеспечивается более точное измерение дистанции. Данная модель подходит для измерения дальности до телеграфных столбов, мостов. Окуляр с удаленным выходным зрачком, с возможностью диоптрийной подстройки.


Особенности:

  • Точные измерения дистанций от 5 до 800 метров
  • Удобное управление
  • Измеряет углы и высоту
  • Увеличение 6 крат
  • Многослойное просветление всех оптических элементов
  • Ударопрочный корпус и защита оптических элементов от вибрации
  • Водонепроницаемый корпус выдерживает погружение в воду на глубину до 1 метра
  • Фокусировка окуляром


Характеристики:

  • Увеличение: 6 крат
  • Диаметр объектива: 25 мм
  • Поле зрения: 122 м/1000м
  • Диаметр выходного значка: 4,1 мм
  • Дистанция измерения: от 5 до 800 м
  • Погрешность измерения дистанции: +/- 0,5 м
  • Диапазон измерения угла: +/- 70 градусов
  • Погрешность в измерении угла: +/- 0,1 градуса
  • Экран: LCD
  • Питание: 3 В
  • Размеры: 106*68*36 мм
  • Вес: 190 г
  • Фокусировка: Вращением окуляра


Комплектация:

  • Чехол
  • Ремешок на руку
  • Мягкий футляр с нашейным ремнем
  • Гарантийный талон и Инструкция на русском языке

Тромбоцитферез — обзор | Темы ScienceDirect

Тромбоциты

Переливание тромбоцитов показано для профилактической или гемостатической терапии лицам с приобретенной или врожденной тромбоцитопенией или тромбоцитопатией. Компоненты тромбоцитов получают либо из донорской цельной крови, либо из сбора афереза. Для тромбоцитов, полученных из цельной крови (тромбоцитов), метод подготовки должен давать не менее 5,5 × 10 10 тромбоцитов на единицу не менее 75% единиц, протестированных на предприятии-изготовителе.В случае тромбоцитов, полученных из цельной крови, обычно непосредственно перед переливанием объединяют от 4 до 6 единиц для получения дозы, сравнимой с одной единицей тромбоцитов, полученных из афереза. Для тромбоцитов, полученных из афереза ​​(тромбоциты, ферез), метод сбора должен давать не менее 3 × 10 11 тромбоцитов на единицу не менее 90% единиц, протестированных на предприятии-изготовителе. Коллекции тромбоцитов с большим выходом можно разделить на две отдельные единицы тромбоцитов, полученных из афереза, также известные как разделений , при условии, что количество тромбоцитов в каждой единице больше или равно 3 × 10 11 .Условия хранения тромбоцитов, такие как объем плазмы, перемешивание и температура, должны быть оптимизированы для поддержания адекватного pH выше или равного 6,2 в 90% единиц, протестированных в конце утвержденного периода хранения. Как и в случае с эритроцитами, компоненты тромбоцитов часто модифицируются за счет уменьшения лейкоцитов, а в особых условиях тромбоциты могут быть дополнительно изменены облучением или промывкой. Кроме того, тромбоциты, полученные из афереза, могут быть перекрестно сопоставлены или сопоставлены по HLA для аллоиммунизированных лиц, у которых наблюдается плохой прирост тромбоцитов при случайных переливаниях тромбоцитов.

По сравнению с другими компонентами тромбоциты более чувствительны к различным условиям хранения. Хотя хранение в холодильнике или замораживании может показаться идеальным для замедления разрушения клеток и замедления роста бактерий, хранение тромбоцитов в холодильнике приводит к значительно худшему выживанию после переливания in vivo по сравнению с тромбоцитами, хранящимися при комнатной температуре. 97–99 Кроме того, тромбоциты, которые остаются нетронутыми во время хранения, менее эффективны, чем тромбоциты, которые перемешиваются на горизонтальной качалке, процесс, который помогает обеспечить оптимальный газообмен и поддержание pH. 125 Таким образом, для оптимального хранения тромбоциты необходимо осторожно перемешивать и поддерживать в диапазоне температур от 20 ° C до 24 ° C. Во время транспортировки период времени, в течение которого тромбоциты остаются без осторожного перемешивания, не должен превышать 24 часов, поскольку прерывание перемешивания более чем на 1 день приводит к значительному повреждению компонента. 126

Основная проблема с хранением тромбоцитов заключается в том, что комнатная температура и богатая питательными веществами плазма способствуют размножению бактерий. 127 Чтобы снизить риск значительной бактериальной нагрузки, утвержденный период хранения тромбоцитов ограничен 5 днями после сбора, 128 , даже если тромбоциты, хранящиеся в течение более длительных периодов, показывают приемлемую выживаемость in vivo. 31, 129 Даже при 5-дневном хранении бактериальное заражение тромбоцитов с последующей связанной с переливанием бактериемией или сепсисом было основной причиной заболеваемости и смертности при переливании крови. 1 Для решения этой проблемы в 23-м издании Стандарта для банков крови и служб переливания крови AABB ввел стандарт для учреждений крови, предусматривающий наличие методов, ограничивающих и обнаруживающих бактериальное заражение тромбоцитов.

Учитывая неспецифический характер стандарта, для тестирования бактерий используются многие методы, в том числе окрашивание по Граму или бактериальный посев, тестирование в месте оказания медицинской помощи путем определения pH / глюкозы и визуализация отсутствия завихрения, что является признаком нежизнеспособные тромбоциты. 1 Основным ограничением методов некультивирования является недостаточная чувствительность (от 10 6 до 10 7 КОЕ / мл) по сравнению с системами бактериального культивирования (от 10 2 до 10 3 КОЕ / мл или меньше) . 130–133 Следовательно, следует ожидать большего количества ложноотрицательных результатов с системами, не относящимися к культуре. Несмотря на большую чувствительность, метод бактериальной культуры имеет ограничения, связанные с большим объемом образца, необходимого для тестирования, и более длительным ожиданием результатов теста. В случае последнего ограничения тромбоцитарная единица может быть распределена и перелита до получения зарегистрированного результата посева, поэтому бактериальный статус во время или момент переливания может быть неизвестен. Как правило, для тромбоцитов, полученных из цельной крови, чаще используются методики по месту оказания медицинской помощи, поскольку объем, необходимый для бактериального посева, представляет собой более значительную потерю для этого продукта тромбоцитов меньшего объема.Тромбоциты, полученные из афереза, как продукт большего объема, лучше поддаются отбору образцов для бактериальной культуры и, следовательно, чаще тестируются методом бактериальной культуры с использованием образца, полученного в течение 24-48 часов после хранения. При использовании всех методологий, если будет получен действительно положительный результат, предприятие обязано поместить продукт в карантин, идентифицировать контаминирующий организм и, если он уже распространен, уведомить клиента и забрать продукт, если он не был перелит. Если продукт был перелит, необходимо уведомить клиническую службу для надлежащей оценки и лечения реципиента переливания.

Продленное (7-дневное) хранение тромбоцитов

Тромбоциты при комнатной температуре хранились до 2 недель с приемлемой терапевтической эффективностью. 102 Преимуществами расширенного хранения тромбоцитов являются улучшенная логистика, повышенная гибкость запасов и снижение затрат, связанных с уменьшением количества устаревших. 134 Хотя 7-дневное хранение было ранее одобрено FDA в 1980-х годах, 31 обеспокоенность повышенным риском связанного с переливанием крови сепсиса при длительном хранении при комнатной температуре побудила FDA ограничить хранение тромбоцитов до 5 дней.Однако с повышением чувствительности систем обнаружения бактерий для тестирования тромбоцитов, расширенное хранение тромбоцитов снова стало возможным. 133, 135 Позиция FDA по 7-дневному хранению тромбоцитов в настоящее время эволюционирует. В 2003 году FDA одобрило с ограничениями использование специальных систем сбора и хранения тромбоцитов для 7-дневного хранения тромбоцитов (COBE Spectra Apheresis System и Trima Automated Blood Collection System, Gambro BCT, Inc., Лейквуд, Колорадо.). В настоящее время объекты, одобренные FDA для 7-дневного хранения, должны соответствовать определенному протоколу бактериального тестирования, а утвержденные предприятия должны участвовать в постмаркетинговом исследовании применяемого протокола. 136

Предварительное хранение тромбоцитов

Исследования объединенных перед хранением тромбоцитов, полученных из цельной крови, показали удовлетворительные свойства in vitro и in vivo. 137–139 Хотя это обычная практика в Европе с тромбоцитами лейкоцитов, предварительное хранение тромбоцитов, полученных из цельной крови, не было одобрено в США из-за опасений по поводу повышенного риска роста бактерий в пулах тромбоцитов перед хранением. 140 С введением обязательного бактериального тестирования тромбоцитов в Соединенных Штатах стало очевидно, что наиболее чувствительные методы обнаружения бактерий основаны на автоматизированном бактериальном культивировании. Учитывая относительно большой объем образца, необходимый для бактериальной культуры, и увеличенное количество единиц для тестирования при однократном переливании, такие методы обычно не применяются для бактериального тестирования тромбоцитов, полученных из цельной крови. Обычно из-за этих ограничений менее чувствительные методы используются для бактериального тестирования тромбоцитов, полученных из цельной крови, по сравнению с тромбоцитами, полученными из афереза.Предварительное хранение тромбоцитов, полученных из цельной крови, обеспечивает достаточный объем образца для более чувствительных автоматизированных методов культивирования бактерий, тем самым повышая вероятность обнаружения бактерий и повышая безопасность тромбоцитов, полученных из цельной крови. Следовательно, в Соединенных Штатах возобновился интерес к предварительному хранению тромбоцитов, полученных из цельной крови. 141–143 Недавно FDA одобрило систему предварительного накопления лейкоредукции и объединения тромбоцитов, полученных из цельной крови, которая содержит интегрированную бактериальную культуральную систему для автоматического обнаружения бактерий (Acrodose PL, Pall Corporation, East Hills, NY).С улучшенными технологиями доступность и использование объединенных тромбоцитов предварительного хранения в Соединенных Штатах, вероятно, увеличится.

Ожидается, что к 2023 году мировой рынок афереза ​​достигнет 4200,6 миллионов долларов

ПОРТЛЕНД, Орегон и Пуна, Индия, 29 мая 2018 г. / PRNewswire / —

Согласно новому отчету, опубликованному Allied Market Research под названием «Рынок афереза ​​ по продуктам, методам, процедурам, компонентам и конечным пользователям: глобальный анализ возможностей и отраслевой прогноз, 2017–2023 годы », мировой рынок афереза ​​оценивался в 2560 долларов.4 миллиона долларов в 2016 году и, по прогнозам, к 2023 году достигнет 4200,6 миллиона долларов, при этом среднегодовой темп роста с 2017 по 2023 год составит 7,3%. На сегмент одноразового использования и реагентов пришлось четыре девятых от общей доли рынка в 2016 году.

(Логотип: https://mma.prnewswire.com/media/636519/Allied_Market_Research_Logo.jpg)

Система афереза ​​помогает в сборе и отделении компонентов крови для донорства. Кроме того, эта система может выполнять удаление или замену компонентов крови для терапевтических процедур.Американский национальный Красный Крест предлагает различные услуги терапевтического афереза ​​в США, включая плазмаферез, фотоферез, аферез ЛПНП и сбор стволовых клеток. Кроме того, в центре работает квалифицированный и специализированный персонал для проведения процедур афереза, сохраняя при этом доступность и доступность. Увеличение количества таких центров крови по всему миру значительно стимулирует рост рынка афереза.

Запросите образец отчета по адресу: https: // www.alliedmarketresearch.com/request-sample/2855

Кроме того, рост правительственных инициатив по продвижению донорства крови в развивающихся странах, таких как Китай и Индия, способствует росту рынка. Например, Twitter недавно запустил социальную инициативу под названием BloodMatters в Индии в марте 2018 года. Twitter сотрудничал с горячей линией добровольного донорства крови под названием Blood Donors. Более того, в 2014 году в Китае наблюдалось увеличение количества сдач крови, что привело к увеличению количества центров крови в стране.Такие обстоятельства положительно сказываются на росте рынка.

Метод центрифугирования принес самый высокий доход в 2016 году и, как ожидается, сохранит это доминирующее положение в течение всего прогнозируемого периода. Это связано с тем, что центрифугирование считается стандартным методом афереза ​​и пользуется большим спросом в индустрии крови во всем мире. Однако ожидается, что сегмент мембранного разделения покажет самый высокий темп роста в течение прогнозируемого периода из-за роста спроса на аферез мембранного разделения, поскольку он предотвращает потребность в замещающих жидкостях, не истощая факторы свертывания крови.

В зависимости от процедуры рынок делится на донорский / автоматизированный аферез и терапевтический аферез. Ожидается, что донорский / автоматизированный аферез будет доминировать на мировом рынке в течение всего прогнозируемого периода из-за увеличения разрыва между поставками крови и продуктами крови, что облегчает потребность в использовании аппаратов для афереза. Более того, рост числа процедур афереза ​​в нескольких областях, таких как гематология, неврология и онкология, способствовал устойчивому росту этого сегмента.Ожидается, что терапевтический аферез будет расти самыми высокими темпами с 2017 по 2023 год.

Для запроса о покупке: https://www.alliedmarketresearch.com/purchase-enquiry/2855

Ключевые выводы рынка афереза:

  • Ожидается, что в сегменте тромбоцитов (тромбоцитферез) будут зарегистрированы самые высокие темпы роста с 2017 по 2023 год.
  • Центры крови принесли максимальную выручку в 2016 г., и ожидается, что эта тенденция сохранится на протяжении всего прогнозного периода.
  • Северная Америка доминировала на мировом рынке афереза, заняв максимальную долю в 2016 году, и ожидается, что эта тенденция сохранится в течение прогнозируемого периода.
  • Сегмент центрифугирования с прерывистым потоком доминировал на рынке центрифугирования-афереза ​​в 2016 году и, как ожидается, сохранит эту тенденцию в течение прогнозируемого периода.
  • По оценкам, фотоферез демонстрирует самый высокий среднегодовой темп роста 9,3% с 2017 по 2023 год на рынке терапевтического афереза.

Ожидается, что в Азиатско-Тихоокеанском регионе будут наблюдаться самые высокие темпы роста за весь прогнозируемый период из-за высокой численности населения, роста располагаемых доходов и повышения осведомленности пациентов о донорстве крови.Кроме того, рост заболеваемости денге в странах Азиатско-Тихоокеанского региона является ключевым фактором роста рынка в регионе.

Основные компании, представленные в этом отчете, включают Haemonetics Corporation, Fresenius Kabi, Terumo BCT, Inc., Asahi Kasei Medical Co., Ltd., HemaCare Corporation, Kaneka Corporation, Kawasumi Laboratories Inc., Cerus Corporation, B. Braun Melsungen AG, и Nikkiso Co., Ltd. Другие известные игроки в цепочке создания стоимости включают Grifols International SA, Baxter International Inc., CSL Behring, Immucor, Becton, Dickinson & Co., Abbott Laboratories, Medicap и Bioelettronica.

Доступ к ДЕРЕВО ЗНАНИЙ (Премиум по запросу, модель ценообразования на основе подписки) по адресу: https://www.alliedmarketresearch.com/knowledgetree

Дерево знаний — это облачная аналитическая платформа, которая предлагает более 2000 выборочных готовых отчетов по нишевым рынкам, чтобы наши клиенты могли получить глубокое понимание последних тенденций, динамических технологий и новых областей применения. .

Подобные отчеты:

Рынок крови — анализ глобальных возможностей и отраслевой прогноз, 2017-2023 гг.

Рынок производных плазмы крови — анализ глобальных возможностей и отраслевой прогноз, 2016-2023 гг.

О нас

Allied Market Research (AMR) — это подразделение Allied Analytics LLP, предоставляющее полный спектр услуг по исследованию рынка и бизнес-консалтингу, базирующееся в Портленде, штат Орегон. Allied Market Research предоставляет глобальным предприятиям, а также среднему и малому бизнесу непревзойденное качество «Отчетов об исследованиях рынка» и «Решения для бизнес-аналитики».«AMR стремится предоставлять бизнес-идеи и консультации, чтобы помочь своим клиентам в принятии стратегических бизнес-решений и достижении устойчивого роста в соответствующей области рынка.

Мы находимся в профессиональных корпоративных отношениях с различными компаниями, и это помогает нам находить рыночные данные, которые помогают нам составлять точные таблицы данных исследований и подтверждают максимальную точность наших рыночных прогнозов. Все данные, представленные в опубликованных нами отчетах, получены путем первичных интервью с высшими должностными лицами ведущих компаний в соответствующей области.Наша методология получения вторичных данных включает в себя глубокие онлайн- и офлайн-исследования и обсуждения со знающими профессионалами и аналитиками в отрасли.

Контактное лицо:
Шрирам Дигхе
5933 NE Win Sivers Drive
# 205, Портленд, ИЛИ 97220
США
(бесплатно): + 1-800-792-5285
Великобритания: + 44-845-528-1300
Hong Конг: + 852-301-84916
Индия (Пуна): + 91-20-66346060
Факс: + 1⟨855⟩550-5975
[электронная почта защищена]

Интернет: https: // www.alliedmarketresearch.com

ИСТОЧНИК Allied Market Research

питательных веществ | Бесплатный полнотекстовый | Активация образования липидных медиаторов в результате афереза ​​липопротеинов

1. Введение

Атеросклероз и сердечно-сосудистые заболевания являются основными причинами заболеваемости и смертности у пациентов с тяжелой гиперхолестеринемией. Помимо факторов риска, связанных с образом жизни, таких как курение и ожирение, семейная гиперхолестеринемия является одним из основных генетически детерминированных факторов риска метаболизма [1,2,3].Кроме того, липопротеин (а) (Lp (a)) является признанным независимым фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний [4]. Для тех пациентов, у которых продолжает развиваться клинически значимое сердечно-сосудистое заболевание, несмотря на прием гиполипидемических препаратов, аферез липопротеинов является признанным терапевтическим методом. снизить уровень холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП) и ЛП (а). Доказано, что длительное лечение липопротеиновым аферезом снижает количество серьезных сердечно-сосудистых событий более чем на 80% [5]. Помимо снижения холестерина, аферез снижает уровень окисленных частиц ЛПНП и фибриногена [6,7,8,9].Более того, терапия липопротеиновым аферезом связана с повышенной экспрессией синтазы оксида азота в эндотелиальных клетках человека, которая оказывает вазопротекторное действие у пациентов [10,11]. Также было показано, что аферез липопротеинов изменяет профили цитокинов в плазме и снижает маркеры воспаления у пациентов с гиперхолестеринемией и ишемической болезнью сердца [12].

Современные методы афереза ​​основаны на различных физико-химических принципах очистки крови от липопротеинов. Осаждение используется во время индуцированного гепарином экстракорпорального преципитации липопротеинов низкой плотности (HELP, Futura ® ), когда отделенная плазма смешивается с буфером ацетат-уксусной кислоты (pH 4.85–5.15) и гепарин. Гепарин связывается с ХС-ЛПНП, холестерином липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и ЛП (а) и из-за кислой среды вместе с фибриногеном образует нерастворимые осадки, которые затем удаляются поликарбонатной мембраной. В системе каскадной фильтрации или мембранной дифференциальной фильтрации (MDF) MONET используется мембрана, удерживающая частицы размером более 1000 кДа, через которые циркулирует плазма после отделения клеточных частей крови.

В то время как HELP и MDF представляют собой процедуры афереза ​​на основе плазмы, при гемоперфузии липопротеинов низкой плотности и прямой абсорбции липопротеиновых систем (например,g., DALI ® (DA)), цельная кровь циркулирует через адсорбер, который содержит шарики из полиакриламида, покрытые полиакрилатом. Удаление липопротеинов, таких как LDL и Lp (a), происходит путем связывания положительно заряженных областей APO B100 с отрицательными полианионами на поверхности полиакриламида.

Различные исследования показали, что омега-6 (n-6) и омега-3 (n-3) полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) и их медиаторы могут напрямую влиять на прогрессирование воспалительных, сердечно-сосудистых и аутоиммунных заболеваний [13,14] .Арахидоновая кислота n-6 PUFA (AA, 20: 4 n-6), а также n-3 PUFA эйкозапентаеновая кислота (EPA, 20: 5 n-3) и докозагексаеновая кислота (DHA, 22: 6 n-3) могут обрабатываться различными ферментными (например, ферментами циклооксигеназа, липоксигеназа, цитохром P450) и неферментативными путями, в результате чего образуется широкий спектр высокоактивных липидных медиаторов, так называемых оксилипинов [15]. Следовательно, в дополнение к холестерину ЛПНП Снижая терапию, n-3 ПНЖК, такие как докозагексаеновая кислота (DHA, 22: 6 n-3) и особенно эйкозапентаеновая кислота (EPA, 20: 5 n-3), показали снижение риска сердечно-сосудистых заболеваний [16,17], липидные медиаторы, происходящие из n-3 ПНЖК, могут обладать кардиозащитным действием [18].Однако в пилотном исследовании с небольшим количеством пациентов, получавших гепарин-индуцированный аферез экстракорпоральной преципитации липопротеинов низкой плотности (HELP), мы обнаружили значительно сниженные уровни n-3 ПНЖК в плазме, а также тенденцию к увеличению 5- и образование продукта 12-липоксигеназы (LOX) [19]. Поскольку активация липоксигеназ и липидных медиаторов, производных арахидоновой кислоты (AA, 20: 4 n-6), причастна к развитию воспаления и атеросклероза [20], эти наблюдения могут иметь последствия для воспалительного состояния и сердечно-сосудистого риска, связанного с Липидные медиаторы на основе ПНЖК у пациентов, получавших аферез.Недавно мы расширили наши анализы, чтобы сравнить различные методы афереза ​​липопротеинов. Мы показали значительно сниженные концентрации ПНЖК в плазме вследствие афереза ​​с использованием либо индуцированной гепарином экстракорпоральной преципитации липопротеинов низкой плотности (HELP, Futura ® ), либо гемоперфузии липопротеинов низкой плотности и прямого поглощения липопротеинов, DALI ® (DA). Напротив, аферез с использованием системы мембранной дифференциальной фильтрации (MDF) MONET не влиял на количество ПНЖК в плазме [21].

Целью настоящего исследования было установить влияние различных методов афереза ​​липопротеинов (HELP, MDF и DA) на n-6 PUFA и n-3 PUFA, а также на образование их липидного медиатора в плазме. Используя газовую хроматографию (ГХ) для анализа жирных кислот и жидкостную хроматографию в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС / МС), мы смогли показать значительно повышенные уровни различных липоксигеназ (LOX), а также циклооксигеназа (ЦОГ) и фермент цитохрома Р450 (CYP450), производные липидных медиаторов либо из n-6, либо из n-3 ПНЖК, несмотря на снижающий ПНЖК эффект афереза ​​HELP и DA.

4. Обсуждение. . Омега-6 и омега-3 ПНЖК являются важными предшественниками широкого спектра липидных медиаторов, которые действуют как медиаторы в контексте воспаления и сердечно-сосудистых заболеваний [25, 26, 27]. ПНЖК в плазме крови связываются либо в виде свободных жиров. кислоты (СЖК) в альбумин или присутствуют в составе фракции ТГ в виде фосфолипидов и эфиров холестерина липопротеинов [28,29].Недавно мы смогли показать, что концентрация ПНЖК в плазме снижается с помощью методов афереза ​​липопротеинов HELP и DA, используемых для снижения холестерина ЛПНП у пациентов с высоким риском, но не с помощью афереза ​​MDF [21]. Из-за этого эффекта липидный аферез может также препятствовать образованию липидных медиаторов, полученных из ПНЖК. Хотя мы смогли подтвердить наши предыдущие данные, демонстрирующие более низкие количества ПНЖК в плазме из-за липидного афереза ​​HELP и DA, здесь мы показали явное увеличение почти все проанализированные липидные медиаторы и метаболиты после афереза.Наиболее очевидные изменения были обнаружены в образовании метаболитов 15-LOX, происходящих из AA, EPA и DHA, на что указывает значительно повышенные концентрации 15-HETE, 15-HEPE и 17-HDHA, особенно при аферезе MDF, но также и в HELP. и DA. Учитывая, что эти соединения связаны с противовоспалительной активностью [27], это может поддерживать положительный эффект лечения аферезом, который может даже поддерживаться добавлением n-3 ПНЖК. Лечение липопротеиновым аферезом также было связано с активацией 15-LOX, на что указывают повышенные концентрации 15-HETE, 15-HEPE и 17-HDHA.Эти 15-LOX продукты также были связаны с образованием более сложных противовоспалительных медиаторов: 15-HETE, производное от AA, может быть преобразовано в липоксин A4 [30], а производное n-3 DHA 17-гидроксидокозагексаеновой кислоты (17- HDHA), как известно, является предшественником противовоспалительных D-резольвинов [27]. Напротив, образование метаболитов 12-LOX не увеличивалось значительно и оставалось почти постоянным, особенно при аферезе HELP. Этот вывод противоречит нашей гипотезе, основанной на нашем пилотном исследовании [19].Поскольку 12-LOX преимущественно продуцируется тромбоцитами человека, это свидетельствует против активации тромбоцитов из-за афереза ​​HELP. Однако, в то время как метаболиты пути 12-LOX были только умеренно изменены аферезом HELP, MDF и DA вызывали гораздо большее увеличение метаболитов 12-LOX, хотя эти результаты не были значительными (вероятно, из-за небольшого количества образцов). Таким образом, различные методы афереза ​​могут по-разному влиять на активацию тромбоцитов. При аферезе HELP плазма смешивается с буфером ацетат-уксусной кислоты (pH 4.85–5.15) и гепарин. Гепарин связывается с ХС-ЛПНП, ЛПОНП и ЛП (а) и вместе с фибриногеном образует нерастворимые осадки, которые затем удаляются поликарбонатной мембраной. Временная активация тромбоцитов, сопровождающаяся повышенным образованием 12-HETE из-за лечения гепарином, была показана ранее [31]. Напротив, каскадная фильтрация или мембранная дифференциальная фильтрация (MDF) использует мембрану, которая эффективно задерживает частицы размером более 1000 кДа, через которые циркулирует плазма после отделения клеточных частей крови.В то время как HELP и MDF представляют собой системы разделения на основе плазмы, цельная кровь циркулирует через полиакриламидный адсорбер, покрытый полиакрилатом, в процессе гемоперфузии липопротеинов низкой плотности и прямой абсорбции системы липопротеинов (DA) [32]. Для этих систем афереза ​​цельной крови было показано, что шероховатость поверхности полимера активирует адгезию тромбоцитов и активацию клеток [33]. Это может быть объяснением повышенной активации 12-LOX в DA по сравнению с HELP, но не объясняет эффект в MDF.Произведенный из АА 12-НЕТЕ ассоциирован с сосудосуживающими свойствами в мелких почечных артериях, что способствует артериальной гипертензии. Более того, индукция хемотаксиса, агрегации нейтрофилов и ангиогенеза была вовлечена как эффекты 12-HETE [20,34]. В связи с диабетом и гиперлипидемией, активация 12-LOX и образование 12-HETE также вызывают окислительный стресс, а также окисление ЛПНП [34]. В отличие от 12-HETE, производного от n-6 AA, образование 14-HDHA, производного от n-3 DHA, может оказывать защитное действие, поскольку 14-HDHA известен как предшественник противовоспалительных медиаторов [35,36].

Аргументом в пользу провоспалительного эффекта афереза ​​является повышенное образование производных ЦОГ 9-HODE и 11-HETE — эффект, наблюдаемый, хотя почти все пациенты в этом исследовании получали ацетилсалициловую кислоту в низких дозах как часть препарата. их обычных лекарств. Однако влияние на метаболиты ЦОГ, вероятно, не является клинически значимым, поскольку мы не смогли обнаружить простагландины в плазме крови, проанализированной в этом исследовании.

Помимо липидных медиаторов, полученных из циклооксигеназы и различных липоксигеназ, количество липидных медиаторов, производных цитохрома P450 (CYP450), увеличилось из-за лечения аферезом.АА также превращается ферментами CYP450 в эпоксиметаболиты (EET) [37]. Сообщалось о множественных положительных эффектах для семейства EET в контексте сердечно-сосудистых заболеваний. Например, было показано, что EET вызывают расширение сосудов и ингибируют активацию тромбоцитов [38,39]. EET нестабильны и быстро метаболизируются в менее активные последующие продукты, дигидроксиэйкозатриеновые кислоты (DHET), под действием растворимой эпоксидгидролазы (sEH). Было показано, что ингибирование sEH увеличивает уровни HDL-C и снижает LDL-C у мышей, что приводит к уменьшению атеросклеротических бляшек [40].Интересно, что настоящее исследование выявило увеличение EETs, а также эпоксиметаболитов, полученных из n-3 PUFA, 14,15-EEQ и 19,20-EDP, которые участвуют в кардиопротекции [18].

Интересно, что аферез HELP, в частности, привел к более высоким уровням метаболитов LA уже на исходном уровне. Это наблюдение требует дальнейшего изучения, так как оно может указывать на устойчивую активацию образования метаболитов LA у пациентов, проходящих регулярное лечение аферезом HELP, но не у пациентов, проходящих лечение MDF или DA.

Ограничением этого исследования является небольшое количество людей в каждой группе лечения, что может повлиять на достоверность наших данных. Тем не менее, мы считаем, что наши данные являются достоверными и значимыми, особенно благодаря нашему вниманию к большей группе пациентов с аферезом HELP. Однако, учитывая небольшое количество выборок, мы решили не вносить поправки для множественного тестирования, что является ограничением данного исследования. Настоящее исследование не отвечает на вопросы, касающиеся долгосрочных эффектов различных и повторных процедур афереза ​​на ПНЖК и липидные медиаторы, и не учитывает различия в диетических добавках ПНЖК n-3 и n-6, особенно в контексте регулярного лечения аферезом. и последующие изменения уровня липопротеинов.В будущих исследованиях необходимо будет рассмотреть эти вопросы, а также определить липидные метаболиты в конкретных фракциях липопротеинов (например, ЛПОНП, ЛПНП, ЛПВП).

Динеш К. Чхетри, MD | Отоларингология

Д-р Динеш Чхетри — профессор хирургии головы и шеи и ларинголог, специалист в области нарушений голоса, глотания и дыхательных путей. Он с отличием окончил Университет Брауна со степенью в области биохимии, затем получил степень доктора медицины в Медицинской школе Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе, которую окончил с отличием за диссертацию по параличу голосовых складок и реиннервации гортани.Он остался в Калифорнийском университете в Лос-Анджелесе для прохождения резидентуры по отоларингологии — хирургии головы и шеи и стажировки в ларингологии.

Доктор Чхетри известен на национальном и международном уровне как академический ларинголог и хирург головы и шеи. Он является автором почти 100 публикаций, связанных с нарушениями голоса и глотания. Национальные институты здоровья (NIH) постоянно финансируют его исследования в области нервно-мышечного контроля гортани и нарушений голоса. Он проявляет особый интерес к уходу за теми, кто в своей профессии полагается в первую очередь на голос (уход за профессиональным голосом), параличом голосовых связок, неврологическими проблемами голоса, а также доброкачественными и злокачественными образованиями гортани и окружающих структур, вызывающими голос, глотание. , и проблемы с дыханием.

Доктор Чхетри также является международным авторитетом в области нарушений глотания, опубликовав основополагающую книгу «Оценка и лечение дисфагии в отоларингологии» и прочитав множество приглашенных лекций по всему миру о нарушениях глотания, связанных с нейрогенными и обструктивными причинами, а также лучевой терапии. при раке головы и шеи. Он также имеет сертификат по трансоральной роботизированной хирургии (TORS) при раке головы и шеи.

Доктор Чхетри в настоящее время является заместителем председателя отделения хирургии головы и шеи UCLA, директором программы UCLA по расстройствам глотания и программы UCLA по борьбе с раком головы и шеи, а также содиректором программы по ларингологии.Он также является волонтером на внешнем уровне в качестве члена совета Американской ларингологической ассоциации и рецензента по грантам Национального института здоровья. Кроме того, он увлечен обучением хирургов по всему миру и возглавлял множество международных медицинских миссий в Южной Азии.

Назначения академического персонала

    Профессор-резидент отделения хирургии головы и шеи Медицинской школы Дэвида Геффена, Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе

Назначения медицинского персонала Голос, дыхательные пути, глотание

Профессиональное членство

  • Американское акустическое общество (ASA)
  • Американская академия отоларингологии — хирургия головы и шеи (AAO-HNS)
  • Американская бронхоэзофагологическая ассоциация
  • (ABEA) Американский колледж хирургов (ACS)
  • Американское общество головы и шеи (AHNS)
  • Американская ларингологическая ассоциация (ALA)
  • Триологическое общество

% PDF-1.7 % 7782 0 объект > эндобдж xref 7782 206 0000000016 00000 н. 0000009261 00000 п. 0000009555 00000 н. 0000009601 00000 п. 0000009638 00000 н. 0000010334 00000 п. 0000010449 00000 п. 0000010488 00000 п. 0000013721 00000 п. 0000015956 00000 п. 0000018710 00000 п. 0000021591 00000 п. 0000023775 00000 п. 0000023890 00000 п. 0000026951 00000 п. 0000027317 00000 п. 0000027946 00000 н. 0000028041 00000 п. 0000028368 00000 п. 0000028951 00000 п. 0000029612 00000 п. 0000029926 00000 н. 0000033527 00000 п. 0000036900 00000 п. 0000038036 00000 п. 0000040686 00000 п. 0000045788 00000 п. 0000045903 00000 п. 0000046028 00000 п. 0000084705 00000 п. 0000084746 00000 п. 0000085109 00000 п. 0000085208 00000 п. 0000085357 00000 п. 0000085745 00000 п. 0000086133 00000 п. 0000086256 00000 п. 0000086413 00000 п. 0000086490 00000 н. 0000087329 00000 н. 0000127880 00000 н. 0000128243 00000 н. 0000128320 00000 н. 0000129159 00000 н. 0000161822 00000 н. 0000162187 00000 н. 0000162263 00000 н. 0000162339 00000 н. 0000162415 00000 н. 0000162809 00000 н. 0000163196 00000 н. 0000163272 00000 н. 0000163348 00000 н. 0000163744 00000 н. 0000164128 00000 н. 0000164204 00000 н. 0000164280 00000 н. 0000165005 00000 н. 0000165811 00000 н. 0000165887 00000 н. 0000165963 00000 н. 0000166712 00000 н. 0000167530 00000 н. 0000167606 00000 н. 0000167682 00000 н. 0000168077 00000 н. 0000168465 00000 н. 0000168541 00000 н. 0000168617 00000 н. 0000169012 00000 н. 0000169405 00000 н. 0000169481 00000 н. 0000169557 00000 н. 0000169951 00000 н. 0000170335 00000 н. 0000170411 00000 п. 0000170487 00000 н. 0000170880 00000 н. 0000171284 00000 н. 0000171360 00000 н. 0000171436 00000 н. 0000171928 00000 н. 0000172435 00000 н. 0000172511 00000 н. 0000172587 00000 н. 0000172976 00000 н. 0000173358 00000 н. 0000173434 00000 н. 0000173510 00000 н. 0000174040 00000 н. 0000174593 00000 н. 0000174669 00000 н. 0000174745 00000 н. 0000175137 00000 н. 0000175516 00000 н. 0000177368 00000 н. 0000177444 00000 н. 0000178232 00000 н. 0000178308 00000 н. 0000178828 00000 н. 0000178904 00000 н. 0000178980 00000 н. 0000179056 00000 н. 0000179452 00000 н. 0000179838 00000 н. 0000179914 00000 н. 0000179990 00000 н. 0000180387 00000 н. 0000180776 00000 н. 0000180852 00000 н. 0000180928 00000 н. 0000181678 00000 н. 0000182504 00000 н. 0000182580 00000 н. 0000182656 00000 н. 0000183053 00000 н. 0000183440 00000 н. 0000183516 00000 н. 0000183592 00000 н. 0000183989 00000 н. 0000184375 00000 н. 0000184451 00000 н. 0000184527 00000 н. 0000184921 00000 н. 0000185300 00000 н. 0000185376 00000 н. 0000185452 00000 н. 0000185846 00000 н. 0000186226 00000 н. 0000186302 00000 н. 0000186378 00000 н. 0000186874 00000 н. 0000187392 00000 н. 0000187468 00000 н. 0000187544 00000 н. 0000188071 00000 н. 0000188631 00000 н. 0000188707 00000 н. 0000188783 00000 н. 0000189153 00000 н. 0000189504 00000 н. 0000189580 00000 н. 0000189656 00000 н. 00001

00000 н. 0000191191 00000 н. 0000193028 00000 н. 0000193104 00000 н. 0000193912 00000 н. 0000193988 00000 н. 0000194064 00000 н. 0000194140 00000 н. 0000194536 00000 н. 0000194918 00000 н. 0000194994 00000 н. 0000195070 00000 н. 0000195503 00000 н. 0000195943 00000 н. 0000196019 00000 н. 0000196095 00000 н. 0000196520 00000 н. 0000196946 00000 н. 0000197022 00000 н. 0000197098 00000 н. 0000197599 00000 н. 0000198113 00000 н. 0000198189 00000 н. 0000198265 00000 н. 0000198761 00000 н. 0000199279 00000 н. 0000199355 00000 н. 0000199431 00000 н. 0000200132 00000 н. 0000200899 00000 н. 0000200975 00000 н. 0000201051 00000 н. 0000201832 00000 н. 0000202722 00000 н. 0000204566 00000 н. 0000204642 00000 н. 0000204718 00000 н. 0000204794 00000 н. 0000205259 00000 н. 0000205771 00000 н. 0000205847 00000 н. 0000205923 00000 н. 0000206389 00000 н. 0000206883 00000 н. 0000206959 00000 н. 0000207035 00000 н. 0000207644 00000 н. 0000208296 00000 н. 0000208372 00000 н. 0000208448 00000 н. 0000209066 00000 н. 0000209733 00000 н. 0000209809 00000 н. 0000209885 00000 н. 0000210612 00000 п. 0000211422 00000 н. 0000211498 00000 н. 0000211574 00000 н. 0000212320 00000 н. 0000213153 00000 п. 0000214960 00000 н. 0000008956 00000 н. 0000004505 00000 н. трейлер ] / Назад 1271637 / XRefStm 8956 >> startxref 0 %% EOF 7987 0 объект > поток hYyXSW ڿ 熰 HAAL $! l®,! dc 6d’DnUS; ZT @ E- * E: tν) = ly AALg # yq

? Z $ @

Плазмаферез при кожных заболеваниях | DermNet NZ

Автор: Брайан Ву, кандидат медицинских наук, Медицинская школа Кека, Лос-Анджелес, США.Главный редактор DermNet New Zealand: достопочтенный A / профессор Аманда Окли, дерматолог, Гамильтон, Новая Зеландия. Редактор: Мария МакГиверн / Гас Митчелл. Июль 2017.


Что такое плазмаферез?

Термин «плазмаферез» описывает процедуру, при которой компоненты крови (т. Е. Лейкоциты, эритроциты, тромбоциты и плазма) разделяются через центральную внутривенную линию с широким отверстием, либо с помощью центрифуги, либо с помощью метода разделения с полупроницаемой мембраной. Его можно повторять несколько раз каждые несколько дней.

При терапевтическом плазмаферезе (также известном как плазмаферез) с использованием центрифуги:

  • 3–6 литров фильтрованной плазмы удаляются в течение нескольких часов
  • Эритроциты и замещающая жидкость (донорская плазма или альбумин) возвращаются пациенту.

Для сравнения, плазмаферез методом мембранного разделения:

  • Используются различные типы фильтров
  • Удаляет нежелательные макромолекулы
  • Возвращает обработанную плазму пациенту.

Обмен плазмой также может включать:

  • Переливание замещающих белковых продуктов, таких как индивидуальные факторы свертывания крови
  • Цитаферез (избирательное удаление клеток крови), более конкретно эритроцитаферез (удаление эритроцитов), лейкаферез (удаление лейкоцитов) или тромбоцитаферез (удаление тромбоцитов).

Для чего используется плазмаферез?

Плазмаферез удаляет аутоантитела, иммунные комплексы, комплемент и неспецифические медиаторы воспаления.Он в основном используется при тяжелых аутоиммунных или цитотоксических заболеваниях.

Используется при различных гематологических, ревматологических, метаболических, дерматологических, неврологических и почечных заболеваниях. Клинические данные убедительнее всего в пользу использования плазмафереза ​​при синдроме Гийена – Барре, миастении, тромботической тромбоцитопенической пурпуре, синдроме Гудпасчера и молниеносной болезни Вильсона.

Плазмаферез в дерматологии применяется нечасто; используется в основном экспериментально при следующих заболеваниях:

Кожные заболевания, которые иногда лечат с помощью плазмафереза ​​

Какие противопоказания к плазмаферезу?

Плазмаферез противопоказан пациентам, которые:

  • Слишком плохо себя чувствуют, чтобы переносить процедуру
  • Есть склонность к кровотечению
  • Плохой венозный доступ
  • Вы принимаете определенные лекарства (например, ингибиторы АПФ, которые могут вызывать гипотонию, приливы крови и другие осложнения)
  • Наличие в анамнезе определенных заболеваний (например, гипокальциемии)
  • Есть определенные аллергии (например, на свежезамороженную плазму, альбумин или гепарин).

Каковы преимущества плазмафереза?

Теоретические преимущества плазмафереза ​​при лечении кожных заболеваний включают:

  • Удаление аутоантител, ответственных за кожное заболевание
  • Отсутствие иммуносупрессивного действия
  • Иммунокорригирующее действие, возможно, из-за активации макрофагов
  • Улучшение микроциркуляции
  • Нормализация гемостаза
  • Эффекты, которые могут длиться от нескольких недель до месяцев.

Какие недостатки плазмафереза?

Плазмаферез не используется. Он не является широко доступным, поскольку требует наличия команды опытных врачей, и поэтому его выполнение дорого.

Каковы побочные эффекты плазмафереза?

Осложнения и риски плазмафереза ​​могут включать:

  • Трансфузионные реакции, включая анафилаксию
  • Гипокальциемия и / или гипомагниемия
  • Гипотермия
  • Гипотония
  • Кровотечение из-за потребления факторов свертывания
  • Пневмоторакс
  • Инфекция
  • Легочная эмболия.

Список литературы

  • Бакон Р. ВВИГ или плазмаферез при нервно-мышечных заболеваниях: за и против. Медицинский центр Канзасского университета, апрель 2014 г. (по состоянию на 28 ноября 2016 г.).
  • Гребенников В.А., Беляевский А.Д., Каминский М.И., Кузина З.А., Литвиненко Т.А. [Иммунокорригирующее и детоксицирующее действие гемосорбции, плазмафереза ​​и энтеросорбции при пузырчатке]. Вестн Дерматол Венерол 1990; (5): 33–8. Русский. PubMed
  • Павенски К., Ванденберге Х., Якубович Х., Адам Д.Н., Гарви Б., Штрейткер С.Дж.Плазмаферез и лечение стероидами васкулопатии, вызванной левамизолом, и связанного с ней некроза кожи у потребителей крэка / кокаина. J Cutan Med Surg 2013; 17: 123–8. DOI: 10.2310 / 7750.2012.12028. PubMed
  • Потекаев Н.С., Курдина М.И., Орлов С.Л. и др. [Плазмаферез в дерматологии]. Тер Арх 1991; 63 (10): 133–8. Русский. PubMed
  • Штиглиц Э. Плазмаферез. Medscape. Обновлено 2016 г. (по состоянию на 22 ноября 2016 г.).
  • Плазмаферез: эффективное лечение. Лечебный аферез для дерматологии.Доступно по адресу: https://tinyurl.com/yc7qwvnc (по состоянию на 22 ноября 2016 г.).

В DermNet NZ

Другие веб-сайты

Книги о кожных заболеваниях

См. Книжный магазин DermNet NZ.

Метаболомика и протеомика выявляют изменение веществ в тромбоцитах афереза ​​во время хранения и их влияние на пролиферацию раковых клеток — FullText — Transfusion Medicine and Hemotherapy 2021, Vol. 48, № 2

Аннотация

Введение: Тромбоциты афереза ​​(AP) клинически и критически важны для профилактики и лечения кровотечений у пациентов с тромбоцитопенией или раком.Однако немногие исследователи изучали изменение метаболитов надосадочной жидкости и белков экзосом в AP во время хранения и их влияние на пролиферацию раковых клеток. Цель: Это исследование было разработано для изучения правил изменения метаболитов и экзосомальных белков AP во время хранения и их влияния на пролиферацию раковых клеток. Методы: Метаболомику и протеомику применяли по отдельности для анализа вариации метаболитов в супернатанте АР и экзосомальных белков между свежеприготовленными АР с нулевым и пятым днями хранения на концах.Набор для подсчета клеток (CCK) -8 был проведен для обнаружения эффектов AP супернатантов и экзосом на пролиферацию раковых клеток. Результаты: Мы обнаружили, что метаболиты надосадочной жидкости и экзосомальные белки в AP значительно различались в день 0 и день 5, и что многие дифференциальные метаболиты и экзосомальные белки были связаны с характеристиками рака. Кроме того, супернатанты AP дня 5 имели большее ингибирование пролиферации раковых клеток K562, HepG2 и HCT116, но экзосомы AP дня 5 не оказывали значительного влияния на пролиферацию этих раковых клеток. Заключение: Варианты супернатантов концевых АР могут ингибировать пролиферацию раковых клеток, но вариантные экзосомы концевых АР не влияют на пролиферацию раковых клеток.

© 2020 S. Karger AG, Базель


Введение

Переливание аферезных тромбоцитов (AP) в качестве потенциальной терапии для спасения жизни обычно используется при лечении кровотечений, связанных с тромбоцитопенией.Между тем, AP играют важную роль в эффективном лечении тромбоцитопении, вызванной злокачественными новообразованиями или осложнениями, связанными с химиотерапией, и они предотвращают кровотечение у пациентов с гематологическими нарушениями после трансплантации стволовых клеток [1, 2].

Однако в большинстве регионов, включая Китай, AP могут храниться только до 5 дней, в первую очередь из-за повышенного риска бактериального заражения, хотя некоторые исследования показали, что концентраты тромбоцитов могут храниться до 7 дней [3, 4 ].Кроме того, во время хранения AP могут возникать повреждения накопления тромбоцитов (PSL), сопровождающиеся множественными изменениями, включая повышенное высвобождение внеклеточных везикул тромбоцитов (P-EV), снижение активации в ответ на агонисты, усиление апоптоза и экстернализации фосфатидилсерина и секрецию тромбоцитов. гранулы [5]. Они могут повлиять на функциональную целостность тромбоцитов и вызвать другие побочные эффекты. Исследования показывают, что P-EV, включая экзосомы тромбоцитов (30–100 нм в диаметре) и микровезикулы тромбоцитов (100–1000 нм в диаметре) [6, 7], играют жизненно важную роль в управлении нарушениями иммунной системы человека. , например, снижение функции естественных клеток-киллеров [8] и ингибирование продукции IL-17 регуляторными Т-клетками [9].Интересно, что были исследования, показывающие, что микровезикулы тромбоцитов, являясь частью P-EV, участвуют в регуляции рака [10, 11]. Все эти исследования показывают, что изменения веществ в растворах АР во время хранения могут способствовать серьезным побочным эффектам переливания тромбоцитов; это требует большего внимания со стороны клиницистов и исследователей.

Существуют исследования, которые показывают транскриптомный профиль терминальных тромбоцитов и P-EV [12], а также изменение белкового состава тромбоцитов человека во время хранения при различных температурах [13].Тем не менее, как вещества изменяются между свежеприготовленными АР, хранящимися на терминале 0-го и 5-го суток, остается в значительной степени неизвестным. Что еще более важно, эффекты супернатантов АР и экзосом дней 0 и 5 на пролиферацию раковых клеток еще неясны. Для дальнейшего изучения изменений метаболитов в супернатантах AP и белков в экзосомах AP во время хранения, в этом исследовании использовались метаболомика и протеомика для анализа, соответственно, изменения метаболитов в хранимых супернатантах AP и белков в экзосомах, полученных из тромбоцитов, между свежеприготовленными днями 0. и AP, хранящиеся в терминале на 5-й день.Также было обнаружено влияние супернатантов AP и экзосом на пролиферацию раковых клеток.

Материалы и методы

Сбор AP

В Главном госпитале Народно-освободительной армии Китая (PLA) AP были получены от 10 здоровых доноров крови мужского пола, средний возраст которых составил 33,8 года, в соответствии с «Требованиями к медицинскому освидетельствованию». доноров крови »(Китай, GB 18467–2011).

Выделение супернатантов АР и экзосом

Супернатанты АР получали центрифугированием АР, хранящихся в день 0 и день 5, сначала при 2000 г в течение 30 минут при комнатной температуре, а затем при 10000 г в течение 30 минут при 4 ° С.Супернатанты AP хранили при –80 ° C, если они не использовались. Супернатанты AP центрифугировали при 105000 g и 4 ° C в течение 2 часов для получения первичных экзосом AP (осадок) и супернатантов без экзо-AP (супернатант). Впоследствии первичные экзосомы, экстрагированные из 30 мл супернатанта AP, ресуспендировали в 1 мл PBS, а затем фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм (Millipore; США). После фильтрации первичные экзосомы AP снова ультрацентрифугировали при 105000 g и 4 ° C в течение 2 часов для получения дополнительных очищенных экзосом.Наконец, экзосомы AP ресуспендировали в 300 мкл PBS и хранили при –80 ° C. Экзосомы AP идентифицировали с помощью вестерн-блоттинга и просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ).

Методы исследования метаболизма супернатанта АР

Экстракция метаболитов

Все образцы супернатанта АР размораживали на льду, а затем 300 мкл предварительно охлажденного буфера для экстракции (метил-трет-бутиловый эфир [МТБЭ]: метанол = буфер 20: 6). смешали с 20 мкл образцов. Затем смесь встряхивали в течение 2 минут, а затем инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут.Затем экстракционную смесь хранили в течение ночи при –80 ° C. После центрифугирования экстракционной смеси при 12000 g в течение 5 минут супернатант переносили в новые 96-луночные планшеты и хранили при –80 ° C до проведения анализа методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Кроме того, образцы для контроля качества (QC) также были приготовлены путем объединения 10 мкл каждой экстракционной смеси.

Анализ ЖХ-МС

Все образцы были получены с помощью системы ЖХ-МС в соответствии с рекомендациями производителя.Во-первых, все хроматографические разделения были выполнены с использованием высокопроизводительной системы ЖХ (UPLC) (Shimazu, Япония). Колонку ACQUITY UPLC C18 (100 × 2,1 мм, 1,7 мкм, Waters, UK) использовали для обращенно-фазового разделения. В термостате колонки поддерживали температуру 40 ° C со скоростью потока 0,3 мл / мин, а подвижная фаза состояла из растворителя A (40% воды, 60% ACN и 10 мМ ацетата аммония) и растворителя B (10% ACN и 90% 2-изопропанол). Были установлены следующие условия градиентного элюирования: 0–0,5 мин, 20% B; 0.5–1,5 мин, 20–40% B; 1,5–10 мин, 40–60% B; 10–25 мин, 60–100% B; 25–26 мин, 100–20% B; 26–30 мин, 20% B. Вводимый объем каждой пробы составлял 1 мкл.

Тандемный масс-спектрометр высокого разрешения TripleTOF 6600 (SCIEX, Великобритания) использовали для обнаружения метаболитов, элюированных из колонки. Q-TOF работал как в режиме положительных, так и отрицательных ионов. Газ завесы был установлен на 35 фунтов на квадратный дюйм, газ источника ионов 1 на 60 фунтов на квадратный дюйм и газ источника ионов 2 на 60 фунтов на квадратный дюйм; температура нагревателя интерфейса составляла 550 ° C. Плавающее напряжение IonSpray Voltage Floating было установлено на уровне 5 500 В в режиме положительных ионов и –4 500 В в режиме отрицательных ионов.Данные MS были получены в режиме информационно-зависимого сбора данных (IDA). Диапазон масс TOF составлял 240–1250 Да. Обзорные сканирования были получены за 250 мс, и было собрано до 10 сканирований ионов продуктов, если был превышен порог в 100 импульсов в секунду. Общее время цикла было зафиксировано на 1,3 с. Четыре временных интервала суммировались для каждого сканирования при значении частоты генератора импульсов 11 кГц путем мониторинга 40-ГГц многоканального детектора TDC с детектированием 4 анодов / каналов. Во время сбора точность измерения массы калибровалась каждые 10 образцов.Чтобы оценить стабильность ЖХ-МС в течение всего сбора данных, образец для контроля качества собирали после каждых 10 образцов.

Анализ данных метаболизма

Сбор исходных данных МС о предварительных обработках выполняли с использованием программного обеспечения XCMS. Файлы необработанных данных ЖХ-МС были преобразованы в формат mz XML, а затем обработаны с помощью инструментов XCMS, CAMERA и metaX, реализованных с помощью программного обеспечения R . Параметры пикового захвата задавались следующим образом: method: centWave; minfrac: 0.5; snthr: 6; частей на миллион: 25; ширина пика: 5, 25; bw2: 5; mz ширина: 0,015; mz разница: 0,01; profstep.OBIWarp: 0.1. Каждый ион был идентифицирован путем объединения данных о времени удерживания (RT) и m / z . Регистрировали интенсивности каждого пика и генерировали трехмерную матрицу, содержащую произвольно назначенные индексы пиков (время удерживания — м / z пар), названия образцов (наблюдения) и информацию об интенсивности ионов (переменные).

Онлайн-базы данных LIPID Metabolites and Pathways Strategy (LIPID MAPS), Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) и База данных Human Metabolome (HMDB) использовались для аннотирования первичных метаболитов путем сопоставления точных данных молекулярной массы ( m / z ) образцов с образцами из базы данных.Если разница в массе между наблюдаемым значением и значением из базы данных была <10 ppm, метаболит будет аннотирован, а молекулярная формула метаболитов будет дополнительно идентифицирована и подтверждена измерениями распределения изотопов. Мы также использовали собственную библиотеку спектра фрагментов метаболитов для подтверждения идентификации метаболитов (вторичные аннотированные метаболиты).

Интенсивность пиковых данных дополнительно обрабатывалась с помощью собственного программного обеспечения metaX. Те особенности, которые были обнаружены в <50% образцов QC или <80% биологических образцов, были удалены, а оставшиеся пики с пропущенными значениями были вычислены с помощью алгоритма k-NN (k-ближайшего соседа) для дальнейшего улучшения качества данных.Анализ главных компонентов (PCA) был проведен для обнаружения выбросов (за пределами распределения t с 95% доверительным интервалом) и оценки пакетных эффектов с использованием предварительно обработанного набора данных. Частичный дискриминантный анализ методом наименьших квадратов (PLS-DA) был проведен с помощью metaX, чтобы различать различные переменные между группами. R 2 x , R 2 y и Q 2 были использованы для оценки эффекта подгонки модели PLS-DA. R 2 x и R 2 y представляют собой проценты информации матрицы X и Y , соответственно, которые могут быть интерпретированы.Значение Q 2 может быть получено путем вычисления перекрестной проверки. Чем больше балл R 2 и Q 2, тем лучше эффект прогнозирования и тем больше степень разделения двух групп выборок на фигуре, что указывает на значимость эффекта классификации. Основанная на контроле качества надежная коррекция сигнала LOESS была адаптирована к данным контроля качества относительно порядка ввода, чтобы минимизировать дрейф интенсивности сигнала во времени. Кроме того, относительные стандартные отклонения метаболических характеристик были рассчитаны для всех образцов QC, и те> 30% были удалены.

Вестерн-блот-анализ

Экзосомы

AP экстрагировали с использованием буфера для анализа радиоиммунопреципитации (Suolaibo Biotechnology Co. Ltd., Шанхай, Китай) с добавлением 1% фенилметилсульфонилфторида (PMSF) и денатурировали в 4-кратной загрузке додецилсульфоната натрия (SDS). буфер. Затем белки разделяли на 12% полиакриламидных гелях SDS и переносили электроблоттингом на PVDF-мембраны (Millipore, Billerica, CA, USA). Мембраны PVDF зондировали антителами против CD9 и антителами к белку гена 101 противоопухолевой восприимчивости ( TSG101 ) (Bioworld Technology, MN, Китай), которые были маркерами экзосом, и антителами против β-актина (Abcam, Кембридж, Великобритания) для контроль, а затем инкубировали с конъюгированными со вторичной пероксидазой хрена (HRP) козьими антикроличьими или антимышиными антителами (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA).Сигналы детектировали с помощью хемилюминесцентного субстрата HRP Immobilon TM Western (Millipore).

Просвечивающая электронная микроскопия

Всего на пластиковую пленку было нанесено 20 мкл раствора экзосом AP. Затем капля на пластиковой пленке была покрыта медной сеткой. После 10 мин инкубации при комнатной температуре медную сетку медленно сушили куском фильтровальной бумаги с последующим окрашиванием 20 мкл 1% глутарового альдегида в течение 5 мин. После окрашивания медную сетку сушили, а затем 3 раза промывали стерильной дистиллированной водой.Затем образец сушили в течение 10 мин при свете лампы накаливания. Наконец, медную сетку наблюдали и фотографировали под просвечивающим электронным микроскопом (JEM-1400, Токио, Япония).

Анализ белков экзосом AP

Белки экзосом AP в основном анализировались компанией LC-Bio в Китае. Вкратце, белки сначала были выделены из экзосом AP, а затем количественно определены и оценены с помощью электрофореза на бицинхониновой кислоте (BCA) и SDS-полиакриламидном геле (PAGE). Затем квалифицированные белки обрабатывали посредством восстановительного алкилирования и ферментативного гидролиза.Затем изобарические метки для относительного и абсолютного количественного анализа (iTRAQ), сопровождаемые UPLC с высоким pH и LC-MS, были выполнены для анализа экзосомных белков AP. Затем были использованы базы данных Gene Ontology (GO) и KEGG для анализа потенциальных биологических функций идентифицированных белков.

Клеточные линии и клеточная культура

Клеточная линия хронического миелогенного лейкоза К562 и линии раковых клеток HepG2 и HCT116 были приобретены из Американской коллекции типовых культур (ATCC, Манассас, Вирджиния, США).Их культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FBS, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина (HyClone, Юта, Логан, США) в увлажненной атмосфере 5% CO 2 при 37 ° C.

Анализ жизнеспособности клеток

Влияние супернатантов АР и экзосом на жизнеспособность клеточных линий K562, HepG2 и HCT116 определяли с помощью набора для подсчета клеток (CCK) -8 (Dojindo, Kumamoto, Japan). Раковые клетки ненадолго высевали в 96-луночные планшеты при плотности 5 × 10 3 клеток / лунку со 100 мкл полной среды.После культивирования в течение 24 часов в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 при 37 ° C, 10 мкл супернатанта AP или супернатанта exo-free-AP или экзосом AP были отдельно добавлены в экспериментальные лунки, в то время как PBS был добавлен в равных долях. контрольные скважины. В указанные моменты времени в каждую лунку добавляли 10 мкл раствора CCK-8 и инкубировали при 37 ° C в течение 4 часов. Значения оптической плотности (OD) измеряли при 450 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (iMark, Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах и повторялся 3 раза.

Статистический анализ

Тест Стьюдента t использовали для обнаружения различий в концентрациях метаболитов между AP дня-0 и дня-5. Значение p было скорректировано для нескольких тестов с использованием FDR (Benjamini-Hochberg). Была рассчитана переменная, важная для проекции (VIP), и значение отсечения VIP, равное 1,0, использовалось для выбора важных функций. Данные анализа жизнеспособности клеток анализировали с использованием GraphPad Prism v6.0 (Сан-Диего, Калифорния, США). Различия между каждой группой оценивали с помощью тестов t , если не указано иное. p <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Обзор метаболитного профилирования супернатантов AP

Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что PSL могут приводить к различным изменениям. Поэтому мы проанализировали состав метаболитов в супернатантах, хранящихся в день-0 и день-5, чтобы понять процесс, лежащий в основе изменения метаболитов. Как показано на рисунке 1A, 11 587 аннотированных метаболитов, включая 448 надежных вторичных метаболитов, были идентифицированы из 19 432 полностью захваченных признаков (в режимах положительных и отрицательных ионов).Мы также проанализировали потенциальные пути, в которых могут участвовать аннотированные метаболиты (анализ пути KEGG). Результаты показали, что аннотированные метаболиты были в основном обогащены метаболизмом глицерофосфолипидов, метаболизмом холина при раке и метаболическими путями, независимо от того, были ли они в положительном (фиг. 1B) или отрицательном (фиг. 1C) режиме.

Рис. 1.

Идентификация и анализ KEGG аннотированных метаболитов в супернатанте AP. A Статистические результаты аннотации метаболитов.Гистограмма показывает количество аннотированных метаболитов в каждом пути KEGG в положительном ( B ) и отрицательном ( C ) (метаболиты> 1).

Для дальнейшего изучения 448 надежных вторичных метаболитов мы провели функциональный классификационный анализ HMDB. Как показано на рисунке 2 (A, B), 448 надежных вторичных метаболитов в основном были разделены на жирные ацилы, глицерофосфолипиды и сфинголипиды. Кроме того, PCA показал, что метаболиты имели высокую степень сходства в 0-й, 5-й и контрольные образцы, и что основные компоненты в 0-й и 5-й день сохраненных метаболитов надосадочной жидкости AP были разными в обоих образцах. положительный (рис.2С) и отрицательный (рис. 2D) режим. Чтобы дополнительно выяснить, изменялись ли метаболиты в супернатантах AP во время хранения, PLS-DA использовался для различения различных переменных в группах дня 0 и дня 5. Результаты показали, что совокупные значения R 2 и Q 2 были все> 0,92 как в положительном (фиг. 2E), так и в отрицательном (фиг. 2F) режиме, что указывает на то, что в день 0 и день 5 сохраняли AP. супернатанты содержали существенно разные метаболиты. Все эти данные демонстрируют, что профили метаболизма АП существенно изменяются во время хранения.

Рис. 2.

Классификация HMDB и PLS-DA показывают обзор профилей метаболитов в супернатанте AP. A , B HMDB классификационная карта MS2-идентифицированных аннотированных метаболитов в положительном ( A ) и отрицательном ( B ) режимах. PCA показывает сходство и различия между 0-м и 5-м днями и объединенными образцами контроля качества в положительном ( C ) и отрицательном ( D ) режимах. PLS-DA показывает различные переменные между группами надосадочных жидкостей АР, хранимых на день 0 и день 5, в положительном ( E ) и отрицательном ( F ) режиме.

Дифференциальный анализ метаболитов супернатантов в AP, сохраненных в день 0 и день 5

Эти результаты побудили нас исследовать, как изменяются метаболиты в супернатантах AP. Мы проанализировали различия, обнаруженные в супернатантах метаболитов АР на день 0 и день 5. Тепловая карта показала, что супернатанты АР, хранящиеся в день 0 и день 5, имели существенно различающиеся профили метаболитов независимо от того, были ли они в положительном (фиг. 3A) или отрицательном (фиг. 3B) режиме. В дифференциальном анализе метаболитов (кратное изменение [FC] ≥2 или FC ≤1 / 2, q значение [ t test] p ≤ 0.05 [с поправкой Бенджамини-Хохберга], VIP ≤1), 297 метаболитов были обнаружены с повышенной регуляцией и 434 с пониженной регуляцией в супернатантах, сохраненных на 5-й день, по сравнению с 0-днями в положительном режиме. Сходные результаты были обнаружены в отрицательном режиме, сопровождаемом 370 активацией и 229 подавлением метаболитов в супернатантах AP на 5-й день. Для дальнейшего изучения потенциальной функции дифференциальных метаболитов был проведен анализ пути KEGG как в положительном, так и в отрицательном режиме. Как показано на Рисунке 3C (положительный режим) и Рисунке 3D (отрицательный режим), активированные метаболиты в супернатантах, сохраненных на 5-й день, в значительной степени участвовали в путях биосинтеза ненасыщенных жирных кислот и метаболизме линоленовой кислоты.Интересно, что мы обнаружили, что многие метаболиты с повышенной регуляцией, такие как ретиноат и 9-цис-ретиноевая кислота, участвуют в путях, связанных с раком, например, в немелкоклеточном раке легкого и мелкоклеточном раке легкого. Это напомнило нам, что сохраняемые на терминалах AP могут участвовать в регуляции рака. Кроме того, метаболиты с пониженной регуляцией, идентифицированные в положительном и отрицательном режимах, участвовали в основном в путях метаболизма арахидоновой кислоты, серотонинергических синапсов, метаболизма линоленовой кислоты и секреции желчи (рис.3E, F).

Рис. 3.

Дифференциальный анализ метаболитов в супернатанте АП. Тепловая карта показывает разницу метаболитов с аннотациями в положительном ( A ) и отрицательном ( B ) режиме между супернатантом AP на день 0 и день 5. Анализ KEGG активированных метаболитов: позитивно-аннотированные ( C ) и негативные мод-аннотированные ( D ) пути обогащения. KEGG-анализ метаболитов с пониженной регуляцией: позитивно-аннотированные ( C ) и негативные мод-аннотированные ( D ) пути, обогащенные.

Идентификация и классификация белков в AP-экзосомах

Для дальнейшего понимания изменений, происходящих в AP во время хранения, экзосомы AP от 6 здоровых доноров крови также были извлечены из надосадочных жидкостей AP на 0 и 5 дней с помощью ультрацентрифугирования (рис. 4A). ), а затем смешали, чтобы сформировать пул экзосом AP. Затем тестировали маркеры экзосом CD9 и TSG101. Как показано на рисунке 4B, CD9 и TSG101 были успешно обнаружены, что позволяет предположить, что экзосомы AP были успешно изолированы.Между тем, морфологию экзосом AP оценивали с помощью ПЭМ. Результаты показали, что экзосомы AP в изолированных фракциях были овальными или чашеобразными (рис. 4C). Кроме того, количество и объем экзосом AP на 5-й день были больше, чем на 0-й день, что свидетельствует о том, что они также изменились во время хранения.

Рис. 4.

A Выделение (многоступенчатым центрифугированием) и классификация экзосом AP. B Экспрессию маркера экзосом анализировали с помощью Вестерн-блоттинга. C Просвечивающая электронная микроскопия показывает разницу в морфологии между днем ​​0 и днем ​​5. D Анализ KEGG показывает 20 основных путей, по которым были обогащены iTRAQ-идентифицируемые белки.

Чтобы идентифицировать белки в экзосомах AP во время хранения, количественное определение iTRAQ проводили в объединенных экзосомах AP (6 произвольно выбранных экзосом AP дня 0 или дня 5). Всего идентифицировано 607 белков. В то же время результаты анализа пути KEGG показали, что эти белки в основном участвуют в путях транспорта и катаболизма, иммунной системы и рака (рис.4D).

Анализ изменения белка в экзосомах AP во время хранения

Для анализа изменений белка в экзосомах AP во время хранения мы сравнили белки экзосом AP дня 0 и день 5. Тепловая карта, показывающая 20 лучших белков экзосом, которые значительно различались в день 0 и день 5, показала, что экзосомы AP дня 0 и день 5 имели значительно различающиеся профили белков (фиг. 5A). Экзосомы АР, сохраненные на 5-й день, содержали 292 протеина с повышенной и 53 пониженной регуляции по сравнению с экзосомами АР-экзосом, сохраненными на 0-й день ( p <0.05, FC <0,83 или FC> 1,2). Затем мы выполнили анализ обогащения GO для анализа основной функции дифференциальных белков в экзосомах AP, хранящихся в день 0 и день 5. Результаты заключались в том, что активированные белки в экзосомах AP на 5-й день, т.е. которые в основном принадлежали клеточному компоненту соединения клеток, внеклеточной области и клеточной мембране, обладали молекулярными функциями связывания, каталитической активности, регуляции молекулярных функций, и структурная молекулярная активность; они могут играть важную роль в биологической адгезии, метаболизме и многоклеточном процессе организма (рис.5Б). Однако, как показано на рисунке 5C, белки с пониженной регуляцией в экзосомах AP дня-5, то есть в основном внеклеточная область и белковые комплексы, могут выполнять молекулярную активность связывания и активность переносчика и участвовать в многоклеточном процессе организма. .

Рис. 5.

Дифференциальный анализ белков между AP-экзосомами 0 и 5 дней. Тепловая карта показывает разницу в белках между экзосомами AP дня 0 и дня 5. B Гистограмма анализа обогащения GO (биологический процесс, клеточный компонент и молекулярная функция) активированных белков в экзосомах AP на 5-й день. C Гистограмма анализа обогащения ГО (биологический процесс, клеточный компонент и молекулярная функция) подавленных белков в экзосомах AP дня 5. D , E Пузырьковая диаграмма обогащенных путей KEGG активированных ( D ) или подавленных ( E ) белков в экзосомах AP дня 5.

Для дальнейшего изучения путей, в которых участвуют аберрантно регулируемые белки, мы провели анализ пути KEGG. Как показано на фиг. 5D, усиленные белки участвовали в основном в путях системной красной волчанки, вирусного канцерогенеза, инфекции Staphylococcus aureus , активации тромбоцитов и пути передачи сигналов ras-связанного белка (Rap1).Мы также смогли расшифровать, что белки с пониженной регуляцией были в первую очередь вовлечены в неправильную регуляцию транскрипции при раке и метаболизме холестерина (рис. 5E).

Влияние супернатантов АР и экзосом с терминальным накоплением на 5-й день на пролиферацию раковых клеток

Наш анализ метаболомики и протеомики в супернатантах и ​​экзосомах АР показал, что множественные метаболиты и белки участвуют в путях, связанных с раком. Мы оценили влияние супернатантов AP и экзосом на пролиферацию клеточных линий K562, HepG2 и HCT116 с помощью анализов CCK-8.Как показано на фиг. 6A-C, супернатанты AP, хранящиеся в день 5, могут сдерживать способность к пролиферации клеток K562, HepG2 и HCT116 более эффективно, чем супернатанты AP, хранящиеся в день 0. Однако экзосомы AP, сохраненные на 5-й день, мало влияли на способность к пролиферации раковых клеток K562, HepG2 и HCT116 (фиг. 6E, F).

Рис. 6.

Влияние супернатантов АР и экзосом с концевыми накопителями на пролиферацию раковых клеток. Диаграмма разброса показывает ингибирование супернатанта АР, хранящегося на 5-й день, на пролиферацию раковых клеток K562 ( A ), HepG2 ( B ) и HCT116 ( C ); данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение 3 независимых экспериментов, а статистическая значимость результатов была рассчитана с помощью теста Стьюдента t .*** р <0,001. Диаграмма разброса показывает подавление пролиферации раковых клеток K562 ( D ), HepG2 ( E ) и HCT116 ( F ) в супернатанте AP, свободном от экзосом, и экзосомах AP. ; данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение 3 независимых экспериментов, а статистическая значимость результатов была рассчитана с помощью теста Стьюдента t . *** р <0,001; ** p <0,01; * p <0.05.

Discussion

AP играют незаменимую роль в профилактике и лечении кровотечений у пациентов с тромбоцитопенией. Более того, накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что AP, которые могут вырабатывать PSL во время хранения [14, 15], вносят вклад в регуляцию иммунной системы и прогрессирование рака [16-21]. Это способствует глубокому пониманию характеристик точек доступа. Таким образом, важно изучить изменения, которые происходят в веществах в AP во время хранения.

Учитывая, что день 5 является конечным временем хранения AP в соответствии с китайскими требованиями к хранению крови, мы выбрали временную шкалу, состоящую из сохраненных AP в день 0 и день 5 в качестве объекта исследования.Мы смогли подтвердить, что АР, хранящиеся на сутки 0 и на 5, показали существенно различающуюся метаболомику в их супернатантах, и обнаружили, что активированные метаболиты ретиноата и 9-цис-ретиноевой кислоты в супернатантах АР, хранящихся на сутки 5, были обогащены раком. связанные пути KEGG. Есть также исследования, которые показывают, что ретиноат и 9-цис-ретиноевая кислота обратно пропорциональны злокачественным новообразованиям [22-25]. В некоторых сообщениях говорится, что ретиноат и 9-цис-ретиноевая кислота участвуют в регуляции иммунной системы.Существуют исследования, в которых сообщается, что ретиноат участвует в индукции регуляторных Т-клеток и ингибировании дифференцировки наивных Т-клеток в клетки Th27 [26–28], предполагая, что ретиноат играет важную роль в балансировании иммунной системы. Кроме того, 9-цис-ретиноевая кислота может индуцировать определенный фенотип регуляторных дендритных клеток, который подавляет мышиную аллергию замедленного типа, и она может подавлять воспалительную реакцию прикрепленных моноцитов и увеличивать их способность индуцировать классическую миграцию моноцитов [29, 30], что указывает на что он может подавлять иммунный ответ.Все эти данные напоминают нам, что супернатанты АР, хранящиеся на терминалах 5-го дня, могут регулировать злокачественные признаки рака и иммунный ответ. Наши результаты подтвердили представление о том, что супернатанты с концевыми запасами АР ингибируют пролиферацию раковых клеток. Наши результаты подтверждают, что AP претерпевают изменение метаболитов во время хранения. Однако мы полагаем, что терминально хранящиеся AP могут быть более полезными для онкологических больных и пациентов с иммуноопосредованной тромбоцитопенией. Это требует дальнейшего изучения.

Существует много исследований содержания микрочастиц тромбоцитов (PMP) [31-33], но лишь в нескольких из них изучались вариации белков в экзосомах AP. Мы выполнили протеомику iTRAQ, чтобы идентифицировать различные белки в экзосомах АР-экзосом, хранящихся в день-0 и день-5, и обнаружили, что в экзосомах АР-экзосом, сохраненных в день-5, было 292 протеина с повышенной и 53 с пониженной регуляцией. С помощью анализа KEGG мы обнаружили, что многие белки с повышенной регуляцией, такие как белок 14-3-3 η (YWHAH), белок 14-3-3 β / α (YWHAB) и пропротеин трансформирующего фактора роста β1 (TGFB1), а также белки с пониженной регуляцией такие как инсулиноподобный фактор роста, связывающий белок 3 (IGFBP3) и рецептор макрофагального колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R) в экзосомах AP, хранимых на 5-й день, были обогащены связанными с раком путями, такими как вирусный канцерогенез, нарушение регуляции транскрипции при раке и почечная недостаточность. клеточная карцинома.Многие авторы указали, что YWHAH, YWHAB и TGFB1 положительно коррелируют со злокачественными признаками рака [34-36], тогда как IGFBP3 и CSF1R отрицательно коррелируют с плохими результатами [37, 38]. Наши данные показали, что экзосомы АР, хранящиеся на 5-й день, не оказали значительного влияния на пролиферацию раковых клеток, что может быть связано с балансом между белками, способствующими развитию рака, и белками, связанными с ингибированием, в экзосомах АР.

Таким образом, наше исследование документирует изменения, которые происходят в метаболомике супернатанта AP и протеомике экзосом AP.Кроме того, супернатанты терминальных АР могут способствовать ингибированию пролиферации раковых клеток и поэтому, возможно, лучше подходят для использования у онкологических больных. Однако необходимы дальнейшие исследования для изучения механизма метаболитов надосадочной жидкости AP, участвующих в ингибировании пролиферации раковых клеток. Многие дифференциальные метаболиты и белки экзосом в свежеприготовленных и хранящихся на терминалах AP могут участвовать в регуляции воспаления, что напоминает нам о необходимости обратить внимание на переливание AP пациентам с воспалительными заболеваниями.Это требует дальнейшего изучения. Тем не менее, эти результаты улучшают наше понимание изменения веществ в AP во время хранения и их воздействия на раковые клетки, что может способствовать лучшему клиническому использованию AP.

Заявление об этике

Все доноры дали свое письменное информированное согласие, и это исследование было одобрено комитетом по этике Главного госпиталя Народно-освободительной армии Китая (НОАК).

Заявление о конфликте интересов

Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Источники финансирования

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (грант № 81770194) и Центром координированного медицинского развития пищеварительной системы Управления больниц Пекина (грант № XXX0108).

Вклад авторов

X.L. выполнил большинство экспериментов. Ю.З. проанализировали экспериментальные данные и составили рукопись. F.C. и Ю.Ю. оказал экспериментальную и техническую помощь в сборе данных. Д.В. разработал и руководил исследованием, а также внес большой вклад в изменение рукописи.Все авторы прочитали и одобрили окончательную версию.

Список литературы

  1. Элемари М., Сегатчиан Дж., Стакив Дж., Бош М., Сабри В., Губран Х. Проблемы трансфузии в гематологической онкологии и трансплантации гемопоэтических стволовых клеток — Обзор литературы и местный опыт.Transfus Apheresis Sci. 2017 июн; 56 (3): 317–21.
  2. Pitman JP, Basavaraju SV, Shiraishi RW, Wilkinson R, von Finckenstein B, Lowrance DW и др. Переход Намибии от объединенных тромбоцитов, полученных из цельной крови, к сборам тромбоцитов для афереза ​​от одного донора. Переливание. 2015 Июль; 55 (7): 1685–92.
  3. Камхие-Милц Дж., Мустафа С.А., Стерцер В., Челик Х., Кески С., Хоррамшахи О. и др. Профилирование секретомов супернатантов афереза ​​тромбоцитов во время обычного хранения с помощью микрочипов на основе антител. J Proteomics. 2017 Янв; 150: 74–85.
  4. Крюгер А.Л., Ростгаард К., Мидделбург Р.А., Керкхоффс Дж. Х., Эдгрен Г., Эрикструп К. и др.Время хранения концентратов тромбоцитов и риск получения положительного результата посева крови: общенациональное когортное исследование. Переливание. 2018 Янв; 58 (1): 16–24.
  5. Klinger MH. Поражение накопления тромбоцитов: ультраструктурные и функциональные аспекты. Ann Hematol. 1996 сентябрь; 73 (3): 103–12.
  6. Ткач М., Тери К.Связь через внеклеточные везикулы: где мы находимся и куда нам нужно идти. Клетка. 2016 Март; 164 (6): 1226–32.
  7. Tao SC, Guo SC, Zhang CQ. Внеклеточные везикулы, полученные из тромбоцитов: новый терапевтический подход. Int J Biol Sci. Июль 2017; 13 (7): 828–34.
  8. Sadallah S, Schmied L, Eken C, Charoudeh HN, Amicarella F, Schifferli JA.Эктосомы, полученные из тромбоцитов, снижают функцию NK-клеток. J Immunol. 2016 сентябрь; 197 (5): 1663–71.
  9. Dinkla S, van Cranenbroek B., van der Heijden WA, He X, Wallbrecher R, Dumitriu IE, et al. Микрочастицы тромбоцитов подавляют выработку ИЛ-17 регуляторными Т-клетками через Р-селектин. Кровь.2016 апр; 127 (16): 1976–86.
  10. Губран Х., Сабри В., Котб Р., Сегатчиан Дж., Бюрнуф Т. Микрочастицы тромбоцитов и рак: интимный перекрестный разговор. Transfus Apheresis Sci. 2015 Октябрь; 53 (2): 168–72.
  11. Губран Х.А., Элемари М., Радосевич М., Сегатчян Дж., Эль-Экиаби М., Бурнуф Т.Влияние переливания на рост и исход рака. Метастаз роста рака. 2016 март; 9: 1–8.
  12. Пиенимаэки-Ремер А., Коновалова Т., Мусри М.М., Сигруенер А., Ботчер А., Мейстер Г. и др. Транскриптомное профилирование старения тромбоцитов и внеклеточных везикул тромбоцитов. Переливание.2017 Янв; 57 (1): 144–56.
  13. Wang S, Jiang T, Fan Y, Zhao S. Протеомный подход показывает изменение белкового состава тромбоцитов человека после хранения при различных температурах. Тромбоциты. 2019; 30 (3): 403–12.
  14. Handigund M, Cho YG.Взгляд на хранение тромбоцитов и необходимость использования нескольких подходов. Ann Clin Lab Sci. 2015; 45 (6): 713–9.
  15. Сёдергрен А.Л., Тиннгард Н., Берлин Г., Рамстрём С. Реакция тромбоцитов во время хранения изучалась с помощью проточной цитометрии — формирование субпопуляций тромбоцитов и LAMP-1 в качестве новых маркеров повреждения накопления тромбоцитов.Vox Sang. 2016 февраль; 110 (2): 116–25.
  16. Рондина М.Т., Гарро О. Новые данные о тромбоцитах как иммунных и воспалительных эффекторных клетках. Фронт Иммунол. 2014 Декабрь; 5: 653.
  17. Рондина М.Т., Вейрих А.С., Циммерман Г.А.Тромбоциты как клеточные эффекторы воспаления при сосудистых заболеваниях. Circ Res. 2013 Май; 112 (11): 1506–19.
  18. Семпл Дж. У., Итальяно Дж. Э. младший, Фридман Дж. Тромбоциты и иммунный континуум. Nat Rev Immunol. 2011 Апрель; 11 (4): 264–74.
  19. Кузнецов Х.С., Марш Т., Маркенс Б.А., Кастаньо З., Грин-Колоцци А., Хэй С.А. и др.Выявление раковых образований в просвете молочной железы, которые создают поддерживающую опухоль макросреду, определяемую проангиогенными тромбоцитами и клетками, происходящими из костного мозга. Рак Discov. 2012 декабрь; 2 (12): 1150–65.
  20. Войтукевич М.З., Сьерко Э., Хемпель Д., Такер С.К., Хонн К.В. Связь тромбоцитов и ангиогенеза рака.Раковые метастазы Rev.2017 июнь; 36 (2): 249–62.
  21. Ng MS, Tung JP, Fraser JF. Поражения накопления тромбоцитов: что мы теперь знаем? Transfus Med Rev.2018 Апрель; 32 (3): S0887-7963 (17) 30189-X.
  22. Bama ES, Grace VMB, Sundaram V, Jesubatham PD.Синергетический эффект совместного лечения полностью транс-ретиноевой кислотой и 9-цис-ретиноевой кислотой на линии клеток рака легких человека на молекулярном уровне. 3 Biotech. 2019; 9 (4): 159.
  23. Wu J, Yang R, Zhang L, Li Y, Liu B, Kang H и др. Метаболомические исследования потенциальной роли 9-цис-ретиноевой кислоты в прогрессировании рака груди.Cancer Sci. Июль 2018; 109 (7): 2315–26.
  24. Эскра Дж. Н., Койпер Дж. В., Уолден П. Д., Босланд М. С., Озтен Н. Интерактивные эффекты 9-цис-ретиноевой кислоты и андрогена на пролиферацию, дифференцировку и апоптоз клеток рака простаты LNCaP. Eur J Cancer Пред. 2017 Янв; 26 (1): 71–7.
  25. Ши Би, Ли Л.М., Ю СК, Сюй С.П., Хан Р.[Подавление инвазии опухоли и метастазирования ретиноидом 4-APR]. Яо Сюэ Сюэ Бао. 1997. 32 (1): 33–7.
  26. Bettelli E, Carrier Y, Gao W., Korn T, Strom TB, Oukka M и др. Взаимные пути развития для генерации патогенных эффекторных Th27 и регуляторных Т-клеток. Природа.2006 Май, 441 (7090): 235–8.
  27. Сяо С., Джин Х., Корн Т., Лю С.М., Оукка М., Лим Б. и др. Ретиноевая кислота увеличивает Foxp3 + регуляторные Т-клетки и ингибирует развитие клеток Th27 за счет усиления управляемой TGF-бета передачи сигналов Smad3 и ингибирования экспрессии рецепторов IL-6 и IL-23. J Immunol.2008 август; 181 (4): 2277–84.
  28. Hill JA, Hall JA, Sun CM, Cai Q, Ghyselinck N, Chambon P и др. Ретиноевая кислота косвенно усиливает индукцию Foxp3, снимая ингибирование со стороны клеток CD4 + CD44hi. Иммунитет. 2008 ноябрь; 29 (5): 758–70.
  29. Краус Л.Ф., Шеурманн Н., Френцель Д.Ф., Тасдоган А., Вайс Дж. М..9-цис-ретиноевая кислота индуцирует особый регуляторный фенотип дендритных клеток, который модулирует мышиную аллергию замедленного типа. Свяжитесь с Dermat. 2018 Янв; 78 (1): 41–54.
  30. Сюй Дж., Дрю PD. 9-Цис-ретиноевая кислота подавляет воспалительные реакции микроглии и астроцитов. J Neuroimmunol.2006 февраль; 171 (1-2): 135–44.
  31. Майкл Дж. В., Вуртцель Дж. Г., Мао Г. Ф., Рао А. К., Колпаков М. А., Сабри А. и др. Микрочастицы тромбоцитов, проникающие в солидные опухоли, переносят миРНК, подавляющие рост опухоли. Кровь. 2017 Август; 130 (5): 567–80.
  32. Лян Х., Ян Х, Пань И, Ван И, Ван Н., Ли Л. и др.МикроРНК-223, доставляемая микровезикулами, происходящими из тромбоцитов, способствует инвазии клеток рака легкого посредством нацеливания на супрессор опухоли EPB41L3. Молочный рак. 2015 Март; 14 (1): 58.
  33. Лаффонт Б., Кордуан А., Пле Х., Дюшес А.С., Клотье Н., Бойлар Э. и др. Активированные тромбоциты могут доставлять мРНК регуляторные комплексы Ago2 • микроРНК к эндотелиальным клеткам через микрочастицы.Кровь. 2013 июл; 122 (2): 253–61.
  34. Канеко С., Мацумото К., Минамида С., Хираяма Т., Фудзита Т., Кодера Ю. и др. Инкрементальная экспрессия бета / альфа-белка 14-3-3 в моче коррелирует с продвинутой стадией и плохой выживаемостью у пациентов со светлоклеточной почечно-клеточной карциномой. Азиатский Pac J Cancer Prev.2016; 17 (3): 1399–404.
  35. Пак GY, Хан JY, Хан YK, Kim SD, Kim JS, Jo WS и др. Истощение 14-3-3 эта сенсибилизирует клетки глиобластомы к облучению из-за повышенной гибели митотических клеток. Cancer Gene Ther. 2014 Апрель; 21 (4): 158–63.
  36. Leitlein J, Aulwurm S, Waltereit R, Naumann U, Wagenknecht B, Garten W и др.Процессинг иммуносупрессивных про-TGF-бета 1,2 клетками глиобластомы человека включает цитоплазматические и секретируемые фурин-подобные протеазы. J Immunol. 2001 июн; 166 (12): 7238–43.
  37. Клюгер Х.М., Доллед-Филхарт М., Родов С., Качински Б.М., Лагерь Р.Л., Римм Д.Л. Экспрессия рецептора макрофагального колониестимулирующего фактора-1 связана с плохим исходом при раке молочной железы по данным крупномасштабного когортного тканевого микроматричного анализа.Clin Cancer Res. 2004 Янв; 10 (1 Пет 1): 173–7.
  38. Ян Л., Ли Дж, Фу С., Рен П, Тан Дж, Ван Н. и др. Повышение регуляции белка-3, связывающего инсулиноподобный фактор роста, связано с метастазами в мозг при аденокарциноме легкого. Mol Cells. 2019 Апрель; 42 (4): 321–32.

Автор Контакты

Deqing Wang

Отделение переливания крови, Китайская больница PLA

28 Fuxing Road

Пекин 100853 (Китай)

deqingw @ vip.sina.com


Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Поступила: 17 декабря 2019 г.
Дата принятия: 5 июля 2020 г.
Опубликована онлайн: 25 сентября 2020 г.
Дата выпуска: апрель 2021 г.

Количество страниц для печати: 12
Количество фигур: 6
Количество столов: 0

ISSN: 1660-3796 (печатный)
eISSN: 1660-3818 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/TMH


Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме и любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарственного средства: авторы и издатель приложили все усилия для обеспечения того, чтобы выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствовали текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Ответить

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *