1 пн 93 2: 1пн93-2 прицел ночного видения | Festima.Ru

Содержание

прицел ночной 1пн93 1

прицел ночной 1пн93 1

Питание прицела осуществляется с помощью специальных быстросменный аккумуляторных блоков Pulsar DNV либо можно использовать контейнер для батарей формата АА. Время работы прицела от одного комплекта батарей в минимальном режиме потребления примерно четыре часа. Очевидно, что при покупке прицела стоит приобрести несколько запасных аккумуляторов.

yukon n475s, ночной прицел пульсар
ночной прицел недорогой купить
карабин тигр ночной прицел
купить ночной прицел для охоты юкон
как работает прибор ночного видения

Хотя бы 93-2, чтобы не было так мучительно обидно. 93-4 далеко не аналог 1-2-3.Кроме крепления ничего общего. Gratius. 25-5-2019 22:48 Gratius. Планку вивер на крышку боковую 1пн93-1 и Пульсар-915, на все хватит, но не ближе 20 метров. red_shuhov. 27-5-2019 23:35 red_shuhov. Совсем ещё в недавние времена, когда о ночных прицелах никто не знал, охотились с подствольниками.

Зверь реагировал по разному- когда стоял и не обращал никакого внимания на фонарь, а бывало срывался как угорелый. diman56. 1ПН93-1. Ночной прицел. Предназначен для наблюдения и ведения прицельной стрельбы в темное время суток при свете звезд и Луны. Устанавливается на все виды стрелкового оружия, имеющих боковую планку крепления — автоматы АК74, АК74М, АК101, АК102, АК105, АК107, АК108, АН94, снайперские винтовки АС, ВСС. Прицел оснащен механизмами введения углов прицеливания, выверки по высоте и направлению и имеет подсветку сетки с двумя положениями регулировки яркости свечения. Технические характеристики. 1ПН93-1. 1ПН93-2. 1ПН93-3. 1ПН93-4. Дальность видения при свете Луны и звезд , м. 350. Прицел ночного видения 1пн93-2. 105 000 . Омская область, Омский р-н, д. Приветная. 1 неделю назад. 1 пн 93 2. 90 000 . Ростовская область, Таганрог. 1 неделю назад. Ночной прицел 1пн93-2. 35 000 . Краснодарский край, Краснодар. 1 неделю назад. Ночник 1пн93-3. 120 000 . Краснодарский край, Краснодар.
1 неделю назад. Ночная оптика 1пн93-2. 89 000 . Краснодарский край, Краснодар. 2 недели назад. 1пн93-4 ночной прицел. 120 000 . Свердловская область, Екатеринбург. Ночной прицел 1ПН93-1. Появление электронно-оптических преобразователей (ЭОП) 2ч- поколения стало базой для разработки в 90-х годах серии ночных приборов нового поколения. Особенности 1ПН93-1 (2,3,4): — применение высокоэффективных оптических систем и современных ЭОП 2 и 3 поколений; — простота и удобство в эксплуатации; — стандартное крепление на российское стрелковое оружие с боковой планкой крепления; — механизмы выверки с оружием; — регулируемая яркость прицельного знака; — автоматическая защита от засветок; — съемная диафрагма или фильтр для работы в светлое время суток; — комплектуются устройством выверки, устройством контроля. Прицел ночного видения ПН6К является гражданским вариантом прицела ПН93. Принцип работы основан на усилении светового потока электронно-оптическим преобразователем 2+ поколения. Прибор позволяет вести прицеливание на расстояниях до 300 метров без использования ИК-подсветки.
Прицельная сетка. Основное отличие от аналогов связано с монолитным боковым кронштейном. Защелка кронштейна универсальная, позволяет устанавливать ПН6К на охотничьи ружья Тигр, Сайга, Вепрь. Работа ЭОПа и подсветки осуществляется за счет одного элемента питания типоразмера АА. Батарейный отсек расположен в корпусе кронштейна. Над крышкой блока питания расположен тумблер включения прибора. Ночной прицел 1ПН-93, в любой своей модификации, в сравнении с гражданскими моделями вовсе не так уж и дешев, попадая во вторые руки. Первые руки не в счет. Дабы помочь тем, кто еще стоит перед выбором, предлагаю высказаться не теоретикам, а тем кто ими владеет. Гарантия на изделие 1ПН93-2 10,5 лет и 12500 выстрелов, и эту гарантию дает приемка ПЗ,так что кот в мешке это сделанный на коленке ПН-6К с бумажной гарантией. Про то что на армейские приборы ЭОПы ставятся только прошедшие приемку и испытания( в отличие от некондиции и третий сорт не брак в ПН-6К) надеюсь тоже рассказывать не нужно. Прицел ночной.
Прицелы ночные 1ПН93-1 АС, 1ПН93-1 АК, 1ПН93-2 РПГ, 1ПН93-2 АК, 1ПН93-3 СВД, 1ПН93-3 ПКМ, 1ПН93-4 СВД предназначены для обнаружения, распознавания и ведения прицельной стрельбы на дальностях прямого выстрела при естественной освещенности. ОСОБЕННОСТИ 1ПН93-1(2,3,4). применение высокоэффективных оптических систем и современных ЭОП 2+ и 3 поколений; простота и удобство в эксплуатации Ночные прицелы 1ПН-93 предназначены для наблюдения, разведки местности и ведения прицельного огня в темное время суток при свете Луны и звезд. Прицелы оснащены механизмами выверки по высоте и направлению, введения углов прицеливания и обладают подсветкой сетки с двумя положениями регулировки яркости свечения. Могут использоваться при температуре воздуха от -50 до +50 °C. В первых трех прицелах используется ЭОП — электронно-оптический преобразователь поколения 2+, в прицеле 1ПН-93-4 установлен ЭОП 3-го поколения. Для работы в светлое время суток прицелы комплектуются съемным фильтром или диафрагмой. Изделие 1ПН93-2 АК-74 руководство по эксплуатации.
You (Tube. 44 7345 утвержден алз. 812. 222-10 рэ-лу. ИЗДЕЛИЕ 1ПН93-2 АК-74 Руководство по эксплуатации АЛЗ. 812. 222-10 РЭ. СОДЕРЖАНИЕ. 1 Описание и работа. 1.1 Назначение. 1.2 Характеристики. 1.3 Состав прицела. 1.4 Устройство и работа. 1.5 Средства измерения, инструмент и принадлежности 1,6 Маркировка и пломбирование. 1.7 Упаковка. 2 Использование по назначению. 2.1 Эксплуатационные ограничения. Прицел ночной модульный, индекс 1ПН93-2, поколения 2+, предназначен для наблюдения за полем боя и ведения прицельной стрельбы в условиях естественной ночной освещенности из автомата АК74М (версия 1ПН93-2 АК-74) и гранатомета РПГ-7В3 (версия 1ПН93-2 РПГ). Прицел эксплуатируеся при температуре окружающей среды от плюс 50 до минус 50 по Цельсию и относительной влажности воздуха до 100% при температуре 25С. Прицел обеспечивает в ясную безлунную ночь при естественной ночной. Разработкой ночных прицелов занимались много и плотно. В середине 90-х новое поколение специальных прицелов увидело свет. 1ПН 93 – не просто серия ночных прицелов особой конструкции, но и целая модная коллекция прицельных приспособлений практически для всего ряда отечественного стрелкового оружия.
Магнус крепится практически на все – от обычного автомата Калашникова АК-74М и винтовки СВД до специального бесшумного вооружения – малошумного автомата Вал и специальной снайперской винтовки ВСС. В ЦКБ Точприбор, по признаниям специалистов, не просто смогли разработать отличный прицел для работы в сложных условиях, но и задать направление работы целому ряду НПП и НИИ.

ночной прицел недорогой купить прицел ночной 1пн93 1

yukon n475s ночной прицел пульсар ночной прицел недорогой купить карабин тигр ночной прицел купить ночной прицел для охоты юкон как работает прибор ночного видения

прибор ночного видения отзывы Цифровой прицел ночного видения Yukon в Якутске

обзор прицела день ночь юкон фотон marvell yukon ethernet

прицел ночной 1пн93 1 карабин тигр ночной прицел

прибор ночного видения отзывы
Цифровой прицел ночного видения Yukon в Якутске
обзор прицела день ночь юкон фотон
marvell yukon ethernet
Прицел Yukon купить в Волгодонске
купить прибор ночного видения б у

Базовая кратность может быть увеличена посредством плавного цифрового зума. Меню прицела позволяет охотнику установить желаемый диапазон и шаг изменения кратности 4-8х с шагом 0,5х или 4-16x с шагом 1х. Три профиля для параметров пристрелки, которые можно использовать для сохранения пристрелки на разные дистанции, типов боеприпасов или для различного оружия. В каждом профиле можно сохранить до 10 параметров пристелки, итого прицел сохраняет до 30 значений СТП (средняя точка попадания). Модельный Yukon Sightline представлен четырьмя моделями с индексами N450, N455, N470, N475 – отличаются они между собой размером объектива и типом встроенного осветителя и, как следствие, у прицелов разный диапазон кратности, разная дистанция наблюдения и ширина поля зрения.

1ПН93

Россия

Прицелы 1ПН93 предназначены для наблюдения за полем боя и ведения прицельной стрельбы в темное время суток. Прицел оснащен механизмами введения поправок по высоте и направлению, подсветкой сетки с двумя положениями регулировки яркости свечения.

Прицелы 1ПН93 могут быть установлены на любое стрелковое оружие, оборудованное боковым кронштейном для его крепления (СВД, АК-74М, АС «ВАЛ», ВСС «Винторез», АКС-74УН, РПК-74М, ПКМ и т.д.).

Прицел обеспечивает в ясную безлунную ночь при естественном ночном освещении и прозрачной атмосфере, при расположении целей на фоне открытой местности с зеленым травяным покровом высотой не более 0,3 м опознавание целей и ведение прицельной стрельбы на дальностях прямого выстрела. Дальность опознавания по ростовой фигуре человека, обеспечиваемая прицелом, зависит от естественной ночной освещенности, прозрачности атмосферы и контраста между целью и фоном. При повышенной освещенности, в лунную ночь, при наличии внешних подсветок, если цель расположена на светлом фоне (песок, снег), дальность опознавания возрастает. При пониженной освещенности, низкой облачности пониженной прозрачности атмосферы, если цель расположена на темном фоне (пашня, лес и т.д.), дальность опознавания снижается.

Принцип действия прицела 1ПН93 основан на усилении изображения малой яркости, создаваемого объективом на фотокатоде электронно-оптического преобразователя (ЭОП), в изображение, по яркости достаточное для рассмотрения через окуляр.

Основным источником питания прицела является аккумулятор НЛЦ-0,9 ТУ 3482-001-04682597-96, дублирующим источником питания является элемент А316 «Прима» ТУ16-529.858-74.


 

Прицел ночной 1ПН93-3

Прицел ночной 1ПН93-2, установленный на винтовку СВД

Прицел ночной 1ПН93-1

Вид через прицел 1ПН93

 


 

Тактико-технические характеристики
1ПН93-1 1ПН93-2 1ПН93-3  1ПН93-4
Дальность видения при свете Луны и звезд , м 350 400 500 600
Поколение ЭОПа 2+    3
Увеличение, крат 4 4 5 4
Поле зрения при удалении выходного зрачка 40 мм, град 7 7 5 10
Диамет выходного зрачка, мм 6
Удаление выходного зрачка, мм 50
Источник питания АА, 1шт.
Напряжение питания, В 1,5
Время работы от одного источника питания, час. 10
Габаритные размеры, мм 207х176х79 207х193х90 220х198х100 250х190х81
Масса, кг  0,95 1,2   1,25 1,25 

 

(с) 2011 Костин К. А.

Прицел ночной модульный оптический 1ПН93

Подробности
Категория: Прицелы
Дата публикации 25.06.2013 20:21
Автор: Super User
Просмотров: 18695

 

 

Прицел ночной модульный оптический 1ПН93 предназначен для наблюдением за полем боя и ведения прицельной стрельбы в условиях естественной ночной освещенности.

 

 

 

 

Технические характеристики прицела ночного модульного оптического 1ПН93 и его модификаций

 

Тип  1ПН93  1ПН93-1  1ПН93-2  1ПН93-3 1ПН93-4
Дальность видимости цели, м:  500  350  400  500 600
Видимое увеличение, крат:  х3,7  х4  х4  х5 х4
Поколение ЭОП:  2+  2+  2+  2+ 3
Диаметр выходного зрачка, мм: 6 6 6 6 6
Поле зрения при удалении выходного зрачка 40 мм, град: 10 7 7 5 10
Источник питания, тип и количество: АА, 1шт АА, 1шт АА, 1шт АА, 1шт АА, 1шт
Напряжение питания, В: 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
Время непрерывной работы, час: 10 10 10 10 10
Габаритные размеры, мм:  250x81x182  207х176х79 207х193х90 220х198х100 250х190х81
Масса, кг:  1,5  0,95  1,2  1,25  1,25
Модель оружия: СВД, СВУ, СВДС АК74, АК74М, АК101, АК102, АК105, АК107, АК108, АН94, АС, ВСС АК74, АК74М, АК101, АК102, АК105, АК107, АК108, АН94, РПГ-7В ПКМ, СВД, СВУ СВД

 

 

Особенности и преимущества прицела 1ПН93

 

— Простота и удобство эксплуатации

— Сохранение полной работоспособности в диапазоне температур воздуха от +50 до -50°С и относительной влажности воздуха до 100%

— Наличие в комплекте дополнительных приспособлений выверки с оружием без пристрелки

— Автоматическая защита от засветок

— Регулируемая яркость прицельной сетки

— Съемный фильтр или диафрагма для работы в светлое время суток

 

 

История создания

 

В 90-х годах XX столетия, после появления ЭОП (Электронно-оптических преобразователей) второго поколения, начались вестись активные разработки новых приборов ночного видения нового поколения, в частности — ночных оптических прицелов к различным типам оружия с целью замены устаревших моделей с более слабыми техническими характеристиками и более емкими массо-габаритными характеристиками.

При их создании использовался метод модульного конструирования, что позволило создать широкий диапазон линеек прицелов, которые обеспечивали максимальное согласование тактико-технических характеристик оружия и технических характеристик самих прицелов.

Прицел 1ПН93 под названием «Малыш» был разработан в 1995 году в лабораториях научно-производственного центра ОАО ЦКБ «Точприбор» (г. Новосибирск), в настоящее время производится на ОАО Производственное объединение «Новосибирский приборостроительный завод».

Позже, на его базе был разработан целый ряд новых малогабаритных прицелов для различного типа оружия (снайперских винтовок, автоматов, пулеметов, гранатометов): 1ПН93-1, 1ПН93-2, 1ПН93-3, 1ПН93-4, которые также успешно прошли все необходимые испытания, поставлены на производство и приняты на вооружение армии, полиции и внутренних войск РФ.

Прицелы данной линейки крепятся на боковой планке крепления с левой стороны оружия, что при необходимости позволяет вести огонь прицеливаясь также по его открытым прицельным приспособлениям.

 

 

 Прицел ночной модульный оптический 1ПН93 на снайперской винтовке СВДС

 

 Прицел ночной модульный оптический 1ПН93 на снайперской винтовке СВДС со сложенным прикладом

 

 Прицел ночной модульный оптический 1ПН93 на снайперской винтовке СВДС

Россияне сыграют с Данией в четвертьфинале Олимпиады-2022 : Новости : Континентальная Хоккейная Лига (КХЛ)

16 февраля состоятся четвертьфинальные игры олимпийского хоккейного турнира в Пекине. Подопечным Алексея Жамнова будут противостоять датчане.
7:10. Сборная США — сборная Словакии

В первом четвертьфинале американцы сыграют со Словакией, которая пробилась в плей-офф за счёт победы над финалистом прошлой Олимпиады Германией (4:0) в квалификационном этапе. Успех команде принесли представители КХЛ: нападающий минского «Динамо» Либор Гудачек отметился заброшенной шайбой, в активе форварда «Авангарда» Петера Цегларика 1+1. Точный бросок на свой счёт записал и Марек Хривик, начинавший текущий сезон в нижегородском «Торпедо».

Сборная США добыла прямую путёвку в четвертьфинал, минуя квалификацию за счёт первого места в группе. «Звёздно-полосатые» выиграли 100% встреч, оказавшись сильнее Канады (4:2), Германии (3:2) и Китая (8:0). Главного бомбардира американской команды Шона Фаррелла (3+3) ожидает дуэль с юной словацкой звёздочкой — Юрай Слафковски является самым результативным игроком своей национальной команды с 4+0. Успешно выступают в составе США и представители КХЛ. В активе нападающего «Торпедо» Энди Миле 1+3, а защитник «Ак Барса» Стивен Кэмпфер — самый результативный в оборонительной линии с 1+2.

Любопытной может получиться и дуэль двух лучших голкиперов олимпийского турнира. Американец Дрю Коммессо идёт вторым по ключевым показателям (процент отражённых бросков — 96,36, коэффициент надёжности — 1,00). Опережает его словакций вратарь минского «Динамо» Патрик Рибар (96,49% отражённых бросков с коэффициентом надёжности 0,76). 

9:00. Cборная ОКР — сборная Дании

Соперником российской сборной в четвертьфинале олимпийского турнира станут датчане. Команда, впервые отобравшаяся в своей истории на Игры, взяла верх в квалификации над латвийцами (3:2). Четвертьфиналисты уже встречались на групповом этапе — и тогда победа осталась за подопечными Алексея Жамнова (2:0). До этого сборная России еще два раза обыграла Данию с сухим счётом — на чемпионатах мира 2017 и 2021 года (оба матча — 3:0). Призрачным преимуществом датчан может стать то, что свой последний матч на турнире они провели за день до плей-офф, а сборная России, попавшая в четвертьфинал благодаря первому месту в группе, последнюю встречу сыграла 12 февраля.

11:40. Сборная Финляндии — сборная Швейцарии

Финнам в четвертьфинале Олимпиады досталась сборная Швейцарии, сенсационно переигравшая в квалификационном этапе чехов (4:2). Представители Суоми, потенциальные соперники россиян по полуфиналу, вышли в плей-офф, заняв первое место группе. Они выиграли три из трёх матчей у Швеции (4:3 ОТ), Словакии (6:2) и Латвии (3:1). Финны в Пекине блестяще действуют в большинстве, реализовав четыре из девяти представившихся возможности (44,44%). У Швейцарии более скромные, но, тем не менее, качественные показатели — четыре заброшенных шайбы после четырнадцати попыток (28,57%).

Основной вратарь швейцарцев Леонардо Дженони обходит финна Харри Сятери по ключевым показателям (95,59% отражённых бросков при коэффициенте надёжности 1,44). В активе голкипера «Сибири» — 94,34%; 1,50. В атаке Суоми доминирует уфимская связка Сакари МанниненТему Хартикайнен. Маннинен идёт третьим в общей бомбардирской гонке с 3+2, Хартикайнен — седьмой с 1+4. В составе швейцарцев самый результативный игрок — Энцо Корви (1+3).

16:30. Сборная Швеции — сборная Канады

Сборной Канады пришлось пройти через сито квалификационного этапа из-за второго места в группе. «Кленовые листья» накануне не испытали проблем в противостоянии с хозяевами Олимпиады, сборной Китая (7:2). Шведы в групповом этапе также финишировали вторыми, однако стали лучшими среди всех команд на этой позиции — и получили прямую путёвку в четвертьфинал.

Лидером атаки «Тре Крунур» является форвард ЦСКА Лукас Валльмарк, отметившийся четырьмя заброшенными шайбами в трёх играх. В составе канадцев — лучший бомбардир турнира Адам Тамбеллини (3+4). Роль первой скрипки играют и представители КХЛ. В активе форварда «Ак Барса» Джордана Уила 3+2, у нападающего московского «Динамо» Эрика О’Делла — 2+3.

Обе команды довольно успешно действуют в большинстве. Канадцы реализовали 37,5% попыток, шведы — 31,25%. По игре в меньшинстве «кленовые листья» и вовсе являются лидерами турнира в Пекине (92,86% нейтрализации), в то время как у «Тре Крунур» худший показатель среди всех участников (60%).

С клиентами Tele2 работают лучшие эксперты в индустрии контактных центров

Tele2, альтернативный оператор мобильной связи, предоставляет своим абонентам клиентский сервис мирового уровня. Такую оценку контактным центрам Tele2 дали эксперты международной премии Global Top Ranking Performers Awards. Сотрудники оператора получили награды во всех восьми номинациях.

Жюри премии присудило Tele2 награды за лучший клиентский опыт, программу наставничества и подготовки управленческих кадров, IT-поддержку контактных центров, профессиональное кадровое планирование, оперативный менеджмент и управление контактным центром.  

Премия Global Top Ranking Performance Awards является высшей отраслевой наградой для индустрии контактных центров. В 2021 году на конкурс было подано более 2000 заявок из более чем 80 стран. В октябре минувшего года сотрудники Tele2 победили в континентальном этапе состязания, после чего их проекты и достижения были представлены на глобальном первенстве. 

Клиенты Tele2 могут обратиться за сервисной поддержкой через любой удобный канал: позвонить по телефону в контактный центр, задать вопрос на сайте, в мобильном приложении или мессенджерах. Специалисты дистанционного сервиса обрабатывают 82 тысячи запросов ежедневно и 2,5 млн в месяц. Они демонстрируют лучшие показатели в отрасли по скорости и качеству облуживания: среднее время разговора по телефону составляет 2,5 минуты, время ожидания ответа – 46 секунд. На первой линии обращения решается 98,5% запросов, удовлетворенность клиентов сервисом составляет 93%.

Все больше клиентов для общения со службой поддержки компании используют мобильное приложение оператора, где число обращений выросло за год на 25%. При этом самым популярным способом остается звонок в службу поддержки, на втором месте – мобильное приложение Tele2. Пока наименьшую долю занимают запросы от клиентов в соцсетях и мессенджерах. Больше всего обращений приходит через соцсеть «ВКонтакте» (73%), далее по популярности – Instagram (12%), «Одноклассники»(3%), Twitter (2%), Tik-Tok (2%), Facebook (1%), остальные 7% – это консультации в форумах и чатах. Клиент может задать вопрос специалисту в мессенджерах WhatsApp, Viber и Telegram. Самые популярные темы обращений в 2021 году – тарифы, мобильный интернет и самообслуживание. Эксперты Tele2 проводят прямые эфиры для пользователей «ВКонтакте», которые в минувшем году посмотрели более 5 млн человек.

В ежедневной практике сотрудников Tele2 много необычных историй помощи абонентам. В 2021 году компания выпустила сериал о работе клиентского сервиса, основанный на реальных обращениях. Первые две серии уже набрали более 17 млн просмотров. В этом году компания планирует выпустить продолжение сериала.  
Елена Юрина, директор по дистанционному сервису Tele2:

«Результаты нашей работы вновь получили признание мировых экспертов в сфере клиентского обслуживания. Это доказывает, что мы по-прежнему задаем тренды и высокие стандарты в отрасли. При этом главным для нас является признание и отклик от пользователей наших услуг. В центре внимания Tele2 – интересы, потребности и ожидания клиента. Специалисты службы личной поддержки обладают высоким уровнем компетенций и эмпатии, что помогает им быстро и эффективно решать вопросы абонентов». 
 

Октановая стабильность

: высокооктановое топливо в сравнении с низкооктановым топливом

Октановое число

— самое обсуждаемое свойство бензина. Это неудивительно, потому что выбор октанового числа бензина — это единственный выбор, который есть у потребителя, за исключением того, на какой станции его покупать. В этой статье мы сосредоточимся на стабильности октанового числа топлива для насосов с октановым числом 87 и 93 по сравнению с гоночным топливом и на том, что вы можете сделать, чтобы предотвратить потерю октанового числа в вашем топливе.

Необходимо кратко рассмотреть, что такое октановое число, чтобы глубже погрузиться в вопросы стабильности.На заправочных станциях в Соединенных Штатах октановое число обычно отображается в виде числа от 87 до 93. Это число известно как антидетонационный индекс (AKI). AKI представляет собой среднее значение R по исследовательскому октановому числу (RON) и M по поисковому октановому числу (MON) (Totten). По сути, эти числа представляют собой шкалу для измерения того, сколько тепла и давления можно приложить к топливу, прежде чем оно самопроизвольно воспламенится. Самовозгорание является источником детонации двигателя, которая может быстро повредить двигатель. Октановые числа важны, потому что разные двигатели подвергают топливо воздействию разного давления и тепла.Двигатели должны использовать топливо с соответствующим октановым числом, чтобы избежать детонации и обеспечить надежную работу.

Ключевым аспектом стабильности бензина является давление паров. Это определяется тем, какое давление создается внутри герметичного топливного бака, когда топливо нагревается до 100°F. Более высокое давление пара предполагает более высокую концентрацию низкокипящих углеводородов, которые испаряются при температуре ниже 100°F. Топливные насосы с высоким (12 фунтов на квадратный дюйм, psi) давлением паров используются в холодную погоду, чтобы предотвратить проблемы с запуском двигателя из-за низких температур.Топливо для насосов ограничено максимальным давлением 7,8–9 фунтов на квадратный дюйм в теплую погоду в зависимости от округа и штата (www.epa.gov). При хранении в паронепроницаемом контейнере давление паров может поддерживаться в течение длительного периода времени. Топливо, подвергающееся воздействию атмосферы, может потерять легкие компоненты в течение нескольких дней. Со временем по мере снижения давления паров топливо может стать несвежим. Несвежее топливо не так легко испаряется и может вызвать неровный холостой ход двигателя и затрудненный запуск. Бутан — это летучий компонент бензина, используемый для регулирования давления паров в соответствии с сезонными потребностями.Топливо для холодной погоды имеет более высокие концентрации бутана. Бутан имеет высокое октановое число смеси, что помогает производителям достичь целевых значений октанового числа. Основным недостатком бутана является то, что он кипит при 32°F. Если топливный бак выходит в атмосферу, бутан может начать испаряться, если дневная температура не опускается ниже нуля. Это делает топливо для холодной погоды более восприимчивым к потере давления паров и снижению октанового числа.

Топливо с октановым числом

87, как правило, менее очищено и содержит больше нестабильных углеводородов.По прошествии месяцев хранения эти нестабильные компоненты вступают в реакцию с образованием смол, лаков и углеводородов с более низким октановым числом. В результате октановое число топлива с октановым числом 87 может снизиться в течение нескольких месяцев, особенно при хранении в далеко не идеальных условиях. Топливо с октановым числом 93 более очищено и содержит более стабильные углеводороды. Эти стабильные углеводороды могут работать в 2-3 раза дольше, чем топливо с октановым числом 87. Даже при надлежащем хранении бензин с октановым числом 87 может начать разлагаться через 3 месяца, а топливо с октановым числом 93 должно прослужить ближе к 9 месяцам, прежде чем деградация станет заметной.Имейте в виду, что топливо с октановым числом 93 по-прежнему подвержено потере октанового числа, а давление паров снижается из-за испарения бутана.

Стабильность октанового числа в гоночном топливе сильно отличается, потому что качество топлива ценится больше, чем стоимость производства, в отличие от газовой промышленности, где затраты определяют большинство решений по переработке. Большая часть любого качественного гоночного топлива — это постоянство. Гоночное топливо должно иметь высокое октановое число, что позволяет увеличить степень сжатия и уровень наддува. Для достижения высокого октанового числа и стабильного состава чистые химические компоненты смешиваются с высокоочищенным бензином. Компоненты, используемые в гоночном топливе Sunoco, очень стабильны и могут сохранять октановое число более 2 лет при правильном хранении. У нас есть результаты испытаний, подтверждающие стабильность октанового числа в нашем неэтилированном, этилированном, безэтаноловом и этаноловом топливе. Проблема давления паров бутана решается за счет использования химических компонентов, которые кипят около 80°F. Более высокая температура кипения означает, что снижение давления паров не будет таким распространенным явлением, пока топливо не будет подвергаться воздействию температур выше 80°F.

Некоторые виды неэтилированного топлива с высоким октановым числом, 260 GT Plus и Sunoco EVO 10, а также присадки для повышения октанового числа содержат присадку MMT.ММТ является очень эффективным средством для повышения октанового числа и не вредит кислородным датчикам или каталитическим нейтрализаторам, поэтому идеально подходит для современных автомобилей. Обратите внимание, что эта присадка разлагается под воздействием солнечного света и может потерять все свойства повышения октанового числа в течение нескольких минут после воздействия (Л. Тер Хаар). Разложившийся ММТ осядет на дно контейнера в виде вещества цвета ржавчины, которое может засорить топливопроводы и фильтры. Необходимо соблюдать особую осторожность при хранении и обращении с топливом ММТ, чтобы свести к минимуму контакт с солнечным светом. Присадка стабильна в бензине до тех пор, пока на топливо не попадает УФ-свет.Sunoco 260 GT Plus и Sunoco EVO 10 — единственные гоночные топлива Sunoco, содержащие ММТ.

Условия хранения сильно влияют на октановую стабильность

. Правильное хранение может сохранить октановое число в течение многих лет, но неправильное хранение может снизить октановое число и ухудшить качество топлива в течение нескольких недель. Вот почему мы предоставляем информацию о правильном хранении на нашем веб-сайте. Нажмите здесь, чтобы просмотреть наши рекомендации по хранению. http://www.sunocoracefuels.com/tech-article/race-fuel-storage

 

Особая благодарность Университету штата Миннесота Манкато, студентам факультета технологии автомобильного машиностроения, за предложение темы для этой статьи.

Автор:

Zachary Santner
Технический специалист
Sunoco Race Fuels
Рабочий телефон: (610) 859-1821

Ресурсов:

  • Тоттен, Джордж Э., Стивен Р. Уэстбрук и Раджеш Дж. Шах. Справочник по горюче-смазочным материалам: технология, свойства, эффективность и испытания. Западный Коншохокен, Пенсильвания: ASTM International, 2003. Печать.
  • https://www.epa.gov/gasoline-standards/gasoline-reid-vapor-pressure
  • Л. Тер Хаар, М. Э. Гриффинг, М.Брандт, Д.Г. Обердинг и М. Капрон (1975) Метилциклопентадиенилмарганцевый трикарбонил как антидетонатор: состав и судьба марганцевых выхлопных газов, Журнал Ассоциации по борьбе с загрязнением воздуха, 25:8, 858-859, DOI: 10.1080/00022470.1975.10470152

%PDF-1.4 % 1 0 объект >>> эндообъект 2 0 объект >поток 2012-07-19T11:34:53-05:002012-07-19T11:35:50-05:002012-07-19T11:35:50-05:00Adobe InDesign CS5 (7.0.4)

  • 1JPEG256256/9j/4AAQSkZJRgIABAgEAB /7QAsUGhvdG9zaG9wIDMuMAA4QklNA+0AAAAAABAASAAAAAAEA AQBIAAAAAQAB/+4AE0Fkb2JlAGSAAAAAAAQUAAgAD/9sAhAAMCAgICAgMCAgMEAsLCxAUDg0NDhQY EhMTExIYFBIUFBQUEhQUGx4eHhsUJCcnJyckMjU1NTI7Ozs7Ozs7Ozs7AQ0LCxAOECIYGCIyKCEo MjsyMjIyOzs7Ozs7Ozs7Ozs7Ozs7OztAQEBAQDtAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQED/wAARCAEA AMYDAREAAhEBAxEB/8QBQgAAAQUBAQEBAQEAAAAAAAAAAwABAgQFBgcICQoLAQABBQEBAQEBAQAA AAAAAAABAAIDBAUGBwgJCgsQAAEEAQMCBAIFBwYIBQMMMwEAAhEDBCESMQVBUWETInGBMgYUkaGx QiMkFVLBYjM0coLRQwclklPw4fFjczUWorKDJkSTVGRFwqN0NhfSVeJl8rOEw9N14/NGJ5SkhbSV xNTk9KW1xdXl9VZmdoaWprbG1ub2N0dXZ3eHl6e3x9fn9xEAAgIBAgQEAwQFBgcHBgI7AQACEQMh MRIEQVFhcSITBTKBkRShsUIjwVLR8DMkYuFygpJDUxVjczTxJQYWorKDByY1wtJEk1SjF2RFVTZ0 ZeLys4TD03Xj80aUpIW0lcTU5PSltcXV5fVWZnaGlqa2xtbm9ic3R1dnd4eXp7fh2+f3/9oADAMB AAIRAxEAPwD0Xp/T8A4GMTjUkmmuT6bf3R5JKYZlv1c6c9leccTHdZq0WhjSR469tOUqSAS4+f8A Wn6r4rLDi4rc17JAFVTA1xGmj37QW+YnyTxjkejIMEyLp0egZfSuv4BzqcKqsNeayNjXAkaOlrto kQ4dh5JgYyKLpfs/p/8A3Gp/7bb/AHJIV+z+n/8Acan/ALbb/ckpX7P6f/3Gp/7bb/ckpX7P6f8A 9xqf+22/3JKV+z+n/wDcan/ttv8AckpX7P6f/wBxqf8Attv9ySlfs/p//can/ttv9ySlfs/p/wD3 Gp/7bb/ckpX7P6f/ANxqf+22/wBySlfs/p//AHGp/wC22/3JKV+z+n/9xqf+22/3JKV+z+n/APca n/ttv9ySlfs/p/8A3Gp/7bb/AHJKV+z+n/8Acan/ALbb/ckpX7P6f/3Gp/7bb/ckpX7P6f8A9xqf +22/3JKV+z+n/wDcan/ttv8AckpX7P6f/wBxqf8Attv9ySlfs/p//can/ttv9ySlfs/p/wD3Gp/7 bb/ckpr5PT8AXYsY1Otxn9G3/RW+SSmx0/8A5Pxv+Jr/AOpCSnlvr30ex7XdZY9hrNVeLfW9snZ6 u8OY7xLiAU6ERKQtmwG5cLyFWLbk5DG47A98hhkaDfIANxIDZI+any5Y49S3ZkAu90PqHVOh9K61 g5Lm1WYtjPsz63Mtch3hrfokRBEES397wVeExllo05RMslOl9Tuodd6j1K+/KttuxDX+ldY0Nrbd I2tpAnhvh8XdkZRI3RlgIadXsE1hUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSnE6r17M6f1b H6dV0+3IryAwi9gcWkufse32tIGwQ47jx8ElNmvq9p9NmRg5Fdlm0w1oe0B0wS6RwB7tNO/IlKS0 9QtsxxkWYl1ZLSTUWzZI7RxrGmqSm2x29odBE9jykpDk/wA9if8AHH/z1ckpyOrN6ufq9iv6M57b qxS+wVRvdWGe5rNzXCZIPH9yS6FXq85h/Wh7sHJ6Z9YaX57bHOLtztj2umSxwhpbtcJEat8NFN7R 0ILY+7k0Yly+nMzb7sinCqbfU/bvx7mC5prJsA3Oc6pocGnnTd4KtzxMTHT6s8o2PUdUbOk57uo/ YGYxGVZtLKhAbBbJdu3uEfS9xP4qXlJRGPiO60GGMGT3GF1Tov1c6dT012SLraQfUFYLibHEvf8A AbnaKP3Dk1iCf5eLB7GTIbLH/nvhsta2/Fvqrdw9wHHjCURkltwnyl/Yv+5mt3Su+sHS8e2mq22P tDQ+twBIIJgcJgy2LANDfwYhy0yGrm/WnGpyDh5NNmbeOW1jQHzKQyGUeIaR7n9gXw5U1cjTPpvW 8/NyjjX9Psx4El7joPvCByEEAES8uiMmCMY3bq477rKmvvr9GwzLNwfEEge4RyFM13nus/WXPweq /s3CoZeS1paDO4kiY0KbEEiUjKgD/Bt4uXhKFlgzr31nc9od0yGkgE7XaD70JSiAan+CfYw93pxq ASnDZpldFSklKSUpJSklKSUpJS0A6kccJKUkpdJSklNfJ/nsT/jj/wCerklK6f8A8n43/E1/9SEl OD9bR9XKS2zqNDrcyxjvSFBLHuAgS9wIETxunvHdPx8XRmw+4T6XP+qVVbOl+qCHXWWOFx7gsO1o /wA3X5qlzsicptt9Uo23fXPpzaRufj1WPvLddrXMta3d83f9JS8qDwFhz1wlqdR2dG+toyHgCl7x YZGm1+jk8Q9zAYb8J/t/LRmgePE2uuZ7PrKKun9IodcWv3G8t2tb25QifbmJSFaaDqVuHGcQJkWh jYZyPrFjdOnc3DDWOd/xY3OP+cU2IP3aROhyS/PT8mWU6hbdb0j6wdC6jbl9OqblMsJ8yWkzqJCc ZxMIidgx6gWxe5jyxoltD65ZWJY2vq2A6gH85s/9+RjGUr4ZRl4bfxWHlIkaFv5/1t6Zgupad9vr NFksH0Wu4JlCEp5b4Btvf5MceVkd3B6k/Mh2jr6vjYz8ip211EAw/wBsDUT3KbDLCeEgy4Td6+Bb MIgY+Et131u6ngZDK+r4Posf3Egx5cgp8YymPRIEjoRTH92hIaF6mq1l1TLqzLHgOafIoxkJC2nK JiaZooUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpr5P89if8cf/AD1ckpXT/wDk/G/4mv8A6kJKeM+vLRf1 zGx8epz8n7MJDJe6wF7yxoYJ+jtedPHyU2E0CS2uVkIgknRo9Twauj4OJUHW43VrZfltqvfAq94Y HBjw2TpwPHVAQGWVkWF2InJkJ6Oj9QcSx2dk5213psq9LeZhzrHNeYPcj09fijmoUAt5uQ0iG59e 8F1lWPmVtLnNca3QJ0OoUOKYhl12I/L/Ah23KS0Id3p1pPSKrm1Fj/RBNYbB3AcR8VXgRHEeHx+r DlH62iXkOhZlXSOqZGZ1iu2l9khpLCYLjLlPKpCAx+oR7b9v4tzNAzhQdrJ+sXUL8kHodNeZQ1sv AcN5J8WyCFCMhMiJXHt6bthjy0Bh2NfMwOv/AFkdVXnUMwcet26CdzvD8ifCfDLiHqlttwj8dUxl iwjQ26eR9Vek5LaG2sdOOwVgtdEtb2KWOEsYNS338+7EOamCUVn1p6R07JPTntfWyhoa1waSNOWH KGLjlG4xuPnr+P8AFceWnIXerh/WXrOP184+F0xjrXNfu3bYJJEQJU2MGevcn6QBX8qZsGI4wbew 6ZjOw+n4+K8y6qtrT8QFHjBEdetn7TbTzSEpktpPY1JKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSlJKa+T/AD2J /wAcf/PVySldP/5Pxv8Aia/+pCSk8CQ6BI0B76pKeP8Arr0HKyL2dSwKn3F7fSvZXq4EaVva2J7w fCB5lS4sgjoWxy+YQsF6nBoGLhU0NrZUWVtBrrENDo90fNRNcm1x9pO0WV1uggkzxzqAWnUIGIlu EgkLh3UWtBY0GRuO7tOpiPDzRQjv9Z1YD8dl3t9wJHPkCE2UIy3CRIx2KDGwq8K82YuEyp1oAsex wGnJkR4oDGAb1+1dLLKQoltOdme4Cth94DTu5ZpJPt0PaNfHyT1jMm8s0a0Okd5ETr28ELNO/BOY P1zGptkOkoGoP5mvy1TDjiTfXw0/JfHLOOxXxMFmHY77Pi01M/NLAA7/AF5SGOIN/nr+apZZy3Ld YXlvvAaZOgM/3J6xkkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSmvk/wA9if8AHH/z1ckpXT/+T8b/AImv /qQkpsJKaXVur4vRsZuVmB5Y94rGwSZIC7uR+6kpyf8An50Pwv8A8wf+TSUr/n50Pwv/AMwf+TSU r/n50Pwv/wAwf+TSUr/n50Pwv/zB/wCTSUr/AJ+dD8L/APMH/k0lK/5+dD8L/wDMH/k0lK/5+dD8 L/8AMH/k0lK/5+dD8L/8wf8Ak0lK/wCfnQ/C/wDzB/5NJSv+fnQ/C/8AzB/5NJSv+fnQ/C//ADB/ 5NJSv+fnQ/C//MH/AJNJSv8An50Pwv8A8wf+TSUr/n50Pwv/AMwf+TSUr/n50Pwv/wAwf+TSUr/n 50Pwv/zB/wCTSUr/AJ+dD8L/APMH/k0lK/5+dD8L/wDMH/k0lK/5+dD8L/8AMH/k0lO/РазIprvr nba1r2zzDhISUkSU18n+exp+OP8A56uSUrp//J+N/wATX/1ISU2ElMLKq7RTTY14BmHAET80lOR1 To/Ur8hr+l30YtIYA5jqK3kul0ulzD2hJTT/AGD9Y/8Aywxv/YWr/wBJpKT4PROs1ZVdmbl499DS fUqGPW0uEHuKx3SU7P2LD/0FX+Y3+5JSvsWH/oKv8xv9ySlfYsP/AEFX+Y3+5JSvsWH/AKCr/Mb/ AHJKV9iw/wDQVf5jf7klK+xYf+gq/wAxv9ySlfYsP/QVf5jf7klK+xYf+gq/zG/3JKV9iw/9BV/m N/uSUr7Fh/6Cr/Mb/ckpX2LD/wBBV/mN/uSUr7Fh/wCgq/zG/wBySlfYsP8A0FX+Y3+5JSvsWH/o Kv8AMb/ckpX2LD/0FX+Y3+5JSvsWH/oKv8xv9ySkoAaA1ogDQAJKXSU18n+exP8Ajj/56uSUrp// ACfjf8TX/wBSelNhJTy3Wup5eP1O6mrrdWG1u2Md9O8sljT9L03c88pKaX7Zz/8A546P/YYf+kUl K/bOf/8APHR/7DD/ANIpKV+2c/8A+eOj/wBhh/6RSUr9s5//AM8dH/sMP/SKSlftnP8A/njo/wDY Yf8ApFJSv2zn/wDzx0f+ww/9IpKV+2c//wCeOj/2GH/pFJSv2zn/APzx0f8AsMP/AEikpX7Zz/8A 546P/YYf+kUlK/bOf/8APHR/7DD/ANIPKV+2c/8A+eOj/wBhh/6RSUr9s5//AM8dH/sMP/SKSlft nP8A/njo/wDYYf8ApFJSv2zn/wDzx0f+ww/9IpKV+2c//wCeOj/2GH/pFJSv2zn/APzx0f8AsMP/ AEikpX7Zz/8A546P/YYf+kUlK/bOf/8APHR/7DD/ANIPKV+2c/8A+eOj/wBhh/6RSU9Z0y/7R0+i 43DJLmDdc0bQ8jQuDYEahJTaSU18n+exp+OP/nq5JSun/wDJ+N/xNf8A1ISU2ElPKdbsvb1S4Mye k1t9kNywDcPY36f6N3y8klNh2cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCk klK9XJ/7mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9 XJ/7mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7 mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7mdC/zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7mdC/ zR/6SSUr1cn/ALmdC/zR/wCkklK9XJ/7mdC/zR/6SSU6uL0brjcms5lfTHUBw9UV1e4t77ZqGqSn oq666mCuprWMbw1oAA+ACSmSSmvk/wA9if8AHH/z1ckpXT/+T8b/AImv/qQkpsJKeP69Ve7q17mY nTbWnZD8mwNtPsb9Ieuz5acJKaHoZP8A3A6P/wBuj/3pSUr0Mn/uB0f/ALdH/vSkpXoZP/cDo/8A 26P/AHpSUr0Mn/uB0f8A7dH/AL0pKV6GT/3A6P8A9uj/AN6UlK9DJ/7gdH/7dH/vSkpXoZP/AHA6 P/26P/elJSvQyf8AuB0f/t0f+9KSlehk/wDcDo//AG6P/elJSvQyf+4HR/8At0f+9KSlehk/9wOj /wDbo/8AelJSvQyf+4HR/wDt0f8AvSkpXoZP/cDo/wD26P8A3pSUr0Mn/ub0f/t0f+9KSlehk/8A cDo//bo/96UlK9DJ/wC4HR/+3R/70pKV6GT/ANwOj/8Abo/96UlK9DJ/7gdH/wC3R/70pKet6d1a uzDrf1LIxaso7vUZXa0tHuO2Pe782O6SnRBBEjUFJS6Smvk/z2J/xx/89XJKV0//AJPxv+Jr/wCp CSmwkp5LrvTL8jqt9zOitzGu2RkG97N8MaPotsaBERwkpofsXJ/+dxv/ALE2f+lklK/YUT/87jf/ AGJs/wDSySlfsXJ/+dxv/sTZ/wClklK/YUT/APO43/2Js/8ASySlfsXJ/wDncb/7E2f+lklK/YUT /wDO43/2Js/9LJKV+xcn/wCdxv8A7E2f+lklK/YUT/8AO43/ANibP/SySlfsXJ/+dxv/ALE2f+lk ЛК/ЮТ/87jf/AGJs/wDSySlfsXJ/+dxv/sTZ/wClklK/YUT/APO43/2Js/8ASySlfsXJ/wDncb/7 E2f+lklK/YUT/wDO43/2Js/9LJKV+xcn/wCdxv8A7E2f+lklK/YUT/8AO43/ANibP/SySlfsXJ/+ dxv/ALE2f+lklK/YUT/87jf/AGJs/wDSySk2F0E3ZVdWX0BtNLnRZYMiw7R4x6ySntWgNAaNABA+ SSl0lNfJ/nsT/jj/AOerklK6f/yfjf8AE1/9SElNhJTx/Xun0X9Wvtf0jLy3O2TfU8tY6GNGg2Hj hJTQ/ZWN/wCUGd/26f8A0mkpX7Kxv/KDO/7dP/pNJSv2Vjf+UGd/26f/AEmkpX7Kxv8Aygzv+3T/ AOk0lK/ZWN/5QZ3/AG6f/SaSlfsrG/8AKDO/7dP/AKTSUr9lY3/lBnf9un/0mkpX7Kxv/KDO/wC3 T/6TSUr9lY3/AJQZ3/bp/wDSaSlfsrG/8oM7/t0/+k0lK/ZWN/5QZ3/bp/8ASaSlfsrG/wDKDO/7 dP8A6TSUr9lY3/lBnf8Abp/9JpKV+ysb/wAoM7/t0/8ApNJSv2Vjf+UGd/26f/SaSlfsrG/8oM7/ ALdP/pNJSv2Vjf8AlBnf9un/ANJpKV+ysb/ygzv+3T/6TSUnwcdnT8qvMxug5otqJLSbCRqCONnm kp6rpWfk59b35OHZhFjgA23lwjkaBJTeSU18n+exp+OP/nq5JSun/wDJ+N/xNf8A1ISU2ElPH9er xndWvNlfVnO9knEj0foN+hLT8/NJTQ9LD/0PXfvb/wCQSU7eP9UsPIx6r/tnUK/VY1+x9rQ5u4Tt cPT5CSkn/M3D/wC52f8A9vN/9JpKV/zNw/8Audn/APbzf/SaSlf8zcP/ALnZ/wD283/0mkpX/M3D /wC52f8A9vN/9JpKV/zNw/8Audn/APbzf/SaSlf8zcP/ALnZ/wD283/0mkpX/M3D/wC52f8A9vN/ 9JpKV/zNw/8Audn/APbzf/SaSlf8zcP/ALnZ/wD283/0mkpX/M3D/wC52f8A9vN/9JpKV/zNw/8A удн/APbzf/SaSlf8zcP/ALnZ/wD283/0mkpX/M3D/wC52f8A9vN/9JpKV/zNw/8Audn/APbzf/Sa Slf8zcP/ALnZ/wD283/0mkpX/M3D/wC52f8A9vN/9JpKV/zNw/8Audn/APbzf/SaSnS6V0mrpNb6 6rrrxY4OJvcHkQI0hrUlN5JTXyf57E/44/8Anq5JSun/APJ+N/xNf/UhJTYSU8z1jqvVsbqN1GLn YFNTdu2u90WCWtJ3CPEpKaX7c69/5ZdL/wA8f3JKV+3Ovf8All0v/PH9ySlftzr3/ll0v/PH9ySm xiZn1szt/wBjy+n3+nG/0zujdMTDfJJTY9P68/6TD+4/+RSUr0/rz/pMP7j/AORSUr0/rz/pMP7j /wCRSUr0/rz/AKTD+4/+RSUr0/rz/pMP7j/5FJSvT+vP+kw/uP8A5FJSvT+vP+kw/uP/AJFJSvT+ vP8ApMP7j/5FJSvT+vP+kw/up/kUlK9P68/6TD+4/wDkUlK9P68/6TD+4/8AkUlK9P68/wCkw/up /kUlK9P68/6TD+4/+RSUr0/rz/pMP7j/AORSU3ukt+sTbn/tl9Dqtvs9GZ3SOdB2SU6qSlJKa+T/ AD2J/wAcf/PVySldP/5Pxv8Aia/+pCSmwkp5nrF3SW9RubldGvzLRt3X117mu9rYgz2GiSml9o6D /wDO9lf9sn/ySSlfaOg//O9lf9sn/wAkkpX2joP/AM72V/2yf/JJKbWF1rA6dv8AsPRMyj1I37Ku dsx380lNn/nb/wCavP8A+2v9qSlf87f/ADV5/wD21/tSUr/nb/5q8/8A7a/2pKV/zt/81ef/ANtf 7UlK/wCdv/mrz/8Atr/akpX/ADt/81ef/wBtf7UlK/52/wDmrz/+2v8AakpX/O3/AM1ef/21/tSU r/nb/wCavP8A+2v9qSlf87f/ADV5/wD21/tSUr/nb/5q8/8A7a/2pKV/zt/81ef/ANtf7Ulk/wCd v/mrz/8Atr/akpX/ADt/81ef/wBtf7UlK/52/wDmrz/+2v8Aakp28W/7Tj15Gx1XqtDtjxDmz2cP FJSVJTXyf57E/wCOP/nq5JSun/8AJ+N/xNf/AFISU2ElPH9eyqK+rXsfn9SocNk140+kPY36PvHz 80lND7bjf+WnWPx/9KJKV9txv/LTrh5/+lElK+243/lp1j8f/SiSlfbcbT/KnWNPI/8ApRJSvtuN /wCWnWPx/wDSiSlfbcb/AMtOsfj/AOlElK+243/lp1j8f/SiSlfbcb/y06x+P/pRJSvtuN/5adY/ H/0okpX23GiP2p1j7j/6USUr7bjf+WnWPx/9KJKV9txv/LTrh5/+lElK+243/lp1j8f/AEokpX23 G/8ALTrh5/8ApRJSvtuN/wCWnWPx/wDSiSlfbcb/AMtOsfj/AOlElK+243/lp1j8f/SiSlfbcb/y 06x+P/pRJS7c7Fa4OPVOsGDMEGD/AOCJKe06d1CjqeMMvHa9rCS2LBtdI8tUlNpJTXyf57E/44/+ erklK6f/AMn43/E1/wDUhJTYSU4XUsHOuzbLKet/YmO2xj7WnZDQOTY3nnhJTW/ZvUv/AJ5f+gz/ АНКпКВ+zepf/ADy/9Bn/AKVSUr9m9S/+eX/oM/8ASqSlfs3qX/zy/wDQZ/6VSUr9m9S/+eX/AKDP /SqSlfs3qX/zy/8AQZ/6VSUr9m9S/wDnl/6DP/SqSlfs3qX/AM8v/QZ/6VSUr9m9S/8Anl/6DP8A 0qkpX7N6l/8APL/0Gf8ApVJSv2b1L/55f+gz/wBKpKV+zepf/PL/ANBn/pVJSv2b1L/55f8AoM/9 KpKV+zepf/PL/wBBn/pVJTa6bjZOHki7L62MysNI9JwawSeDPqO4SU6323D/ANPV/nt/vSUr7bh/ 6er/AD2/3pKV9tw/9PV/nt/vSUr7bh/6er/Pb/ekpMkpSSmvk/z2J/xx/wDPVySldP8A+T8b/ia/ +pCSmwkp5TrfTX5HVLrh0P7aHbP1j7Q6vfDGj6AeIjhJTR/Yz/8A52f/AGbf/wCTSUr9jP8A/nZ/ 9m3/APk0lK/Yz/8A52f/AGbf/wCTSUr9jP8A/nZ/9m3/APk0lK/Yz/8A52f/AGbf/wCTSUr9jP8A /nZ/9m3/APk0lK/Yz/8A52f/AGbf/wCTSUr9jWf/ADs/+zb/APyaSlfsZ/8A87P/ALNv/wDJpKV+ xn//ADs/+zb/APyaSlfsZ/8A87P/ALNv/wDJpKV+xn//ADs/+zb/APyaSlfsZ/8A87P/ALNv/wDJ pKV+xn//ADs/+zb/APyaSlfsZ/8A87P/ALNv/wDJpKV+xn//ADs/+zb/APyaSlfsZ/8A87P/ALNv /wDJpKV+xrP/AJ2f/Zt//k0lK/Yz/wD52f8A2bf/AOTSU9rjvtsx6rL2ela9jXWVzO1xEubPkUlJ ElNfJ/nsT/jj/wCerklK6f8A8n43/E1/9SElNhJTx/Xun0X9Wvtf0jLy3O2TfU8tY6GNGg2HjhJT Q/ZWN/5QZ3/bp/8ASaSlfsrG/wDKDO/7dP8A6TSUr9lY3/lBnf8Abp/9JpKV+ysb/wAoM7/t0/8A pNJSv2Vjf+UGd/26f/SaSlfsrG/8oM7/ALdP/pNJTq9O+qXR83GF+Rh5GI8kj0rLDuAHfgJKbX/M foP7lv8A24UlK/5j9B/ct/7cKSlf8x+g/uW/9uFJSv8AmP0H9y3/ALcKSlf8x+g/uW/9uFJSv+Y/ Qf3Lf+3CkpX/ADH6D+5b/wBuFJSv+Y/Qf3Lf+3CkpX/MfoP7lv8A24UlK/5j9B/ct/7cKSlf8x+g /uW/9uFJSv8AmP0H9y3/ALcKSndpqZRSyiv6FbQxs66NEBJTNJTXyf57E/44/wDnq5JSun/8n43/ ABNf/UhJTYSUpJSklOP1PE+st2UX9Lzqsfh3gCt7GuM9zJrd+VJTz7+s9Va4g/WDGEEiPR4/9l0l Lftvqv8A88OL/wBs/wDvukpX7b6r/wDPDi/9s/8AvukpX7b6r/8APDi/9s/++6Slftvqv/zw4v8A 2z/77pKV+2+q/wDzw4v/AGz/AO+6Slftvqv/AM8OL/2z/wC+6Slftvqv/wA8OL/2z/77pKV+2+q/ /PDi/wDbP/vukpX7b6r/APPDi/8AbP8A77pKV+2+q/8Azw4v/bP/AL7pKV+2+q//ADw4v/bP/vuk p06cT65X1Mvp6tQ6u1oexwqbq1wkH+ZSUz/Z/wBdv/LSj/tpv/pFJSv2f9dv/LSj/tpv/pFJSv2f 9dv/AC0o/wC2m/8ApFJTq9Jo6tRQ9vV8hmTaXSxzGhoDYGmjWd0lN5JSklNfJ/nsT/jj/wCerklK 6f8A8n43/E1/9SElNhJSklKSU5PUusZ2FkmjH6ZflsDQfVrPtk9volJTkuyWEkn6qyZ59Jmv/gSS lfaa/wD51P8AwJn/AKSSUr7TX/8AOp/4Ez/0kkpX2mv/AOdT/wACZ/6SSUr7TX/86n/gTP8A0kkp X2mv/wCdT/wJn/pJJSvtNf8A86n/AIEz/wBJJKV9pr/+dT/wJn/pJJSvtNf/AM6n/gTP/SSSLfaa /wD51P8AwJn/AKSSUr7TX/8AOp/4Ez/0kkpX2mv/AOdT/wACZ/6SSU22fWDqVTG119CyGMYA1rW6 AAaAABiSl/8Anh2X/wAo8r7/APzBJSv+cfVf/KPK+/8A8wSUr/nh2X/yjyvv/wDMElN3pfVczPuf Xk9PuwmtbuD7To4yBtHtCSnTSUpJTXyf57E/44/+erklK6f/AMn43/E1/wDUhJTYSU0cnrnScO92 NlZVdVrI3McdRIDh+BSUi/5y9B/7m1fef7klK/5y9B/7m1fef7klOA7E+qznFx63kiTMC4Rr/wBa SUt9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj /wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3l f9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKV9i+qv/l3lf9vj/wBJJKXbifVZrg4dbyTBmDcI0/60kp3/ APnL0H/ubV95/uSUr/nL0H/ubV95/uSUr/nL0H/ubV95/uSUr/nL0H/ubV95/uSUuz6x9De4MZmV FziAADyT8klOkkpSSmvk/wA9if8AHH/z1ckpXT/+T8b/AImv/qQkpsJKeU636n7Uu2/saPZ/TNnr /Qb9Pdr8PJJTR/S//Q7/AOBpKV+l/wDod/8AA0lK/S//AEO/+BpKV+l/+h4/AMDSU2KOm9Wyq/Vx sXol1ZMb662ubI82gpKSfsTr3/cDo/8A2z/5ikpX7E69/wBwOj/9s/8AmKSlfsTr3/cDo/8A2z/5 ikpX7E69/wBwOj/9s/8AmKSlfsTr3/cDo/8A2z/5ikpX7E69/wBwOj/9s/8AmKSlfsTr3/cDo/8A 2z/5ikpX7E69/wBwOj/9s/8AmKSlfsTr3/cDo/8A2z/5ikpX7E69/wBwOj/9s/8AmKSlfsTr3/cD о/8A2z/5ikpX7E69/wBwOj/9s/8AmKSlfsTr3/cDo/8A2z/5ikp0OkdGua97urYPThG00nHpaCCJ mZb8ElO6kpSSmvk/z2J/xx/89XJKV0//AJPxv+Jr/wCpCSmwkp5nrF3SW9RubldGvzLRt3X117mu 9rYgz2GiSml9o6D/APO9lf8AbJ/8kkpX2joP/wA72V/2yf8AySSlfaOg/wDzvZX/AGyf/JJKV9o6 D/8AO9lf9sn/AMkkpu4v1hxsGkUYnR82qsEkNbVpJ57pKTf87f8AzV5//bX+1JSv+dv/AJq8/wD7 a/2pKV/zt/8ANXn/APbX+1JSv+dv/mrz/wDtr/akpX/O3/zV5/8A21/tSUr/AJ2/+avP/wC2v9qS lf8AO3/zV5//AG1/tSUr/nb/AOavP/7a/wBqSlf87f8AzV5//bX+1JSv+dv/AJq8/wD7a/2pKV/z t/8ANXn/APbX+1JSv+dv/mrz/wDtr/akpX/O3/zV5/8A21/tSUmw/rJ9rya8b9n5lXqHb6llcNb5 uMpKdpJSklNfJ/nsT/jj/wCerklK6f8A8n43/E1/9SElNhJTxv1gz8Onq99VvUuoYz27Jqxz+jbL Gh3/pG88pKc79qdP/wDLjq33/wDqVJSv2p0//wAuerff/wCpUlK/ant/APy56t9//qVJSv2p0/8A 8uerff8A+pUlK/ant/8Ay56t9/8A6lSUr9qdP/8ALnq33/8AqVJSSjOwsi6uivrPVd9r2sbJ0lxg f4XzSU7/APzXzP8Ay6z/APtx3/kklK/5r5n/AJdZ/wD247/ySSlf818z/wAus/8A7cd/5JJSv+a+ Z/5dZ/8A247/AMkkpX/NfM/8us//ALcd/wCSSUr/AJr5n/l1n/8Abjv/ACSSlf8ANfM/8us//tx3 /kklK/5r5n/l1n/9uO/8kkpX/NfM/wDLrP8A+3Hf+SSUr/mvmf8Al1n/APbjv/JJKSY/1cyqMiq9 3V820Vva81vsJa4NM7XDdwUlO4kpSSlJKa+T/PYn/HH/AM9XJKV0/wD5Pxv+Jr/6kJKbCSnD6l1P ruPm2U4dOI+hu3Y620NeZaCZabG90lNX9s/Wf/upg/8Ab7f/AEqkpX7Z+s//AHHwf+32/wDpVJSv 2z9Z/wDuPg/9vt/9KpKV+2frP/3Hwf8At9v/AKVSUr9s/Wf/ALj4P/b7f/SqSlftn6z/APcfB/7f б/6VSUr9s/Wf/uPg/wDb7f8A0qkpX7Z+s/8A3Hwf+32/+lUlK/bP1n/7j4P/AG+3/wBKpKV+2frP /wBx8H/t9v8A6VSUlZn/AFwsaHswcRzTwRbIP/giSl/tn1z/APK/F/7c/wDUiSlfbPrn/wCV+L/2 5/6kSUr7Z9c//K/F/wC3P/UiSlfbPrn/AOV+L/25/wCpElK+2fXP/wAr8X/tz/1IkpX2z65/+V+L /wBuf+pElK+2fXP/AMr8X/tz/wBSJKdnCflvxa35zG1ZBB9RjDLQZPBk9klJ0lKSU18n+exp+OP/ AJ6uSUrp/wDyfjf8TX/1ISU2ElPI9dyPqhX1W9nVMW23LGz1HsLwD7G7fo2tH0Y7JKah3v6gf9wr /wDOs/8AS6Slfa/qB/3Cv/zrP/S6Slfa/qB/3Cv/AM6z/wBLpKV9r+oH/cK//Os/9LpKV9r+oH/c K/8AzrP/AEukpX2v6gf9wr/86z/0ukpX2v6gf9wr/wDOs/8AS6Slfa/qB/3Cv/zrP/S6Slfa/qB/ 3Cv/AM6z/wBLpKV9r+oH/cK//Os/9LpKdTE+up1cwcdmLi1311ViGN2zEmeXWE90lJv+fnQ/C/8A zB/5NJSv+fnQ/C//ADB/5NJSv+fnQ/C//MH/AJNJSv8An50Pwv8A8wf+TSUr/n50Pwv/AMwf+TSU r/n50Pwv/wAwf+TSUr/n50Pwv/zB/wCTSUr/AJ+dD8L/APMH/k0lPRNcHNDhw4SPmkpdJTXyf57E /wCOP/nq5JSun/8AJ+N/xNf/AFISU2ElPKdb6k/H6pdSOufYg3Z+r/Z3WbJY0/TDDM8pKaP7Zf8A /PN/7KP/APIJKV+2X/8Azzf+yj//ACCSlfftl/wD883/so/8A8gkpX7Zf/wDPN/7KP/8AIJKV+2X/ APzzf+yj/wDyCSK+Fl5vUchuLh/WL1LXAkN+ylvAk6uaAkp0v2P9Z/8Ay6/8BakpX7H+s/8A5df+ AtSUr9j/AFn/APLr/wABakpX7H+s/wD5df8AgLUlK/Y/1n/8uv8AwFqSlfsf6z/+XX/gLUlK/Y/1 n/8ALr/wFqSlfsf6z/8Al1/4C1JSv2P9Z/8Ay6/8BakpX7H+s/8A5df+AtSUr9j/AFn/APLr/wAB akpX7H+s/wD5df8AgLUlO1h2X041dWTb69zWw+2Nu4+MBJSZJSklNfJ/nsT/AI4/+erklK6f/wAn 43/E1/8AUhJTYSUifjY1ji+ypj3Hlzmgk/eElLfYsP8A0FX+Y3+5JSvsWH/oKv8AMb/ckpX2LD/0 FX+Y3+5JSvsWH/oKv8xv9ySlfYsP/QVf5jf7klLsxsat2+upjHDu1oB/AJKSpKUkpSSlJKUkpSSl JKUkpSSlJKUkpSSlJKUkpSSmvk/z2J/xx/8APVySnlMX619Rqxqqm1UkMY1olr5gAD99ZZ+IZAdh /L6uyPheIjc/y+iX/nd1L/RUf5r/APyaH+kMnYfy+qf9F4e5/l9Ff87upf6Kj/Nf/wCTS/0hk7D+ X1V/ovD3P8vor/nd1L/RUf5r/wDyaX+kMnYfy+qv9FYe5/l9Ff8AO7qX+io/zX/+TS/0hk7D+X1V /ovD3P8AL6K/53dS/wBFR/mv/wDJpf6Qydh/L6q/0Xh7n+X0V/zu6l/oqP8ANf8A+TS/0hk7D+X1 V/ovD3P8vohy/rJlZ2O/EyseiymwAPbFgkAg8tsBS/0jl7D+X1V/ovD3P8vo5ezp3/lfR/n5H/pd Л/СГЦП5fVX+i8Pc/wAvorZ07/yvo/z8j/0ul/pDJ2H8vqr/AEXh7n+X0Vs6d/5X0f5+R/6XS/0h k7D+X1V/orD3P8vorZ07/wAr6P8APyP/AEul/pDJ2H8vqr/ReHuf5fRWzp3/AJX0f5+R/wCl0v8A СГЦП5фВХ+и8Пк/у+итнТв8Айво/з8ж/АНЛпф6Кыдх/Л6к/0Хх7н+Х0Вс6д/5ХУф5+Р/6ХС/0жк7 D+X1V/ovD3P8vorZ07/yvo/z8j/0ul/pDJ2H8vqr/ReHuf5fRWzp3/lfR/n5H/pdL/SGTsP5fVX+ i8Pc/wAvorZ07/yvo/z8j/0ul/pDJ2H8vqr/AEVh7n+X0dXG+suZh0MxcaihlVQ2sbFhgfF1hKX+ kMnYfy+qv9F4e5/l9Ev/ADu6l/oqP81//k0v9IZew/l9Vf6Lw9z/AC+iZ31i660lrsRgIEkGuzQc T9JP++Zx+ixjkOWP6R+0MG/WfrDtm3HqPqTs9lnugwY96aOfzHoP5fVcfh4Li/UdPJc/WbrQ3k41 Y9PR812e2fh4aInnsw/RR/o7l9PUdfJTvrL1tpAdisBcC4TXZqAJJ+l2CR53MP0VD4fy5/SP2hBb 9Z+qOtomircxxsA2v49N+v0uNrpQ+/5ewSfhuDufwcbDza6KgB6btwZO6PzYPj4qqCYk6NyURMDV M3qjWta2KSGggTHBG3XX90wjxy7IOKJJNsT1EODQ41na8WSSNSA0Qfd3hIykeifbiL1/lquOo1tb taKo2FmsHQnd+9yClxHso4wTuu/qbXtc0+l7iSSIms3afzkjOR6IjjiK1Wu6k25jmu9Ju8ydsDX/ ADvJKU5SGyYY4xI1a/q1fvt+8f3plFk4gr1av32/eP70qKuIK9Wr99v3j+9KiriCvVq/fb94/vSo q4gr1av32/eP70qKeIK9Wr99v3j+9KijiCvVq/fb94/vSoq4gr1av32/eP70qKuIK9Wr99v3j+9K iriCvVq/fb94/vSoq4gr1av32/eP70qKuIK9Wr99v3j+9KiniCvVq/fb94/vSoo4gr1av32/eP70 qKuIN+zq9F1mSXua1lu70wG1mJfv1BPPmpzlMjLTdrRw8IjR2318GY6zibKqy1oGOQayCCSNux+4 F0amDol7ugFbI9g2TxbsXdVxCbn6h2drm1nZsa5oABGs6dvJA5N9EjCRQvbquOsY9b3WUOIC977Z cWktc5paANf5WpR92th5qODiFSI7IbOqYZ6jVl7GemaW+jIifScyOeJQ4xx8VKOI+3w8Wt7/AFf/ 2Q==
  • 2JPEG256256/9j/4AAQSkZJRgABAgeEASABIAAD/7QAsUGhvdG9zaG9wIDMuMAA4QklNA+0AAAAAABAASAAAAAEA AQBIAAAAAQAB/+4AE0Fkb2JlAGSAAAAAAAQUAAgAD/9sAhAAKBwcHBwcKBwcKDgkJCQ4RDasLDBEU EBAQEBAUEQ8RERERDxERFxoaGhcRHyEhISEFKy0tLSsyMjIyMjIyMjIyAQsJCQ4MDh8XFx8rIx0j KzIrKysrMjIyMjIyMjIyMjIyMjIyMjI+Pj4+PjJAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQEBAQED/wAARCAEA AMYDAREAAhEBAxEB/8QBogAAAcBAQEBAQAAAAAAAAAAABAUDAgYBAAcICQoLAQACAgMBAQEBAQAA AAAAAAABAAIDBAUGBwgJCgsQAAIBAwMCBAIGBwMEAgYCcwECAxEEAAUhEjFBUQYTYSJxgRQykaEH FbFCI8FS0eEzFmLwJHKC8SVDNFOSorJjc8I1RCeTo7M2F1RkdMPS4ggmgwkKGBmElEVGpLRW01Uo GvLj88TU5PRldYWVpbXF1eX1ZnaGlqa2xtbm9jdHV2d3h5ent8fX5/c4SFhoeIiYqLjI2Oj4KTlJ WWl5iZmpucnZ6fkqOkpaanqKmqq6ytrq+hEAAgIBAgMFBQQFBgQIAwNtAQACEQMEIRIxQQVRE2Ei BnGBkTKhsfAUwdHhI0IVUmJy8TMkNEOCFpJTJaJjssIHc9I14kSDF1STCAkKGBkmNkUaJ2R0VTfy o7PDKCnT4/OElKS0xNTk9GV1hZWltcXV5fVGVmZ2hpamtsbW5vZHV2d3h5ent8fX5/c4SFhoeIiY qLjI2Oj4OUlZaXmJmam5ydnp+So6SlpqeoqaqrrK2ur6/9oADAMBAAIRAxEAPwCbeU/KflW58q6L cXGi6fNNNp9rJJJJaws7u0MbMzM0ZJJJ3OKpt/gzyf8A9WHTf+kOD/qniqxvKfklJEhfRdKWSWvp obW3DNxFTxHp70GKr/8ABnk//qw6b/0hwf8AVPFXf4M8n/8AVh03/pDg/wCqeKu/wZ5P/wCrDpv/ AEhwf9U8Vd/gzyf/ANWHTf8ApDg/6p4q7/Bnk/8A6sOm/wDSHB/1TxV3+DPJ/wD1YdN/6Q4P+qeK u/wZ5P8A+rDpv/SHB/1TxV3+DPJ//Vh03/pDg/6p4q7/AAZ5P/6sOm/9IcH/AFTxV3+DPJ//AFYd N/6Q4P8Aqnirv8GeT/8Aqw6b/wBIch/VPFXf4M8n/wDVh03/AKQ4P+qeKu/wZ5P/AOrDpv8A0hwf 9U8Vd/gzyf8A9WHTf+kOD/qnirv8GeT/APqw6b/0hwf9U8Vd/gzyf/1YdN/6Q4P+qeKu/wAGeT/+ рДпв/ШБ/wBU8Vd/gzyf/wBWHTf+kOD/AKp4q7/Bnk//AKsOm/8ASHB/1TxV3+DPJ/8A1YdN/wCk OD/qnirv8GeT/wDqw6b/ANICH/VPFUp1nyn5Vi1HQEi0XT0SfUJI5VW1hAdBYX8nFwI9xyRTQ9wM VTbyZ/yh+g/9s2z/AOTEeKorVngliGmm5NtcXm0BWoJZf3lKjseG++4xZRsb08y043Gmaqmq305S e0uFS4SUepIRUJJyq4b7LbMK7jLM2YcQgBzdhliJwqLM7DzHeQ6d+mtVDPbXs3pWdvGq813YDkxK Ch596+Nd6CMxwmnGonEp8I6c0Rcea/0fM8GrWMlowhM8fF0k5gHjT4aAHICzXyTHScYuJtdB5ml1 CeSDSrMStCqtILiZYWqwrxVeMlfnkePaz1WWleEB6inNxO9vaTXMiisMbSFQaj4V5EVoO+EkiNuPG IlIBK9J1XV9Tjt7o21tHbzgMf3zGRUr14enT8cTIXQP4+bdlwwhYspyzKil2NFUEk+wyRNNABJpQ t7+0uyBbyCQtGJRQH7DEqDuPFTtkIZYT5HzbMmnyY/qHWkTk2p2KqL3duj+mZBzDrGVHxEM+6hgt av98ickQatmMUyLrzVskwQlxqdjazrbXEvpyuAwBVqUJ4glgOI38Tlc88ISondux6bJkiZRGyIkl jhQyTOsaClWYgAVNBuffJykIiy1RiZGgF+FCnDHPGJYjyRq0JBHQ06GnhgjISFhlOBgaKphYqVz cR2ltNdTVECCNK5AqeKAsdvkMVS2LzPpU2nfpONnMHqGFRxo7OBWgXK82aOKNlu0+nnnlUURYaxa 6hLJbokkM8Q5NDMvBwPGlT45HDqY5CRuD3FnqNHPDESJBB6hTu9es7Sd7fhNO8QBlMKcxGD/ADmo yOTVwhKqJ76ZYtBkyRErAvlZ5phDKk8STRmqSAMp6bH55fGQkLDjTgYSIKUa7/x1PLn/AG0pP+6d qWFi7yZ/yh+g/wDbNs/+TEeKrvM1jpV1pc0+qQtKlsjOrxD96njwP0b128cnjJB2bMMpCWzB7dNL TQXt/TIubwuLdZV+Mlm4RFX4qCBQVI2rXKcmPJLUiVcursTI/JnHmPTDfaBPZ26D1I0V4UQUo0dC FQD2FBkwaILgabJw5ASkmqaFcSaLbNHbTT3lw0Rv3dvUmWNRydV5t/N0C5CNRN9117+Tk4848Qix XRE3kdrrMziHQvrJRVVppj9VkVqbA8lDEADqK5GMjuBt8f2sY3jG8/0t2/lq7trW1kvr2ecWccnq 2kNWWVWqfTWpBOxpv+GSnEGzXP7EHUgyIA59UvNlaT3mnjy9ptzZXENwrzTSo8arEPtq7Oxr8slx Eg2ftvfo2cchE8cgQzO5kgCehLKsTTgxoGIBYkU+EEivXBMxqiebhY4yuwLpIx5fsrdxAt4iSenE zQyAFW9KvJ2j5glGO5Hj3zD/ACcImuLu29zsf5QyTF8O1ncefnXNdb+W7SUJcLci6XnC6yEBwVhA VkqHpRuP0dMYaKB3u+X2IydpZI3Hh5dj9rj5WAiMSXXFWQI/7vZqO7qT8fYMAPlh/IbVa/yr6rMf t8vcvg0GGRo7mO5SZC1vIXCBi5gAVqOH6PTf3wx0gNEG+X2MZ6+UQYmNfV1/neVdFqeXbW4tEEF1 6qeoZFcVZCgHFU/dyL9nsa9cA0cZQ2l1Se0ZwmbjW34O4RN/of1+4WVp+EZhWCWPjUsquJdnLbVK jscsy6XxJXfSmnBrvChVb3Y+VKVz5cNzPdzPc/71CnEx1CkOjqT8QBoF49OhyM9Fxykb5tmPtHgj ECP0+fkiLHSGs7+W+M4cSpwMSpwUbqV6MR8IFBtk8WnMMhlbVn1YyYhCuXW0Ja+WVtpFl+scnSaO VW9OhARnZk+3+1zplcNDwm7623Ze0zMVw9COfuT7Mx1yA10E6HqIAqTaTgAf8Y2xVivlbUxovlcy yxs0r3MixoRSp4oan2yjU6gYY25Oi0h2M66dUXZTaLPb3lxqdx9ZuLhVkueCyKEQOgVVPEdGK5h5 pYZRkZmyefN2OeGohOEccaiPp5dxQwVLCe/53FxaicLJYmHkPVFGaMFgCdgwFK5XQxylZIv6a6t1 nNGFRjKtpX072VaQ93Jptu98CLgr8dRQ9TxqPGlM2WnMzjHFzdNqxjGaQh9KC13/AI6nlz/tpSf9 07UstaHeTP8AlD9B/wC2bZ/8mI8VTG/trS9tXs70/uZgAy8ihIBB6qQe2EEg7MokxNhIW8uWr69b 3jyRnTrOFRbW4bj6cqNUfCBuv7XWpPXbLPEPDXVuGYjGR1LIZZInQgOpP+vx/EZVTRRQtKxryI5k UYC5egBrX4tj3xpaKoBHIweSUxkH7KTGhG/Xp440tFcsdsFKmdmry3MprRj0qCOnbGloqqSQIvES Aj3ep+8nGlooPUoEvGs3jkiBtrhJmLNvwXlULSu++VZsJmY10NuRps3hiV3vEhL9R0ia/u47p7uE MsaxOyVSqFpPUAUs/VH/AJsozaSeSYN+X325On1sMOMxETzv7q7uoU7XS9TtoYoUv40WNCtEkYAV 9WoC0APIup5HcU2wY9LmgAL/ABuyy6zBORJh+NlRdKvpVjSS7W4MUSEyhppCfgj4zfFSoq24/hj+ Vy0LN0QeZ7t2P5zECajVgjkO/ZFaNpd7ppRJZg8Ih5NGHZgJebNyUMAAOJyemwTxcztX2tWs1WPP ZA3v7KS2z0+9s0SManDGYmUBVmYoq0l9T92QFJqy5Xi0eeAG/wB/m5GbWYMhJ4Ofl7q3REFvOHUz 6mqhYWWqXLPWYn4ZCr0FPbLIabNe56d55teTUYq2h2/mjl3KItL/AIUOrJyCAAM6Y/HzRifhVduI brXIflc9fV9p72f5nBf0f7Edx81QwXpjgH6WTlGjo4E9ASWYoxJRi3wkA9Pnkvy2eh6mI1GCz6Od dP2rDZSsIvV1CKb0pLeUB7l/tIjLNRuo5E1H8MH5TKas3VdT8U/m8Yuo1YkOQ6nZM9NlFvHKt5ex Ss8jOh9XmQp6AluP4AZkYMeSIPF3uJqZRmRwxrbuRn12y/5aIv8Ag1/rlvCWjhPcl+oW9pfyrINW ms+K8eFtOiKd61IZW3x4SvCe5Cfoi1/6mC+/6Sov+qePCV4T3O/RFr/1MF9/0lRf9U8eErwnuTjT 4Ut7VYkuZLxQT++mcSOanuygDbAgikv13/jqeXP+2lJ/3TtSxV3kz/lD9B/7Ztn/AMmI8VS/znpU WoyWZkkaPgsgHEA908cuwy4bcnS5TAFjP+GLb/f7/wDAj+uXeKXI/Mnub/wvb0r9Yfbb7I74PFK/ mT3Kf+FIP+WmT/gR/XKuFx+HzLf+E4KV+svtt9kd/px4fNHD5lBTaVpEFwbWW/kWYEAr6ZO7AEbj bvgNDqg0DVlG/wCE4KV+svtt9kd/pw8Pmnh8ygp9L0e2nNtNfyLKtAV9MnqARuKjvgNDqgkA8yjx 5Wt+NfrD7Uh3R/XLhkIFOTHUECqd/hi2/wB/v/wI/rh8Up/MnuTrypocNlq3rpKzssT7MABQlV/j leWZMWrUZjKFM2zHcN5pc+W7eW5ll9dxzdmpxHck+OZYyGnYR1BA5KX+GLb/AH+//Aj+uHxSn8ye 5p/KtvUf6S47/ZHf6chM8TXln4i3/CkH/LTJ/wACP65Dh82rh8ytn8sWtvE80t1IEReTEKDtSvjj XmpFdShrPR9Mv2ZLa8kYoKtWOmx+ZwCj1RGj1KJm8r2sEbyyXUgSNS7EKDsBy8cPD5p4fMoay0jS 752W2vJHKAFgY6bfScESL5rCQuwSjz5Xtxsbh/H7I7/Tl3ilyfzJ7mv8MW3+/wB/+BH9cPilfzJ7 mc+WLRLLRYIEYuoaQ1IofttmNlNycPUS4pkrNd/46nlz/tpSf907Usg1O8mf8ofoP/bNs/8AkxHi rvMEUkklsI0Z6CSvEE94/DLMZbcRoFhUthr7akXFteCh2duMhCcA3Xhx6U7Y3upJtPpLK5kgkiEc qFxxDKpDCoYVG3UZMkNhI72OSaR5gW4MaR37RBqCT1SKrX7VOOV7tW9807Ok3g05rMNcl6gib4vV O5b7VPoye1c2e1VbHDo3mBm5taXpbxMu/wDxHK2vdP7XSL4ac0MrXQlm4MzMSXjNN1VqZMcubYKr mkDaN5gZuTWd6zeJlqf+I5Br3T+x0q/SweOY3XqzgV5ks8ZKsPhanauTHLm2RquaUz6Rr8dw0cKX 8sQIAk9Uio8accibYG75sr8sWE9hdOkzzS8o3IeepP2otgT8sMvpTOuHmyjK2pg+qWmoS2s62kEj yP8AY41UkFhuGPTlxOzkSOyB0TTdZtzN9dt5wG48TI3qdOVaU6dcEDTGBrmr61pWoXUKvapcCWID ikZKBuXAGpI7AYy3CZ7jmgNN0LWfW9S9S7iERVlBfmHoakEDttgiGMR3lE65o+qXDJNZx3DNxVGj RvTWgBPLfvvjLdM9+SXWvl/XWnVbiG7giNeUgkBI2NNh74AGIBtMtb0fU51jks47hnUKHjRuAK0N WNe9cMmU9+RSy28v6806rPDdwxH7TiUEjbwGABiAbTnVdHvbqMNCLhZIkoqR1XmaD7Rp7ZI0erOV Ec0rsvL+tSyMLxby3QCqsJOVTXptXIgMIjvL0TRlZNOiVgVIMlQdj/ePgnzRk+pB67/x1PLn/bSk /wC6dqWRYO8mf8ofoP8A2zbP/kxHiqbH++T/AFW/WmKejHZdKsH8zKTcagLklbsKrD6r8JrwPwf5 PTFDJsVSadbX/E9szNdfWfq54qn+8vGsv29vt9fwxVOcVef3dtoi388Lza36gmdGMdPT5ciDxPD7 PhirPYkEUaRALgihQW3JoKb4q8/uY9D+sy85dcDc2rwA41qfs/B0xVnllwFnbiMuU9JOJk+3TiKc /fxxVQUBD+lLIuZhKEn9MJ/dEfu+Xq+/Tj9OKoo/3yf6rfrTFPRUxQg7m0ivtMNrPyMcka8hGSrG lG2I+WJSeaXeVbG2trSS5gtrmza4YK8N2zFx6fLiaNSleWKE6k/u3qCfhOw6nbtiqV+WUjj0tVit rizXm37q7r6g36/EAaHFVvmiOKTTAstrcXq+qp9K0r6laN8Xwg7Yqk3lmC2j1RWi0rUbNuDfvbsv 6fy+JQKnFU78zJHJpbLLbXF4vNf3VpX1Dv1+EE0GKpJ5Zgto9UVotK1Gzbg3727L+n8viUCpxVmW KoHSVVbZwkMsA9aY8Zq8iTI1WFf2W6j2xVFQ/YP+s/8AxJsSkpTrv/HU8uf9tKT/ALp2pYod5M/5 Q/Qf+2bZ/wDJiPFU2P8AfJ/qt+tMU9EuaV/8QJD+kFCehX9H8RyJqf3nLFCa4qlU0rjzBbwjUFjQ wEnT+I5SH95+85fR+GKprirDLu8uV1KdB5oigUTuBbGJSUHM/u6+3TFWZ4qwzUry5TULhF80RWgW RgLcxKTHv9gn2xVmeKoOd2Go2iC5EaskxNuRUy09OjA9uH8cVRB/vk/1W/WmKeipihRWn1QVqB6Y qR1+z2xKTzS3yu8D6UrW0tzPHzf47z+9rXv7eGKE1kp6b1JA4mpHXp2xVKvK7wPpStbS3M8fN/jv P72te/t4Yq35mWE6TJLcT3FvHCyOz2ZpKangAPar74qkvlQ2M+os9re6lO0UZJjvT+7IJC+PXfFU 78yiH9ESyXE1xBHGyMz2n97uwUAfS2+KpH5Uewm1M/VbzUp3jiZil6f3ZFVXx6/FirMsVQOkNG1q 5ieWRfXmBM/2qiRqgf5IP2fbFUVD9g/6z/8AEmxKSlOu/wDHU8uf9tKT/unalih4kz/lD9B/7Ztn /wAmI8VTVyBMla/ZboCe6eGFPRAMtz+nFmFlCbYQ8Telf34bf4AevHAiky5r4H/gT/TFaS2Vbk65 BMtlC9ssJDXrL+/Rvj+BT147j78VpMua+B/4E/0xWmJXVrq7ahM8egadLEZmKzvGvqMpY0dqmvIj fFaZbzXwP/An+mK0xLULXV3vp3h0DTrmNnYpNLGpdxX7TVNanFaZbzXwP/An+mK0hZvUN/ausCPE qyh52U+pGTw4hO9GoeXyxWlfkDOtK/YbqCO6eOHonoq4EIdS4tR0UCMfFU7bdemEpPNL/Lc7XGml It9+lAXYfWWVoiaH7PFhXbAhNJDII2Oy0B+KpNNuv2cVSvy3O1xpiyLffpQF2h2llaImh+zxYV2x VU1+ZoNIuJWu/wBHBeH+lKrSFKug+woqa9PpxVKPKt79ZvJlXW21ciOvpPC8IT4h8dXG/hiqb6/M 0GkXErXf6OC8P9KVWkKVdB9hRU16fTiqTeVr76zqEiLrrauRCx9B4ZIQvxJ+85OKbVpT3xVldZP5 R95/5pxVBaVK8ls7Cf63SaYeoQUpSRh6dCP2Ps174qi4a8DXY8n6f6zYSkpTrv8Ax1PLn/bSk/7p 2pYEO8mf8ofoP/bNs/8AkxHiqbH++T/Vb9aYp6JU0Vv/AInSU2M5n+r0F8OXohat+7P7PLFCc4qk 08VufM9tK1jO84tyFvl5eii1l/dt+zy/riqc4qwK9s9LbVbh48u6hNIbhy1wnq8HbmayLTbieuKs 9xVgWrWelvqd08vl3ULl2lYtPF6vBzX7S8dqHFWe4qgbhIzqlk7QSSSKk4Sda8IgfT5K/ar9vliq KP8AfJ/qt+tMU9FTFCin+8q0IH7sbnoNu+JSeaB8utI+mq0txb3bc2/e2oCxnfpRQorihMpP7tqE DY7noNu+Kpb5daR9NVpbi3u25t+9tQFjO/SihRXFVTXWddKnaOeG1YcKTXIBiX41+0GDDfoPfFUp 8sS3D3cwm1CxvQI9ks1VXB5DduKLtiqba6zrpU7Rzw2rDhSa5AMS/Gv2gwYb9B74qk/lmW4e/kE2 o2F6vosRHZqqyA8k+I8UX4cVZRiqD0ws1u5eWKY+tKOUIAUDm1FNAPiHQ++KoiH7B/1n/wCJNiUl Kdd/46nlz/tpSf8AdO1LFDvJn/KH6D/2zbP/AJMR4qmx/vk/1W/WmKeiVtLD/iVIf0hIJTb1/R/F vTIqf3nL7NcUJxiqTzywjzLbQnUJI5WtyRp4VvTkFZP3hb7NdvwxVOMVYLeXtiuqTo3me5gcXDg2 yxSlUPM/uwQKUHTFWdYqwXVb2xTUrlH8z3NoyyMDbpFKVjNfsAqKbYqzrFUFcOg1OzQ3LRsyTlbc AlZaenVmI2HCu1fHFUSf75P9Vv1pinoqYoUU/wB5VoAf3YoG6dO+JSeaC8vrMmnKtxDa2782/d2I AhpXqKE7+OKExkrwagBNDs3T6cVS7y+syacq3ENrbvzb93YgCGleooTv44qv1xZW0udYIreeQ8KR 3gBgPxr9upH0e+KpX5aivEupTc2emWymPZtPChyeQ2ajN8OKppriytpc6wRW88h5UjvADAfjX7dS Po98VSny3FepfSG5s9Ltk9IgPp6qJSeSbNRm+H+NMVZNiqD00SLbsJI4Yj6spC2+yU5tQmhPxEfa 98VREP2D/RP/AMSbEpKU67/x1PLn/bSk/wC6dqWKHeTP+UP0H/tm2f8AyYjxVNXIEyVr9lugJ7p4 YU9EA0s/6cUB7X0PR3QhvrfLfcfD9jAiky5r4H/gT/TFaS2WWf8ATkAV7UQeieSOG+tlvj3T4fsf 24rSZc18D/wJ/pitMSuptU/SEwS40UR+s3FZQ3rBeRoH+H7fj74rTLea+B/4E/0xWmJahNqgvpxF caKsfNuK3Ab1QK/7s+H7XjitMt5r4H/gT/TFaQs0j/X7UKYhHxl5q4PrE/Bx9Lbp/N9GK0r8gZ1p X7DdQR3Txw9E9FXAhDohNqtCWrGPh3326dMJSeaB8u20lvpqxvZnTDzY/Vw4kAqftcqHrgQmUiMY 2FS1Qfh339umKpb5dtpLfTVjezOmHmx+rhxIBU/a5UPXFV+u27z6VPEtsdRLcKWpYIHo6n7VBSnX 6MVSryxYTW13M76N+iQY6eqJRJz+IfDTf54qmuu27z6VPEtsdRLcKWpYIHo6n7VBSnX6MVSfyzp8 1tfyO+i/okGFl9cTCTl8SHhx360r9GKsp4t/Ofw/piqD0yF4rd1aE2lZpW9MENWrsedaft/axVFQ /YO9fiff/ZNhKSlOu/8AHU8uf9tKT/unalgQ7yZ/yh+g/wDbNs/+TEeKpsf75P8AVb9aYp6Ja0Q/ xGkv6OJPoU/SPM0G5/dcKU+nFCbYqlM8QPmO3l/RxkIgI/SPMgR7yfuuFKH5++KptirCLy0VtTnf /CrT1nc/WfrDDn8Z/e8ePfrTFWb4qwjVLRX1G5Y+VWvKyMfrAuGX1N/t8eO1cVZviqW3Ly/pqzQW BmjEcn+nc6CHkN14U35emvfFUcf75P8AVb9aYp6KmKFFN7Vagt+7Gw6n4e2JSeaXeWUjj0tVitri zXm37q7r6g36/EAaHFCaSf3b1BPwnYdTt2xVK/LKRx6WqxW1xZrzb91d19Qb9fiANDiqr5hRH0e4 WS3mu1PCsNtX1W+NPs8anbqfbFUm8pw28d5MYdNv7EmKhe8LFGHJfhXkBviqc+YUR9HuFkt5rtTw rDbV9VvjT7PGp26n2xVJPKkNvHqMjQ6Zf2LeiwMl4XMZHKP4RyA+LFWW4qgdJVVtnCQywD1pjxmr yJMjVYV/ZbqPbFUVD9g/6z/8SbEpKU67/wAdTy5/20pP+6dqWKHeTP8AlD9B/wC2bZ/8mI8VTY/3 yf6rfrTFPRKma2/xMim4uBcfV9rcV+rlat8R7csUJziqTTtbf4mtla4uFuPq54261+rstZfifty/ sxVOcVYFeyaQNVuA+p6qkn1h+UcfL0lbmaqu32a9MVZ7irAtWk0gandCbU9Vik9VuUcPL01Neibd MVZ7iqTXbWw8yWKvcXCTmJ+ECV+ruOMlTJ7jt9GKpqf75P8AVb9aYp6KmKFFafVBWoHpipHX7PbE pPNLfK7wPpStbS3M8fN/jvP72te/t4YoTWSnpvUkDiakdenbFUq8rvA+lK1tLczx83+O8/va17+3 hiqr5jaFNGuGuJJ4Yxw5SWv98P3iU4fT19sVSXyjLYyXs4tbrULhhFut99gDku679cVTrzG0KaNc NcSTwxjhyktf74fvEpw+nr7YqkXlKawk1KUWt3qNw/oMSl7/AHYHOPcb/axVmGKoHSGja1cxPLIv rzAmf7VRI1QP8kH7PtiqKh+wf9Z/+JNiUlKdd/46nlz/ALaUn/dO1LFDvJn/ACh+g/8AbNs/+TEe Kpq5ImSgJ+FulPFPHCnolzXFz+nlhF4ggMFTYUT1C1T+8r9qn04EJpyb+Q/h/XFUrmuLka/BCt4k cDQktYEJ6kjfvP3gP2qbePbFU05N/Ifw/rirD7rUNVXUZkTzHawxiZgtuyQlkUMf3ZJFajpirMOT fyH8P64qw2+1PUjeTm28yWlvDzbhCyQkoK/ZJIJ2xVmCTCVFkjBZHAZWBBBB3BG+Kpbc3FyuuWkK 3iRQtGxexYJ6kxAejKT8VBTt4YqmNSZ1qpHwN1p4p4HD0T0VcCEOqJ9VBIC/uweVK0264SkndL/L BRXGmLIt7+lAXYfWWiMRND9ni2+2BFppIkYjY0C0B+KlabdcVtK/LbRXGmLIt7+lAXYfWWiMRND9 ni2+2K2qa+YoNIuJWuv0aF4f6UsZkKVdB9hdzXp9OK2lHlW4gubyZV1ttXIjr6T27QhPiHx1fr4Y rab6+YoNIuJWuv0aF4f6UsZkKVdB9hdzXp9OK2k3la5gudQkRdcbVyIWPoPbNCF+JP3nJ9tq0p74 rbK/Tj/lh4DFbSfy28NxZzst9+lAtw6+q0RiKUVP3VG606198VtNoQAhAFByfp/rNhKSlOu/8dTy 5/20pP8AunalgQ7yZ/yh+g/9s2z/AOTEeKpsf75P9Vv1pinol7RXH6eWYWERgEFDf1X1A1T+7pXl T6MUJpiqVzRXB1+CZbCKSBYSGvyV9SNv3n7sCvKm/h4xVNMVYXcWesPdSzDyvZylpGf1Wki5MSSe Zq/U9cVZjEXaNGlXg5UFlG9DTcYqwyew1UzyFfKtlKC7EOZIqsK/aNX74qzC1DLawq8YhYRqGiWh CEAfCKdh0xVA3MVw2uWky2EUsKxsHvmK+pCSHoqgnlQ17eOKpgf75P8AVb9aYp6KmKFFP95VoQP3 Y3PQbd8Sk80D5daR9NVpbi3u25t+9tQFjO/SihRXFCZSf3bUIGx3PQbd8VS3y60j6arS3Fvdtzb9 7agLGd+lFCiuKqmus66VO0c8Nqw4UmuQDEvxr9oMGG/Qe+KpT5YluHu5hNqFjegR7JZqquDyG7cU XbFU211nXSp2jnhtWHCK1yAYl+NftBgw36D3xVJ/LMtw9/IJtRsL1fRYiOzVVkB5J8R4ovw4qyjF Up8uvI9pMZbm3uyJ3Ae0AVFHFPgbiq/EO+KplD9g/wCs/wDxJsSkpTrv/HU8uf8AbSk/7p2pYod5 M/5Q/Qf+2bZ/8mI8VTY/3yf6rfrTFPRKmW2/xMjG3uDcfV9rgV+rhat8J7csUJziqQTzWx80whrO 7a4SP0luVB+rBSrP8XavxUxVP8VeeXMejfWZeWlauzc2qycuJNTuu/TFWfW3H6vFxBVeC0VvtAUG x98VYDcx6N9Zl5aVq7NzarJy4k1O679MVZ5ZcRZ24RWRPSTisn21HEUDe/jiqW3a2x8yWLPb3Dzi J+E6V+roomlRJ7nt9GKpqf75P9Vv1pinoqYoUEcfVlAFT6Y2INOnfbCukboHy+ZU05VuILa3fm37 uxWkNK9RSu/jgRSYyOODUFTQ7Mpp9O2K0l3l8yppyrcQW1u/Nv3ditIaV6ild/HFaa8wSXB04paw 207O6ho75T6JUfFuDx3qBTFaSvy8b+K/pNZ6XbRMjBmsEpKabgfCx2xWk2195jprrbQ287Mygx3q kwkVr8QPHfbbFaSjy99ej1D99ZaXbRsjBnsEpKehp8Lh5ajfFaZTzXwP/An+mK0lXl8ypazC4gtb djOxC2K0QjinxPSvx+P0YrSZwmqE/wCU/X/WbCulKdd/46nlz/tpSf8AdO1LAh4kz/lD9B/7Ztn/ AMmI8VTV+XrJxAPwt1NO6exwp6JY0r/4jSL6+AfQr+juJodz+950p9GBCbVk/lh4n/mnFWPzXDDz PHD+l+BNP9xfBiG/d1/vOn+ViqfszqCzBQAKk1Pb/Y4qwKXUQ8runm4xqzEqggc8QTsPoxVnFpKZ rWCWNlmSSNGWWpHMFQQ1OPfFWEXF8RcSj/Fpio7D0/Qc8dz8Na9sVZvZtI1pA3MT1jQ+rUjn8I+O LO/XFUvupXHmCyi/SAhLRuf0fxJE20nx86bU6/RiqZ/F668gB8DdDXunsMPRPRVwIUUFbVRTlWMb eO3TEpPNA+XYGt9NWN7EaYebH6uH9QCp+1y364oR9wXW3lMaeq4RisdacjQ0WvviqWeWo5obFoZd OGlBJDwhEnqAggEtXfviq7zJA1xpwjTTxqh9RT9XL+n2b4uVR0xVKfLthLb6kJH8vrpg4MPrAn9S lf2eNT1xVOPMUDXGmtGliNTPNT9XL+mDQ/a5bdMVSfy7YS2+pCR/L66YODD6wJ/UpX9njU9cVZZi qU+XYGt7SZH08aYWndvSD+pzqqfvK1PXpT2xVMofsH/Wf/iTYlJSnXf+Op5c/wC2lJ/3TtSxQ7yZ /wAofoP/AGzbP/kxHiqbH++T/Vb9aYp6IFhc/pxSEtPQ9Hdz/vXy32H+RihMsVSSVb3/ABAjLFp5 t9qyMP8ATPsdt/H8MVTl68GpStDTl0+nFWGenrP/ACy+XvuP/NWKsusuYs7cSCNX9JOQg/ugeIqI /wDJ8PbFWJFdbYlmtvL5JNSSDUn/AILFWWWJlNlAZxEJfTXmIP7oGn+6/wDJ8MVQtwLn9NWhRLQw BG5vJ/vUDR6el/k+P04qjj/fJ/qt+tMU9FTFCim9qtQW/djYdT8PbEpPNLvLKRx6WqxW1xZrzb91 d19Qb9fiANDihML0A2dwGRpAYnBSP7bDifhWnc9sVSnynHFHZTCGzurEGWpS85F2PFfiXkBtiqp5 ojik0wLLa3F6vqqfStK+pWjfF8IO2KpN5Zgto9UVotK1Gzbg3727L+n8viUCpxVO/MyRyaWyy21x eLzX91aV9Q79fhBNBiqSEWYLaPVFalStRs24N+9uy/p/L4lAqcVZliqTeWY4o7OcRWtxZg3Dkpd1 5seKfGvID4T2xVNYfsH/AFn/AOJNiUlKdd/46nlz/tpSf907UsUO8mf8ofoP/bNs/wDkxHiqbH++ T/Vb9aYp6JW0UP8AiVJv0fIZRb0/SHJvTAqf3fH7NcUJxirHZre3PmqOc6RK8opTUg7+mv7un2Ps /wCTirIJN42BHLY/CO+3TFXnn6P0/wD6lC7/AOR839cVZ5pyqmn2qJCbZVhjCwMSWjAUfASd6r0x Vgf6P0//AKlC7/5Hzf1xVnWlqiabbIkDWirEoFu5JaMU+wS2+2KoK6ihbzFYytp8k0ixuFvwzBIQ Vk+BlHwmvv44qmh/vk/1W/WmKeipihDqX+qioAHp9Qd+nbbCUnmlvleSN9KVraSeePm/x3h/e1r3 26eGBCY3zMLK4L1VRE/JoyeYHE7r8PXwxVJ/KMkMllMbWW6uFEu7XzfGDxXZdumKu83SQx2UJupb q3Uy0DWLfGTxbZtumKpL5cuLF9Zt1t7zU5pDz4x3TfuT+7evP6OnviqdebpIY7KE3Ut1bqZaBrFv jJ4ts23TFUj0C4sh2e2WC81SaQs3FLlv3R+Fvt4qzusn8o+8/wDNOKpL5XkjeyuDbSXE6i5cM14f jDcU+Fdvs+GKpxDXga9eT/8AEmwlJSnXf+Op5c/7aUn/AHTtSwId5M/5Q/Qf+2bZ/wDJiPFU1fl6 ycQD8LdTTunscKeiUtNH/idIjeSif6vUWILeiVq37w7ceWBCc1k/lh4n/mnFWNzXFuPNkcJ1K4S4 NKaeC/oH93Xfbj03xVkMhcRsTRRxNSCajbr9nFXnX1/S/wDqZtS/4Kb+mKs/01y2nWjRubhGhjKz SE85AVFHaq1q3U4qwD6/pf8A1M2pf8FN/TFWeaU/PTbV4pWuUaJSs8ppNxT7TclrU4qgruaNfMlj E95LFO0TlLJS3oyjjJVnovGo/hiqbfF6y8gB8LdDXunsMKeirgQoptaqa8aRj4utNuuJSeaX+W5l uNMWRb9tUBdh9ZaMxE0P2eLb7YoR94wSznYyegFjc+qByKUU/HQdadcVSryrcLc2czrqjauBLT1n iaEp8K/Bxfr44q7zVcLbWcLtqjaQDLT1kiaYv8LfBxTp44qk+gX8c+r28S+ZZNRLc/8ARWtpIw9E c/bbYU6/RiqcearhbazhdtUbSAZaeskTTF/hb4OKdPHFUl0PUI5tVt418zSagWJ/0VrWSMSfC23N th54qzbFUn8tzrcWc7LqLaoFuHX1WjaIpRU/dUbrTrX3xVNIfsH/AFn/AOJNiUlKdd/46nlz/tpS f907USUO8mf8ofoP/bNs/wDkxHiqbH++T/Vb9aYp6IFpbr9OLClyAWxh5GyJHrlt/jA68cUJliqS S3F+PMCQLqVotqaVsWK/WD8FdhTl13+WKpy9QjEEKaGhPQYqwz9Ia9/1Muk/8FH/AM04qy6yaR7O 3eWVJ5GiQvLHTg7FRV0p2PUYqxH9Ia9/1Muk/wDBR/8ANOKss09pXsYHmmS4kaNS80VCjmm7LTsc VQ1xNdLrdpCl7BHbujGSzcj15SA9GjHWgoK/LFUcf75P9Vv1pinoqYoUU/3lWhA/djc9Bt3xKTzQ Pl1pH01WluLe7bm3721AWM79KKFFcUI68JFpOVZYyI3o8m6KeJ3b2HfFUr8sPK9pKZru1vT6mz2a qqAcV+FuKrvirvM7ypaRGG7tbI+pu94qshHFvhXkrb4qlOhTXTarAsmqabdKedYbZEErfA32Ssan bqfbFU28zvKlpEYbu1sj6m73iqyEcW+FeStviqT6LNdNqlusmq6ZcqSaxW6IJW+FvskRg4qzLFUp 8uvI9pMZbm3uyJ3Ae0AVFHFPgbiq/EO+KplD9g/6z/8AEmxKSlOu/wDHU8uf9tKT/unalih4kz/l D9B/7Ztn/wAmI8VTY/3yf6rfrTFPRLmif/ECTfo9SnoU/SHIcgan93xxQmuKpDLBKfMqTDSEdBT/ AHJcxyX4KfY6/wCTiqeSbowpy2Pw+PtirBPqF1/1KEP/ACPXFWa2ClLG2VoRbFYkBgBqIyFHwA/5 PTFWFfULr/qUIf8AkeuKsz01WSwt0aAWhWNQbcGoj2+wD7YqhLmJ216zlGnrMixuDflgGh3k+AL3 r/HFUxP98n+q360xT0VMUKCIDbLTcmMbEmnTvvhKSd0D5fhlTTlW4itrd+bfu7E0hpXqKMd/HAi0 bdx1tZwgV2Mb0WUngTQ7Pv8AZ8cVtLPLUM6WkouYLO2b1Nl080jI4jdqM3xYrbvMsM72kQtoLO5b 1N11A1jA4tuvJl+LFbSrQ7a+XVIGnsdIgjHOslnQTj4G+xSQ/T7Yraa+ZYZ3tIhbQWdy3qbrqBrG BxbdeTL8WK2lGjW18upwNNYaPCgJ5SWlBMPhP2KSHFbZhwXxP/BH+uK2lXl+GVLWYXENrbsZ2IWx NEI4p8T0Y/h5/RitpnCKIR/lP1/1mwlJSnXf+Op5c/7aUn/dO1LAh4kz/lD9B/7Ztn/yYjxVNX5e snEgfC3UV7p7jCnolLGD/EyKfrP1n6vswH+i8at1+P7eBCc0k/mh4H/mrFWNzG0/xZGrC++tbUZR /on933+Pw9uuKshkD+m1SKcTWgNenb4sVedepon++9d+4f8AVTFWf6bvp1oYiwjMMfATD94F4inq fF9rxxVgHqaJ/vvXfuH/AFUxVnmlUOm2phLiP0l4CcfvaU25/F9rxxVBXZg/xJYq/wBZNwYn9Nox /owHGSvq/h260+jFU2+L1l5Eh5W6CndPc4U9FXAhRQVtVFOVYxt47dMSk80D5dga301Y3sRph5sf q4f1AKn7XLfrihHXil7SdBH65aNx6Vac6qfhr2r0xVK/LFs9taSo+mDSSZK+kJPU5fCvx1qflirv M9s9zaRImmDViJK+kZPT4/C3x1qPliqUaFp8sGqwSt5cXTwvOt0J+ZSqMPs8jWvT6cVTfzPbPc2k SJpg1YiSvpGT0+Pwt8daj5Yqk2i6dNDqlvK3ltbAKTW5FwXKfC2/Hlv4YqzPFUp8uwNb2kyPp40w tO7ekH9TnVU/eVqevSntiqZQ/YP+s/8AxJsSkpTrv/HU8uf9tKT/ALp2pYod5M/5Q/Qf+2bZ/wDJ iPFU2P8AfJ/qt+tMU9EuaV/8QJD+kFCehX9H8RyJqf3nLFCa4qkMs8o8ypCNXRENP9xvAcm+Cv2+ v+ViqeSbIxrx2PxeHvirBPr91/1N8P8AyIXFWa2DF7G2ZphclokJnAoJCVHxgf5XXFWFfX7r/qb4 f+RC4qzPTWZ7C3dpxdlo1JuAKCTb7YHviqEuZXXXrOIagsKNG5NgVBabaT4w3an8MVTE/wB8n+q3 60xT0VMUIdXj+qgEg/u9wDudsJSRul3lk28elqsUE1mvNv3V2T6g36/FQ0OBFJhevEbO4DVkBicF Iz8bDifhWnc9sVpKfKf1aOymENrc2IMtSl4SXY8V+JeVNsVp3mz6tLZQia1ub4CWoSzJDqeLfE3G u2K0k3l6OxTWLdo9L1G0Yc6TXLP6S/A/2uQA36D3xWk582fVpbKETWtzfAS1CWZIdTxb4m412xWk k0KOxTVrZo9K1K1YMaTXDP6S/C32uQpitM49SP8Amh4jFaSbyz9Xjs5xFbz2YNw5KXZPNjxT415U +E9sVpN4SChINRyfp/rNhKSlOu/8dTy5/wBtKT/unalgQ7yZ/wAofoP/AGzbP/kxHiqbH++T/Vb9 aYp6IFo5/wBOLL9WtjD6NDcmn1kHf4B344oTLFUklguj5gSYWVi0ApW7YD60Pgpt39vliqcvUo1A CaHY9D88VYZ9S1T/AKsmifcmKsuslZbO3V0SJ1iQNHD/AHakKKqn+SO2KsR+pap/1ZNE+5MVZZp6 uljAskccLiNQ0cH92pp9lKdsVQ1xFOdatJVtrZ4lRg9y9PrCGj7R96Hv9OKo4/3yf6rfrTFPRUxQ orT6oK1A9MVI6/Z7YlJ5pb5XeB9KVraW5nj5v8d5/e1r39vDFCY3xUWVwXZ1URPyaP7YHE1K+/hi qT+UZLWSymNrPd3CiXdr77YPFdl9sVd5uktY7KE3U93bqZdmsftk8W2b2xVJfLk+mvrNutve6rNI efGO6/uT+7evPfw6e+Kp15uktY7KE3U93bqZdmsftk8W2b2xVI9An0x9XtlgvtWmkLNxS5/uj8Lf b3xVneKpL5Xe3eyuDbTXM6i5cM159sNxT4V/yfDFU2h+wf8AWf8A4k2JSUp13/jqeXP+2lJ/3TtS xQ7yZ/yh+g/9s2z/AOTEeKpq/L1k4kD4W6ivdPcYU9EpaGP/ABOkps5TP9XoL4BvRC1b92d+PLAh OaSfzD7j/wA1Yqxua3tz5sjmOm3D3ApTUAH9Afu6b78em2Kp/ctIlvK/h2eKMfTRTyagPwrv1OKv PPqGl/8AUs6l/wADN/XFWcadM6aLDLHbSQCGGiWkit6oEQKqlCa1IXFWD/UNL/6lnUv+Bm/rirOd DJbSrbhbvZIqlFt51YSIqEoOXI13AriqFu4Y28yWMr2css6xOEvVDejEOMlVejcan+OKpt8XrryI PwN0FO6e5w9E9FXAhA3V9a6bpou7yX0IVRVMnFmoWoo2QE9TiUnmgPLGqWd3A1pFqbarcQ1eSVon iPFjsKOP44oTa8YJZzsZPQCxufVA5FKKfjoOtOuKpV5VuFubOZ11RtXAlp6zxNCU+Ffg4v18cVWe a76G1gt431VtHeV2ZZEhaYuEADLROn2xiqT6JqtudUt1fzNJqAdigtWtZIxIzAqo5moFCa4qm/mu 6S2jti+rto/Jn+JIWm9SgXb4OlMVSXStRik1K2jHmmS8LSKPq5tJEEm/2OR2FcVZ1iqT+W51uLOd l1FtUC3Dr6rRtEUoqfuqN1p1r74qmkP2D/rP/wASbEpKU67/AMdTy5/20pP+6dqWKHeTP+UP0H/t m2f/ACYjxVNnEnqK6AGgINSR1K+x8MUhIG8va012bgazOsZkMghBPELy5cPl2xXZP6zfyL/wR/5o xXZLX0zUm1ddRF86260rZBj6ZovHw8d+mK7I+dbmWGSJKRM6MqyKxqpIoGHw9sV2Y7/hjXv+r/c/ ef64rsnVvaX0OmiykuDNNwZPrTMedWrRvs9RXxxXZJf8Ma9/1f7n7z/XFdk8062vLKzjtrib65JH y5TyMeTVYsK/CegNMV2U5rO+k1O3vkuTHBCrK9oGPCQkMAzbduXh3xXZGgSGQMwUAKRsSTuV/wAk eGFdqVMCEo1LSdRvJP8ARNQFrb8QDA8AmFQetWkX7qY2m0JF5f1uEkw6xHGTsSlmq1+6bG1tedF8 wsCra4CDsQbUEEH/AJ7Y2trY9B12EFYdZSMHchLRVFfomxtbal8v65NT1tYSTjWnO0VqV8KzY2tr 7Py9qFvcxzTahHNGjVaNbVYyfk6yEjG1tOJbO2mAEyepTpzJalfmcbW1i6bYowdIVVl3BGxBxtbV vRTxb/g2/wCasbW1sdrBECsSmME1IViAT47HG1tUVQg4r03O5r1374oSfXf+Op5c/wC2lJ/3TtSx V3kz/lD9B/7Ztn/yYjxVOsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdir sVSXXf8AjqeXP+2lJ/3TtSxV3kz/AJQ/Qf8Atm2f/JiPFU4eSNKc2C16VIGAkBIiTyW/WIP9+p/w Qwcce9Phy7nfWIP9+p/wQx4496+HLuSi40a1uJ5Jzqt7F6jFuEV2VRa9lUdBjxx718OXcp/oC1/6 vGof9JjY8ce9fDl3O/QFr/1eNQ/6TGx4496+HLud+gLX/q8ah/0mNjxx718OXc79AWv/AFeNQ/6T Gx4496+HLud+gLX/AKvGof8ASY2PHHvXw5dzv0Ba/wDV41D/AKTGx4496+HLud+gLX/q8ah/0mNj xx718OXc79AWv/V41D/pMbHjj3r4cu536Atf+rxqH/SY2PHHvXw5dzv0Ba/9XjUP+kxseOPevhy7 nfoC1/6vGof9JjY8ce9fDl3O/QFr/wBXjUP+kxseOPevhy7nfoC1/wCrxqH/AEmNjxx718OXc79A Wv8A1eNQ/wCkxseOPevhy7nfoC1/6vGof9JjY8ce9fDl3I3TrS2071KX0916vH/eqf1ePGv2eXSt d8eOPevhy7kd9Yg/36n/AAQx4496+HLud9Yg/wB+p/wQx4496+HLuXqysOSkEHoRuMkDbEikm13/ AI6nlz/tpSf907UsVd5M/wCUP0H/ALZtn/yYjxVLfO4BawBPEh2Knw/u81favOPx/Q7jsT+P4fpY 36dpVv37d+Hw/wCt9rw2A6VzX8MO92nHk/mrZEtQjmKV2IHwBhSvxfT2xIj0KYyyWLC70rSpBnbv Qhffbw/Zx4Yd6OPJX0tenabUnbflX4egrt+GNQ714sncsmWFaejIZOte3Q7YJADkWUDI8wpb+/Xx GQZ9Hb079PEYV6u39/vGKu39+/cYFdvTv08RhXq7f36+IwL0dv7/AHjCrt/f7xgV29e/XxGKu3p3 6eIwr1dv7/eMCqtsqPcQpL/ds6h6kAUJ33ycADIWwykiBrnSOENlPFWICLnKqMxb7C0TkQGkrSvL sct4ISG3e4/HkhLffb9fkvktdP8ATuGjZTUB7f4zX7NSoqV6GvUYTjx0a+DGOXLcb+K/6nYCUD4C renyX1gDGjc+bV5sCwoPEe2+0vDx2jxstdflzOyFu4LNLYSW71k/dKylt/iQuzD2J29iMryQgI2D 3fc3YcmQzqQ23+9m3lr/AI4lr8m/4m2bjQf3EXQ9o/4xL8dFHXf+Op5c/wC2lJ/3TtSzJcRKfKfm zyrbeVdFt7jWtPhmh0+1jkjkuoVdHWGNWVlaQEEEbjFVXVtX8jax6X1nzDYJ6PLj6d5bCvLjWvJm /lzh2Gljnq+jlaXWz018IG6XcPy8/wCpktP+k21yj+S8XeXJ/lnN3D7f1u4fl5/1Mlp/0m2uP8l4 u8r/AC1m7h9v63cPy8/6mS0/6TbXH+S8XeV/lnN3D7f1u4fl5/1Mlp/0m2uP8l4u8r/LObuh3/rd w/Lz/qZLT/pNtcf5Lxd5X+Ws3cPt/W7h+Xn/AFMlp/0m2uP8l4u8r/LObuh3/rdw/Lz/AKmS0/6T bXH+S8XeV/lrN3D7f1u4fl5/1Mlp/wBJtrj/ACXi7yv8s5u4fb+t3D8vP+pktP8ApNtcf5Lxd5X+ Wc3cPt/W7h+Xn/UyWn/Sba4/yXi7yv8ALWbuh3/rdw/Lz/qZLT/pNtcf5Lxd5X+Wc3cPt/W7h+Xn /UyWn/Sba4/yXi7yv8s5u4fb+t3D8vP+pktP+k21x/kvF3lf5Zzdw+39buH5ef8AUyWn/Sba4/yX i7yv8s5u4fb+t3D8vP8AqZLT/pNtcf5Lxd5X+Ws3cPt/W7h+Xn/UyWn/AEm2uP8AJeLvK/yzm7h+ Pi7h+Xn/AFMlp/0m2uP8l4u8r/LObuh3/rdw/Lz/AKmS0/6TbXH+S8XeV/lrN3D7f1u4fl5/1Mlp /wBJtrj/ACXi7yv8s5u4fb+t3D8vP+pktP8ApNtcf5Lxd5X+Ws3cPt/W7h+Xn/UyWn/Sba4/yXi7 yv8ALObuh3/rTqx8zeS9PtI7OHX9OZIgQC15b13Jbejgd8y8OIYoCIcDPmOWZkeqB1nzZ5Vl1HQH i1rT3SDUJJJWW6hIRDYX8fJyJNhydRU9yMsa3//Z
  • uuid:00e0d0db-416f-1047-bee6-7fafed133bf6xmp. Doad: 06801174072068118083FA0C486377C3XMP.DID: D4430B03082068118C14C42F3A03BEEF: PDF
  • Createxmp.iid: D4430B03082068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T09: 50: 08-05: 00adobe Indesign 7.0
  • savexmp.iid:B48AB3A5152068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T10:33:59-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:B58AB3A5152068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T10:33:59-05:00Adobe InDesign 7.0/метаданные
  • сохраненоxmp.iid:CC758B1E1E2068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T11:34:38-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:829D38FB2F2068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T14:34:20-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:0ABE5A72382068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T14:43:06-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp. iid:0BBE5A72382068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T14:48:08-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • сохраненоxmp.iid:10BE5A72382068118C14C42F3A03BEEF2012-05-01T15:40:28-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:35545C18262068118083E6C896501E762012-05-22T14:27:55-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:3A545C18262068118083E6C896501E762012-05-22T15:03:44-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:468567232C2068118083E6C896501E762012-05-22T15:11:10-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • сохраненоxmp.iid:4B8567232C2068118083E6C896501E762012-05-22T15:39:23-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:05801174072068118C14BE1D9062DFDF2012-06-11T10:31:24-05:00Adobe InDesign 7. 0/;/метаданные
  • savexmp.iid:0B4EAF470A2068118C14BE1D9062DFDF2012-06-11T10:52:05-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:01801174072068118083FA0C486377C32012-07-03T09:26:23-05:00Adobe InDesign 7.0/метаданные
  • savexmp.iid:06801174072068118083FA0C486377C32012-07-03T09:26:23-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:13E3DAC3092068118A6DFC133F57177B2012-07-11T16:30:31-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:18E3DAC3092068118A6DFC133F57177B2012-07-11T16:34:20-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:2227E7B2332068118A6DFC133F57177B2012-07-11T16:34:53-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • сохраненоxmp.iid:2327E7B2332068118A6DFC133F57177B2012-07-11T16:35:31-05:00Adobe InDesign 7. 0/;/метаданные
  • savexmp.iid:FB7F1174072068118C14889345AC45FF2012-07-19T10:57:26-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:9A9ECDD5082068118C14889345AC45FF2012-07-19T11:11:46-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • savexmp.iid:F768C46F0C2068118C14889345AC45FF2012-07-19T11:33:07-05:00Adobe InDesign 7.0/;/метаданные
  • xmp.iid:01801174072068118083FA0C486377C3xmp.did:D4430B03082068118C14C42F3A03BEEFxmp.сделал:D4430B03082068118C14C42F3A03BEEFdefault2902application/pdfAdobe PDF Library 9.9False конечный поток эндообъект 3 0 объект > эндообъект 5 0 объект >/Font>/ProcSet[/PDF/Text]/Properties>/MC1>/MC2>>>>>/TrimBox[0.0 0.0 612.0 792.0]/Type/Page>> эндообъект 6 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/XObject>>>/TrimBox[0.0 0.0 612.0 792.0]/Тип/Страница>> эндообъект 7 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/XObject>>>/TrimBox[0.0 0,0 612,0 792,0]/Тип/Страница>> эндообъект 8 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/XObject>>>/TrimBox[0. 0 0.0 612.0 792.0]/Тип/Страница>> эндообъект 9 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/XObject>>>/TrimBox[0.0 0.0 612.0 792.0]/Тип/Страница>> эндообъект 10 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/XObject>>>/TrimBox[0.0 0.0 612.0 792.0]/Тип/Страница>> эндообъект 11 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Text]/XObject>>>/TrimBox[0.j>.D*: qwm

    Экологические токсиканты в грудном молоке норвежских матерей и состав и метаболиты кишечных бактерий у их младенцев в возрасте 1 месяца | Микробиом

    В процессе развития дети подвергаются воздействию токсикантов окружающей среды, содержащихся в большом количестве в грудном молоке. Через 1 месяц после родов некоторые из этих химических веществ были связаны с аспектами микробного состава и функции кишечника младенцев. Эти новые открытия могут выявить механизм действия стойких токсикантов, который ранее не рассматривался; Однако эти результаты следует интерпретировать с осторожностью и требуют повторения в других исследованиях.

    ПБДЭ

    ПБДЭ-28 был связан с уменьшением разнообразия Шеннона на 4%. Кроме того, у детей грудного возраста, подвергшихся сильному воздействию ПБДЭ-28, были образцы с относительно меньшим содержанием Veillonella . ПБДЭ-28 и ПБДЭ-47 также в меньшей степени связаны с пропионовой и уксусной кислотами, сигнальными метаболитами, играющими важную роль в развитии иммунной системы [29]. Мы предполагаем, что эти более низкие уровни SCFAs могут быть частично объяснены относительно более низкой численностью Veillonella в условиях сильного воздействия, поскольку известно, что эти бактерии используют лактат в кишечнике, ферментируя его как в пропионовую, так и в уксусную кислоты [30].Потенциал бромированных антипиренов для нарушения состава и функции микробиома был продемонстрирован экспериментально. В небольшом исследовании у мышей, которых кормили ПБДЭ-47 или ПБДЭ-99, наблюдалось снижение микробного богатства, дифференцированное обилие некоторых таксонов и нарушение метаболизма желчных кислот по сравнению с контрольными мышами [31]. Острые дозы ПБДЭ через пероральный желудочный зонд (48,5 мг/кг массы тела для БДЭ-47), хотя и выше, чем воздействие окружающей среды, по оценкам, приводят к циркулирующим уровням при концентрациях, аналогичных тем, которые обнаруживаются в популяции людей. Воздействие ПБДЭ-71 в концентрациях, реалистичных для окружающей среды, привело к снижению бактериального разнообразия микробиома кишечника рыбок данио и нарушению метаболических функций, таких как энергетический обмен, вирулентность, дыхание, деление клеток, передача сигналов клетками и реакция на стресс [32]. Тем не менее, мы также отмечаем, что для разнообразия по Шеннону различия, связанные с ПБДЭ-28, были намного меньше, чем в случае преждевременных родов (на 15% меньше, чем при доношенных родах) или любого искусственного вскармливания (на 11% больше по сравнению с исключительно грудным вскармливанием).

    ПФАВ

    ПФОС был связан с уменьшением α-разнообразия микробиома на 5%. Для сравнения, кесарево сечение, известное как нарушение микробиома, было связано с уменьшением филогенетического разнообразия в этой популяции на 9% (в то время как преждевременные роды и полное кормление смесью не были связаны). Вывод о ПФОС был устойчивым к анализам чувствительности, включая добавление/исключение других потенциальных искажающих факторов и ограничение доношенных родов. Кроме того, различия между сообществами в группах с низким и высоким уровнем воздействия ПФОС были более значительными, чем внутри них.В экспериментальных условиях у мышей, получавших ПФОС через желудочный зонд, наблюдалось значительное снижение количества бактерий [33]. Однако другое исследование мышей с диетическим воздействием ПФОС в дозах, соответствующих общей популяции и профессиональному воздействию, не выявило существенных различий в микробном разнообразии кишечника по сравнению с контрольной группой [34]. Они действительно наблюдали различную численность бактерий среди Firmicutes и Bacteroidetes, а воздействие высоких доз ПФОС значительно индуцировало метаболизм бутаната.Здесь мы не обнаружили статистически значимой связи между ПФОС и метаболитами SCFA. Напротив, более высокое воздействие ПФОК было связано как с большим количеством пропионовой кислоты, отсутствием суб-OTU в пределах рода Lactobacillus , так и с большей относительной численностью суб-OTU Enteroccocus . У грызунов пропионовая кислота усиливает дифференцировку адипоцитов преадипоцитов 3 T3-L1 за счет повышенной экспрессии GPR43 и рецептора, активируемого пролифератором пероксисом γ (PPARγ) [35], как и ПФОК [36].ПФАВ продолжают вызывать озабоченность для здоровья человека, о чем свидетельствует недавнее снижение допустимого еженедельного потребления Европейским управлением по безопасности пищевых продуктов [37], и взаимодействие между этими соединениями и кишечным микробиомом требует дальнейшего изучения.

    Диоксиноподобный ПХБ-167 был связан с большим β-разнообразием микробиома кишечника, повышенной метаболической активностью и большим количеством уксусной кислоты. Это может указывать на более неоднородную реакцию на воздействие, что приводит к большему функциональному спектру в более подверженных воздействию сообществах.В экспериментальных исследованиях AhR опосредует токсичность диоксиноподобных соединений, а воздействие увеличивает бутират и пропионат у мышей AhR +/+ , но не у мышей AhR -/- [38], в то время как воздействие ПХБ-126 на личинок увеличивало филогенетическое разнообразие у мышей. кишечник лягушки [39]. Воздействие может нарушить структуру сообщества, отбирая специализированные/более устойчивые микробы, способные разлагать химическое вещество [40]. Это может привести к колонизации потенциальными условно-патогенными микробами; здесь у младенцев с более высоким воздействием ПХБ-105 было больше Clostridium perfringens .У мышей вызванные диоксином изменения в хозяине уменьшились B . fragilis [41], содержание которых в нашем исследовании было относительно ниже в группе с более высоким воздействием токсикантов на грудное молоко, как и некоторые Lactobacillus . Из-за финансовых ограничений мы измеряли только уровни менее токсичных диоксиноподобных ПХД; однако мы ожидаем, что они будут умеренно коррелировать с диоксинами и другими более токсичными диоксиноподобными соединениями [3]. Учитывая наши выводы и экспериментальные исследования, требуется более подробное исследование диоксинов и микробиоты кишечника человека.

    Хлорорганические пестициды

    Меньше ассоциаций с хлорорганическими пестицидами. Сообщества с высоким содержанием оксихлордана и дихлордифенилтрихлорэтана ( p , p ‘-ДДТ) были связаны с большей относительной численностью под-OTU рода Streptococcus , в то время как метаболит дихлордифенилдихлорэтилена ( p , p’ ) DDE) был выбран в качестве предиктора меньшего количества пропионовой кислоты. У крыс колиформные бактерии метаболизируют p , p ‘-ДДТ в p , p ‘-ДДД [42], что, вероятно, актуально для человека.

    Недиоксиноподобные ПХД

    Эти соединения были связаны с микробной функцией кишечника (снижение уровня уксусной и пропионовой кислоты), с меньшим количеством доказательств нарушения состава сообщества. Ограниченные экспериментальные данные сообщают о том, что у мышей, подвергавшихся пероральному воздействию недиоксиноподобных ПХБ, было снижено количество кишечных бактерий, в первую очередь протеобактерий [43].

    Сильные стороны и ограничения

    Это исследование основано на предполагаемой возрастной когорте с подробными данными анкеты для оценки возможного смешения. У нас была обширная оценка воздействия стойких химических веществ во время сбора образцов фекалий, что дало существенную информацию о многочисленных токсикантах грудного молока, воздействию которых подвергались кишечные бактерии. Наши методы допускали поправку на смешение сопутствующих токсикантов в линейных регрессиях, хотя мы не могли учитывать профиль воздействия сопутствующих токсикантов при оценке групп с низким, средним и высоким воздействием отдельных токсикантов. ПХБ-167 влиял на ряд показателей микробиома; однако, учитывая высокую корреляцию с другими ПХД ( r  = 0.77 – r  = 0,92), они могут представлять общие эффекты. Кроме того, другие неизмеряемые соединения могут быть более влиятельными искажающими факторами (например, мышьяк [44]). Мы оценили концентрацию в грудном молоке как прямое воздействие бактерий, а не концентрацию в крови ребенка (хотя они коррелируют в раннем возрасте [45]), что может влиять на микробиоту кишечника через физиологию хозяина.

    Использование Deblur увеличивает разрешение и уменьшает ложноположительные аннотации [24]. Мы обнаружили более дифференциально распространенные таксоны, используя закрытую справочную таблицу Greengenes, поэтому некоторые таксономические различия могут быть выражены на уровне видов и родов, а не на уровне суб-OTU.За этим можно было бы провести исследования in vitro токсического воздействия на штаммы и виды одного и того же рода.

    У нас был разумный размер выборки для анализа альфа-разнообразия; тем не менее, анализы SCFAs проводились у 70 младенцев, и их следует интерпретировать с осторожностью. Мышьяк и диазинон воздействуют на кишечную микробиоту в зависимости от пола у мышей [46, 47]; не было никакого взаимодействия между токсикантами и полом в отношении α-разнообразия, но для SCFAs мы не смогли это проверить.

    Все классы токсикантов были связаны с некоторыми изменениями в составе и функциях, но не во всех показателях или токсикантах.Это может быть связано с конкретными химическими веществами, влияющими только на определенные аспекты микробиома, неправильной классификацией воздействия, статистическими методами или случайными результатами. Чувствительность и устойчивость кишечной микробиоты к токсикантам окружающей среды была продемонстрирована на рыбе [48], и может быть трудно обнаружить небольшие преходящие эффекты в наблюдательном плане.

    Недоношенные дети, кишечная микробиота которых могла быть более восприимчива к действию токсикантов из-за незрелости их иммунной системы, были чрезмерно представлены.В линейных регрессиях поправка на преждевременные роды не повлияла на оценки токсического эффекта, хотя ограничение доношенных родов (сокращение исследуемой популяции на 22,5%) повлияло на интерпретацию ПХБ-167, которая стала ассоциироваться со снижением α-разнообразия.

    Сорок процентов матерей в когорте NoMIC не рожали, и эти женщины не кормили грудью (15 %), или недоношенные (39 % против 26 % тех, кто рожал), или если они кормили грудью исключительно на грудном вскармливании в течение более короткий период (2.3 против 4,2 месяцев), что может указывать на трудности с грудным вскармливанием. Тем не менее, не было никаких существенных различий в разнообразии кишечника младенцев в полной когорте по сравнению с нашей исследуемой популяцией, поэтому мы не ожидаем, что это повлияет на наши результаты.

    Грудное молоко представляет собой эволюционную разработку, содержащую многочисленные специализированные биологически активные вещества. Олигосахариды, молочные липиды, секреторный IgA и гормоны выделяются в молоко и индивидуально адаптируются к каждому ребенку в зависимости от условий жизни матери.Защита от инфекций и небольшое положительное влияние на IQ — хорошо задокументированные преимущества грудного вскармливания для здоровья [2]. Кроме того, растет понимание роли бактерий грудного молока в обсеменении кишечника младенцев [49]. Здесь сообщаемое матерями искусственное вскармливание в возрасте 1 месяца (т. е. неисключительно грудное вскармливание) было связано с большим разнообразием Шеннона у их младенцев (с более сильным эффектом, чем от токсикантов), и последствия такого вскармливания для здоровья ребенка следует исследовать в целенаправленное исследование.Хотя концентрации токсикантов были нормализованы по липидам, мы признаем, что существует сложная связь между липофильными химическими веществами и жирными кислотами с возможным влиянием на микробиом кишечника. Потенциальные взаимодействия между липидами, биоактивными веществами, бактериями и токсичными веществами окружающей среды в грудном молоке являются направлением для будущих исследований.

    Пробы молока были взяты в период между 2002 и 2006 годами у женщин в Норвегии. Согласно исследованиям Всемирной организации здравоохранения за 2005–2010 гг., в грудном молоке из Норвегии были обнаружены более высокие уровни диоксиноподобных ПХБ (выраженные в виде коэффициента эквивалентности токсичности, 3 пг ТЭ/г липидов) и суммы шести индикаторных ПХД (62 нг/г липидов), чем в грудном молоке. менее промышленно развитые страны южного полушария (т.например, в Австралии 1,8 пг ТЭ/г липидов и < 20 нг/г липидов), но не среди самых высоких (например, в Чехии 7 пг ТЭ/г и 380 нг/г липидов). Однако, независимо от уровня, в обследованных странах уровни диоксиноподобных ПХБ и суммы ПХБ в грудном молоке на один-два порядка превышали уровни, считающиеся токсикологически безопасными в раннем детстве [3, 50]. Напротив, сумма ДДТ в скандинавском грудном молоке была самой низкой (< 100 мкг/кг липидов), а в других европейских странах она была сравнительно выше (т.например, Чешская Республика 130 мкг/кг липидов и самый высокий показатель в тропических странах, использующих ДДТ для борьбы с переносчиками, т. е. Индия > 1000 мкг/кг липидов). Уровни ПБДЭ также относительно низки в Норвегии [51]. Из-за ограничений количество этих химических веществ сокращается [52], хотя воздействие продолжается через пыль и продукты питания, особенно в странах с более низким контролем за состоянием окружающей среды. Эти выводы актуальны для населения в целом из-за продолжающегося заражения рыбы и мяса.

    Иммунологическая память на SARS-CoV-2 оценивалась в течение 8 месяцев после заражения

    Мы благодарим Клиническое ядро ​​LJI, в частности G.Леви и Б. Шван за регистрацию здоровых доноров и закупку образцов крови. Мы благодарим К. Модербахера за вклад в анализ данных. Мы также благодарны Mt. Sinai Personalized Virology Initiative за то, что поделились образцами из банков, взятыми у участников исследования с COVID-19. Мы благодарны А. Вайнбергу за направление участников исследования и Персонализированной вирусологической инициативе (Г. Кляйнер, Л. С. Ф. Малдер, М. Саксена, К. Сривастава, К. Глисон, К. М. Бермудес-Гонсалес, К. Бич, К. Руссо, Л. Соминский, Е.Феррери, Р. Чернет, Л. Икер, А. Салимбангон, Д. Юрчишак, Х. Альшаммари, В. Мендес, А. Амоако, С. Фабр, С. Сутакаран, М. Авада, Э. Хирш, А. Шин) для обмена сохраненными образцами от участников исследования с COVID-19. Финансирование: Эта работа финансировалась NIH NIAID в соответствии с наградами AI142742 (Совместные центры иммунологии человека) (AS, SC), контракт NIH №. 75N93015 (DW, AS), U01 AI141995-03 (AS, PB) и U01 CA260541-01 (DW). Эта работа была дополнительно частично поддержана LJI Institutional Funds, John and Mary Tu Foundation (D.S.), премия NIAID по награде K08 AI135078 (JMD), UCSD T32s AI007036 и AI007384 Отделение инфекционных заболеваний (SIR, SAR), а также INV-006133 Фонда Билла и Мелинды Гейтс от Therapeutics Accelerator, Mastercard, Wellcome, частные благотворительные взносы (KMH, EOS, SC) и FastGrant от Emergent Ventures в помощь исследованиям COVID-19. Эта работа была частично поддержана контрактом HHSN272201400008C (F.K., для создания реагентов), контракт 75N93019C00051 с Совместными инновационными центрами вакцины против гриппа (CIVIC), фондом JPB (FK, VS), Фондом Коэна (VS, FK) и Открытым благотворительным проектом (№ 2020-215611; Ф.К., В.С.), а также за счет других благотворительных пожертвований. Мы также благодарим всех пациентов с COVID-19 и здоровых людей, которые сделали это исследование возможным благодаря щедрому донорству крови. Вклад авторов: Conceptualization, S.C., A.S., and D.В.; Расследование, JMD, JM, YK, KMH, EDY, CEF, AG, SH и CN; Формальный анализ, JMD, JM, YK, KMH, CEF, SH, BP, DW, AS и SC; Набор пациентов и образцы, SIR, AF, SAR, FK, VS, DMS и DW; Материальные ресурсы, FK, VS, VR, EOS, DW, AS и SC; Data Curation, YK, JMD, JM и SH; Письмо, YK, JMD, JM, SIR, DW, AS и SC; Надзор, D.W., A.S. и S.C., Администрация проекта, A.F. Конкурирующие интересы: A.С. является консультантом компаний Gritstone, Flow Pharma, Merck, Epitogenesis, Gilead и Avalia. SC является консультантом Avalia. Л.Дж.И. подала заявку на патентную защиту различных аспектов Т-клеточного эпитопа и разработки вакцины. Компания Mount Sinai выдала коммерческим организациям лицензии на проведение серологических анализов и подала заявку на патентную защиту серологических анализов. Д.С., Ф.А., В.С., Ф.К. указаны в качестве изобретателей в находящейся на рассмотрении патентной заявке (F.K., VS) и вакцинах против SARS-CoV-2 на основе вируса болезни Ньюкасла (NDV), которые называют F.К. как изобретатель. Все остальные авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Наличие данных и материалов: Все данные приведены в дополнительных материалах. Пулы эпитопов, используемые в этой статье, будут доступны для научного сообщества по запросу и при заключении соглашения о передаче материала. Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Эта лицензия не распространяется на рисунки/фотографии/произведения искусства или другой контент, включенный в статью, авторство которого принадлежит третьей стороне; получить разрешение от правообладателя перед использованием такого материала.

    Эффективность берберина у пациентов с диабетом 2 типа

    Метаболизм. Авторская рукопись; Доступен в PMC 2009 мая 1.

    Опубликовано в окончательной редактированной форме AS:

    PMCID: PMC2410097

    NIHMSID: NIHMS49995

    Jun Yin

    гюнь Инь

    Департамент эндокринологии , больница Синьхуа, аффилированная в Шархос в Шанхае JiaOtong Медицина, Шанхай 200092, Китай

    b Центр биомедицинских исследований Пеннингтона, Батон-Руж, Луизиана 70808, Ю.SA

    Huili Xing

    a Отделение эндокринологии, больница Синьхуа, филиал Шанхайского медицинского факультета университета Цзяотун, Шанхай 200092, Китай

    Jianping Ye

    a Отделение эндокринологии, Xinhua of Medicine, Шанхай 200092, Китай

    a Отделение эндокринологии, больница Синьхуа, филиал Шанхайского медицинского факультета Университета Цзяотун, Шанхай 200092, Китай

    b Центр биомедицинских исследований Пеннингтона, Батон-Руж, Луизиана 70808, U. ЮАР

    * Соответствующий автор. Центр биомедицинских исследований Пеннингтона, 6400 Perkins Road, Baton Rouge, LA 70808, США, тел. 225 763 2611; факс. 225 763 0274, адрес электронной почты: [email protected] (J. Yin) Окончательная отредактированная версия этой статьи доступна по адресу MetabolismSee другие статьи в PMC, которые цитируют опубликованную статью.

    Abstract

    Было показано, что берберин регулирует метаболизм глюкозы и липидов in vitro и in vivo. Это пилотное исследование должно было определить эффективность и безопасность берберина при лечении пациентов с диабетом 2 типа.В исследовании А 36 взрослых с недавно диагностированным диабетом 2 типа были рандомизированы для лечения берберином или метформином (0,5 г три раза в день) в течение 3 месяцев. Гипогликемический эффект берберина был аналогичен таковому у метформина. Значительное снижение гемоглобина A1c (HbA 1c ; с 9,5% ± 0,5% до 7,5% ± 0,4%, P <0,01), глюкозы в крови натощак (FBG; с 10,6 ± 0,9 ммоль/л до 6,9 ± 0,5 ммоль/л). L, P <0,01), постпрандиальная глюкоза крови (ПСК; от 19,8±1,7 до 11.1 ± 0,9 ммоль/л, P <0,01) и триглицериды плазмы (от 1,13 ± 0,13 ммоль/л до 0,89 ± 0,03 ммоль/л, P <0,05) наблюдались в группе берберина. В исследовании B 48 взрослых с плохо контролируемым диабетом 2 типа принимали добавки с берберином в течение 3 месяцев. Берберин действовал путем снижения FBG и PBG от одной недели до конца испытания. HbA 1c снизился с 8,1% ± 0,2% до 7,3% ± 0,3% ( P <0,001). Инсулин плазмы натощак и HOMA-IR снизились на 28.1% и 44,7% ( P <0,001) соответственно. Общий холестерин и холестерин липопротеинов низкой плотности (LDL-C) также значительно снизились. Во время исследования 20 (34,5%) пациентов страдали преходящими желудочно-кишечными побочными эффектами. Функциональные поражения печени или почек наблюдались не у всех пациентов. В заключение, это пилотное исследование показывает, что берберин является мощным пероральным гипогликемическим средством, благотворно влияющим на метаболизм липидов.

    1. Введение

    Диабет 2 типа представляет угрозу для здоровья во всем мире, и лечение этого заболевания ограничено наличием эффективных лекарств.Все существующие пероральные гипогликемические средства имеют последующую неэффективность после длительного приема. Таким образом, необходимы новые пероральные препараты для длительного контроля уровня глюкозы в крови у пациентов с сахарным диабетом 2 типа. Некоторые растительные продукты из обычно считающихся безопасными (GRAS) растений широко используются при лечении диабета из-за их антиоксидантных, противовоспалительных, противоожирительных и антигипергликемических свойств [1, 2]. Однако недостатком использования растений GRAS является сложность контроля их качества, поскольку большинство этих растительных продуктов представляют собой смеси нескольких соединений.По сравнению с другими продуктами из растений GRAS берберин представляет собой единственное очищенное соединение и обладает гипогликемическим эффектом in vitro и in vivo [3-6].

    Берберин (молекулярная формула C 20 H 19 NO 5 и молекулярная масса 353,36) является основным активным компонентом древнего китайского растения Coptis chinensis French , которое использовалось для лечения диабета на протяжении тысячелетий. годы. Берберин — это безрецептурный препарат, который используется для лечения желудочно-кишечных инфекций в Китае.Гидрохлорид берберина (B·HCl·nh3O) — наиболее популярная форма берберина, используемая в этом пилотном исследовании. Химическая структура берберина и родственных изохинолиновых алкалоидов сильно отличается от обычно используемых других гипогликемических средств, таких как сульфонилмочевины, бигуаниды, тиазолидиндионы или акарбоза. Следовательно, если эффективность и безопасность берберина подтвердятся, он может стать новым классом антидиабетических препаратов.

    Это пилотное исследование было направлено на оценку эффективности берберина у людей с диабетом 2 типа.Берберин давали как пациентам с недавно диагностированным диабетом, так и пациентам с плохо контролируемым диабетом отдельно или в комбинации с другими гипогликемическими средствами в течение трех месяцев. HbA1c, уровень глюкозы в крови и индекс HOMA использовались для определения эффективности берберина.

    2. Субъекты и методы

    Субъекты были набраны из диабетического амбулаторного отделения больницы Синьхуа по рекламе в клинике. Было обследовано 97 китайских добровольцев, 13 человек были исключены из исследования из-за несоответствия критериям набора.Таким образом, в исследование были включены 84 человека (49 женщин и 35 мужчин) с сахарным диабетом 2 типа. Все участники получили письменную и устную информацию о естественных и потенциальных рисках исследования и дали свое информированное согласие. Экспериментальный протокол был одобрен комитетом по этике больницы Синьхуа. Исследование монотерапии было разработано для сравнения берберина с метформином (исследование А, n = 36). Комбинированная терапия была направлена ​​на оценку аддитивного или синергетического действия берберина на классические антидиабетические средства (исследование B, n = 48).

    Основными критериями включения были гемоглобин A 1c (HbA 1c ) > 7,0% или уровень глюкозы в крови натощак (FBG) > 7,0 ммоль/л, ИМТ > 22 кг/м 2 , возраст 25-75 лет и отрицательный тест на беременность для женщин. В общей сложности 36 пациентов, у которых впервые был диагностирован диабет 2 типа, были включены в исследование А. После двухмесячной фазы, в течение которой пациентов лечили только диетой, они были случайным образом распределены для приема берберина или метформина. В общей сложности 48 пациентов с диабетом 2-го типа, неадекватно получавших диету в сочетании с препаратами сульфонилмочевины, метформином, акарбозой или инсулином в отдельности или в комбинации, были включены в исследование В (10).Доза препаратов была стабильной не менее чем за 2 мес до включения в исследование и оставалась неизменной на протяжении всего исследования. Все участники были проинструктированы о сохранении своих привычек образа жизни в ходе исследования.

    Таблица 1

    9009 Базовые характеристики введения администрации гипогликемических агентов

    9 7 + + 3 3 + + + + + + + + + + + +
    диета Metforylureas Metformin Acarbose INSULIN
    36 +
    1
    +
    8 + +
    12 + + +
    9 + + + 9030 9
    4
    1 +
    1
    +

    Каждое исследование включало 13-недельное лечение. В исследовании А 18 участников принимали 500 мг берберина три раза в день в начале каждого основного приема пищи или 500 мг метформина три раза в день после основных приемов пищи. В исследовании B к предыдущему лечению в течение 3 месяцев добавляли 500 мг берберина три раза в день. Если возникали тяжелые побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта, дозу берберина снижали до 300 мг три раза в день.

    Пациенты оценивались еженедельно в течение первых 5 недель лечения, а затем каждые 4 недели до конца исследования. Первичной конечной точкой эффективности был гликемический контроль, определяемый по уровням HbA 1c .Вторичные параметры эффективности включали изменения концентрации глюкозы в крови натощак (FBG), постпрандиальной глюкозы в крови (PBG), триглицеридов плазмы, общего холестерина, холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-C) и холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C). Побочные явления регистрировались на протяжении всего исследования путем прямого опроса.

    2.1. Измерения

    Уровень глюкозы в крови определяли методом глюкозооксидазы (Roche, Базель, Швейцария). Сывороточный инсулин и С-пептид определяли радиоиммуноанализом (Linco Research, St.Чарльз, Миссури). HbA 1c анализировали с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (BioRad, Hercules, CA). Концентрации триглицеридов плазмы, общего холестерина, ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП, аланинтанзаминазы (АЛТ), γ-глутамилтранспептидазы (γ-GT) и креатинина определяли с помощью ферментативных анализов (Roche, Базель, Швейцария). Метод HOMA использовали для сравнения различий профилей инсулинорезистентности (HOMA-IR) и дисфункции β-клеток (HOMA-β-клеток) [7]. Десять субъектов, получавших инсулин, были исключены из анализа НОМА.

    HOMA-IR = инсулин натощак (мкЕд/мл) × глюкоза натощак (ммоль/л)/22,5 — 3.5]

    2.2. Статистический анализ

    Описательная статистика и анализ были выполнены в SPSS 12.0 для Windows. В исследовании А значимость различий между средними значениями групп метформина и берберина анализировали с помощью критерия суммы рангов Уилкоксона. Статистические различия между исходным уровнем и конечной точкой были рассчитаны с использованием критерия знакового ранга Уилкоксона.В исследовании B значимость различий между разными временными точками анализировали с помощью повторного измерения ANOVA. Уровень α был установлен на уровне 0,05.

    3. Результаты

    В исследование А были включены 36 пациентов, которые были рандомизированы для лечения метформином или берберином. Три пациента из группы берберина и два пациента из группы метформина выбыли из исследования из-за неэффективности лечения. В исследование B было включено 48 пациентов, а 5 субъектов были исключены из исследования до 13-й недели.Среди пяти субъектов трое не смогли завершить исследование из-за недостаточной эффективности, один не смог завершить исследование из-за недостаточного времени участия и один был исключен из-за несоблюдения режима (количество таблеток <80%). Таким образом, 74 участника имели право на окончательный анализ.

    3.1. Берберин по сравнению с метформином (исследование А)

    У пациентов с недавно диагностированным диабетом берберин снижал уровень глюкозы и липидов в крови (). Выявлено достоверное снижение HbA 1c (на 2%; P < 0,01), ВРБ (на 3.8 ммоль/л; P < 0,01) и ПБГ (на 8,8 ммоль/л; P < 0,01) в группе берберина. FBG (или PBG) постепенно снижался во время лечения берберином, достигая надира, который был на 3,7 ммоль/л (или 8,7 ммоль/л) ниже исходного уровня к 5-й неделе, и оставался на этом уровне до конца исследования (). Триглицериды и общий холестерин снизились на 0,24 ммоль/л ( P <0,05) и 0,57 ммоль/л ( P <0,05) при лечении берберином. Казалось, что наблюдается тенденция к снижению HDL-C и LDL-C; однако существенных различий между 1 и 13 неделями в группе берберина не наблюдалось.По сравнению с метформином берберин проявлял идентичный эффект в регуляции метаболизма глюкозы, такого как HbA 1c , FBG, PBG, инсулин натощак и постпрандиальный инсулин. В регуляции липидного обмена активность берберина лучше, чем у метформина. К 13 неделе триглицериды и общий холестерин в группе берберина снизились и были значительно ниже, чем в группе метформина (90–192 P 90–193 <0,05).

    Как берберин, так и метформин значительно снижали FBG и PBG у пациентов с диабетом 2 типа с 1 по 13 неделю.А означает ± стандартная ошибка среднего для 15 пациентов, получавших только берберин. B означает ± стандартная ошибка среднего для 16 пациентов, получавших только метформин. C означает ± стандартная ошибка среднего для 43 пациентов с комбинированной терапией, включающей берберин.

    Таблица 2

    Монотерапевтические эффекты метформина и берберина

    9,47 ± 0,65 6 6.85 ± 0.53 ** PBG (MMOL / L) Общий холестерин (MMOL / L) 9016 * 9,2948 3 Комбинированная терапия берберином (исследование В)

    В первые 7 дней лечения берберин привел к снижению ВРБ с 9. 6 ± 2,7 ммоль/л до 7,8 ± 1,8 ммоль/л ( P <0,001; ) и в PBG от 14,8 ± 4,1 ммоль/л до 11,7 ± 3,6 ммоль/л ( P <0,001). В течение второй недели ВРГ и ПБГ еще больше снизились, достигнув надира, который был на 2,1 ммоль/л (7,5 ± 2,1 ммоль/л) и 3,3 ммоль/л (10,5 ± 2,5 ммоль/л) ниже исходного уровня соответственно, и остались на прежнем уровне. этот уровень в дальнейшем.

    При комбинированной терапии в течение 5 недель берберин приводил к снижению HbA 1c с 8,1% до 7,3% ( P < 0.001; ). FBG и PBG также заметно снизились (90–192 P 90–193 < 0,001). Инсулин натощак и HOMA-IR снизились на 29,0% ( P <0,01) и 46,7% ( P <0,001) соответственно. Липиды крови, включая триглицериды, общий холестерин и холестерин ЛПНП, снизились и были значительно ниже исходного уровня. При отсутствии изменения веса талия и талия/бедра пациентов значительно уменьшились. Никаких существенных изменений в критериях не наблюдалось между 5 и 13 неделями, за исключением прироста С-пептида натощак ( P < 0. 05) и постпрандиальный С-пептид ( P < 0,01). Во время исследования уровень С-пептида натощак у пациентов, получавших лечение инсулином, снижался, а затем повышался, а постпрандиальный С-пептид увеличивался на 70,5% ( P <0,01) через 13 недель.

    Таблица 3

    Берберин в комбинации-терапии

    Метформин ( n =16)
    Берберин ( n =15)
    Базовый уровень Конечная точка Базовая линия Конечная линия Конечная точка
    HBA 1C (%) 9. 15 ± 0.57 7.72 ± 0,43 9016 ** 9.47 ± 0,65 7028 ± 0,403016 **
    FBG (MMOL / L) 9,96 ± 0,64 7,16 ± 0,71 ** 10.63 ± 0.88
    20.53 ± 1,87 12.86 ± 0,77 ** 19,83 ± 1,66 11,05 ± 0,92 * *
    Инсулин натощак (мкЕд/мл) 27. 3 ± 4,4 22,9 ± 5.2 22,9-159 29,1 ± 5.3 24,0 ± 5.5
    Постпрандиал инсулин (μU / ML) 125,3 ± 29,8 125,3 ± 21,8 110,5 ± 21,4 — 31,4 116,0 ± 26,9
    Триглицерид (ммоль / л) 1.19 ± 0.12 1,17 ± 0.13 1,13 ± 0.13 0,89 ± 0,03 *
    4,31 ± 0,28 4,27 ± 0. 15 4.40 ± 0.21 4,40 ± 0.21 *
    HDL-C (MMOL / L) 1,25 ± 0,06 1,31 ± 0,08 1,33 ± 0.10 1,22 ± 0,04
    Хс-ЛПНП (ммоль/л) 2,55 ± 0,38 2,43 ± 0,11 2,47 ± 0,13 2,36 ± 0,06
    9016 ** 9030* 9016 *** 9. 7 ± 0,9 * ** 9017 9030* 80117 9030* 8.4 ± 1,8 *** 04 (MMOL / L)
    неделей 0 неделя 5 неделя 13
    BMI 26,0 ± 0,6 26,1 ± 0,8 26.0 ± 0,8
    талии (см) 89,0 ± 1,5 86,9 ± 1,8 ** 87,0 ± 1,7 **
    Талия / бедра 0,89 ± 0,01 0. 86 ± 0.01 * * 0.86 ± 0,01
    HBA 1C (%) 8,1 ± 0,2 8,1 ± 0,2 7,3 ± 0,2 *** 7,3 ± 0,3 ***
    FBG (ммоль/л) 9,6 ± 0,4 7.6 ± 0,3 *** *** 7.6 ± 0,3 ***
    PBG (MMOL / L) 14,8 ± 0,7 10,8 ± 0,6 ***
    Пост инсулин (μУ / мл) 35,2 ± 3.3 25,0 ± 2,6 ** 25,3 ± 5.3 **
    PostPrandial Insulin (μU / ML) 104,1 ± 9,5 88,0 ± 11,4 76,5 ± 15,6
    HOMA-IR 15.2 ± 1,6 8.1 ± 1,0 ***
    128.6 ± 12.2 164.2 ± 27,3 151.7 ± 28.6
    Пост C-пептид (NG / мл) 0,96 ± 0,28 0,28 0,85 ± 0,24 *
    постпрандиал C-пептид (NG / ML) 2,27 ± 0,72 2,28 ± 0,80 3,87 ± 0,14 ** ˆˆ
    Триглицериды (ммоль/л) 1.73 ± 0.17 1.39 ± 0.18 * 1,49 ± 0,49 1,49 ± 0,49
    Общий холестерин (ммоль / л) 4,97 ± 0.13 4,20 ± 0.13 *** 438 ± 0,4016116 *
    HDL-C (MMOL / L) 1,37 ± 0,04 1,31 ± 0,05 1,32 ± 0,05
    3,00 ± 0.10 2,50 ± 0.10 *** 2,59 ± 0,27 **
    АЛТ (ед/л) 31.5 ± 4.1 26,5 ± 2.6 25.2-70309 25,2 ± 7,0
    γ-GT (U / L) 41,8 ± 7,8 41,5 ± 8,4 41,4 ± 1,2 41,4 ± 1,2
    Creatininine (MMOL / L) 88,5 ± 3,1 90,8 ± 3,7 90,8 ± 8,1

    Результаты по безопасности

    Частота нежелательных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта составила 34,5% в течение 13 недель лечения берберином, включая монотерапию и комбинированную терапию. Эти события включали диарею ( n : 6; процент: 10.3%), запор (4; 6,9%), метеоризм (11; 19,0%) и боль в животе (2; 3,4%). Побочные эффекты наблюдались только в первые четыре недели у большинства пациентов. У 14 (24,1%) пациентов доза берберина снизилась с 0,5 г три раза в день до стандартной. до 0,3 г 3 раза в день как следствие нежелательных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта. Из 14 пациентов десять получали метформин или акарбозу в сочетании с берберином. Остальных лечили инсулином в сочетании с берберином. Ни один из пациентов не страдал от серьезных побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта, когда принимался только берберин.При комбинированной терапии нежелательные явления исчезали через неделю после снижения дозы берберина. Данные свидетельствуют о том, что берберин в дозе 0,3 г три раза в день. хорошо переносится при комбинированной терапии.

    В этом исследовании осуществлялся мониторинг функций печени и почек. В течение 13 недель лечения берберином не наблюдалось значительных изменений уровня АЛТ, γ-ГТ и креатинина в плазме (). Ни у одного больного не наблюдалось выраженного (более 50%) повышения активности печеночных ферментов или креатинина.

    4. Обсуждение

    О гипогликемическом эффекте берберина сообщалось в 1988 г., когда он применялся для лечения диареи у больных диабетом в Китае [8]. С тех пор берберин часто используется в качестве антигипергликемического средства многими врачами в Китае. В китайской литературе имеется значительное количество клинических сообщений о гипогликемическом действии берберина. Однако большинство предыдущих исследований плохо контролировались, а эксперименты не были хорошо спланированы. Кроме того, ни один из них не использовал HbA 1c в качестве параметра из-за плохих условий исследования.Таким образом, необходимо тщательно оценить антидиабетический эффект берберина.

    В этом экспериментальном исследовании берберин значительно снижал уровни HbA 1c у пациентов с диабетом. Эффект снижения HbA1c был сопоставим с эффектом метформина, широко используемого перорального гипогликемического средства [9, 10]. При монотерапии берберином и метформином все улучшали гликемические параметры (HbA 1c , FBG и PBG). Но их влияние на липидный обмен было различным. Берберин значительно снизил уровень триглицеридов в сыворотке крови и общий уровень холестерина.Уровни HDL-C и LDL-C у пациентов, получавших лечение стрижкой, также были снижены, но это снижение не достигло статистической значимости. Вопрос о том, оказывает ли берберин понижающее действие на HDL-C, нуждается в дальнейшем изучении. По сравнению с берберином метформин мало влиял на эти параметры липидов.

    В сочетании с другими агентами берберин проявлял постоянную активность в улучшении показателей гликемии и липидов у пациентов с диабетом. Берберин повышал чувствительность к инсулину, так как значение HOMA-IR снижалось почти на 50%.Этот эффект может быть связан с распределением жира под действием берберина, поскольку талия и талия/бедра пациентов значительно уменьшились без изменения веса. Интересно, что как натощак, так и постпрандиальные С-пептиды значительно увеличивались у пациентов, когда берберин использовался вместе с инсулином, что позволяет предположить, что длительное лечение берберином может улучшить секрецию инсулина у пациентов с последующей неэффективностью пероральных гипогликемических средств. Влияние берберина на функцию островков нуждается в дальнейшем изучении.

    Механизм действия берберина на метаболизм глюкозы все еще исследуется. Мы и другие продемонстрировали, что берберин обладает сенсибилизирующим действием на инсулин in vivo и in vitro [3, 4, 5, 11, 12]. У крыс с ожирением, вызванным диетой, берберин снижал резистентность к инсулину, подобно метформину [13, 6]. В гепатоцитах, адипоцитах и ​​мышечных трубках берберин увеличивал потребление глюкозы и/или поглощение глюкозы в отсутствие инсулина [3, 6, 14]. Повышение метаболизма глюкозы берберином может быть связано со стимуляцией гликолиза, что связано с ингибированием окисления в митохондриях [6].Берберин также может действовать как ингибитор альфа-глюкозидазы. Он ингибировал активность дисахаридаз и снижал транспорт глюкозы через эпителий кишечника [15, 16]. Это может способствовать неблагоприятным желудочно-кишечным эффектам берберина у некоторых пациентов. Этот побочный эффект часто наблюдался, когда берберин использовался в сочетании с метформином или акарбозой, которые также сами по себе имеют аналогичные побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта. Таким образом, при сочетании с этими двумя средствами дозировку берберина следует снизить до 0.3 г 3 раза в день чтобы избежать сильного метеоризма или диареи.

    Предполагается, что берберин может использоваться в качестве терапевтического средства для снижения уровня липидов. В этом экспериментальном исследовании берберин снижал сывороточный холестерин, триглицериды и холестерин ЛПНП. Эта активность аналогична описанной в других исследованиях in vivo [17, 18]. Однако необходимы дальнейшие исследования, в том числе исследования результатов на людях, чтобы подтвердить эту активность и ее преимущества. Механизм регуляции метаболизма липидов берберином исследовался несколькими группами.У хомяков с гиперлипидемией берберин снижал уровень холестерина в сыворотке и Х-ЛПНП, повышал уровень мРНК рецептора ЛПНП, а также белок в печени [19]. Эти эффекты были частично обусловлены стабилизацией мРНК рецептора ЛПНП, опосредованной сигнальным путем ERK [20]. Сообщалось, что в дополнение к положительной регуляции рецептора ЛПНП берберин ингибирует синтез липидов в гепатоцитах человека посредством активации AMPK [21].

    Таким образом, берберин является мощным пероральным гипогликемическим средством с умеренным влиянием на метаболизм липидов.Это безопасно, а стоимость лечения берберином очень низкая. Он может служить кандидатом в новые лекарственные средства для лечения диабета 2 типа. Однако это пилотное исследование. Эффективность берберина необходимо проверить на гораздо большей популяции и охарактеризовать как функцию известной продолжительности диабета. Необходимы дальнейшие исследования для оценки действия берберина на диабет 2 типа в других этнических группах.

    Благодарности

    Финансовая поддержка этого исследования была предоставлена ​​больницей Синьхуа.Это исследование частично поддерживается грантом NIH (P50 AT02776-020002) J Ye.

    Сноски

    Отказ от ответственности издателя: Это PDF-файл неотредактированной рукописи, которая была принята к публикации. В качестве услуги нашим клиентам мы предоставляем эту раннюю версию рукописи. Рукопись будет подвергнута редактированию, набору текста и рецензированию полученного доказательства, прежде чем она будет опубликована в ее окончательной цитируемой форме. Обратите внимание, что в процессе производства могут быть обнаружены ошибки, которые могут повлиять на содержание, и все правовые оговорки, применимые к журналу, относятся к нему.

    Ссылки

    1. Jayaprakasam B, Olson LK, Schutzki RE, et al. Уменьшение ожирения и непереносимости глюкозы у мышей C57BL/6 с высоким содержанием жиров с помощью антоцианов и урсоловой кислоты в кизиле (Cornus mas) J Agric Food Chem. 2006; 54: 243–8. [PubMed] [Google Scholar]2. Мацуи Т., Уэда Т., Оки Т. и др. Ингибирующее действие природных ацилированных антоцианов на альфа-глюкозидазу. 2. Ингибирование альфа-глюкозидазы изолированными ацилированными антоцианами. J Agric Food Chem. 2001; 49: 1952–1956. [PubMed] [Google Scholar]3.Инь Дж., Ху Р., Чен М. и др. Влияние берберина на метаболизм глюкозы in vitro. Метаболизм. 2002; 51: 1439–43. [PubMed] [Google Scholar]4. Инь Дж., Чен М., Тан Дж. и др. Влияние берберина на метаболизм глюкозы и липидов в экспериментах на животных. Китайский журнал диабета. 2004; 12: 215–8. [Google Академия]5. Ли Ю.С., Ким В.С., Ким К.Х. и др. Берберин, натуральный растительный продукт, активирует AMP-активированную протеинкиназу, оказывая благотворное метаболическое действие при диабете и резистентности к инсулину. Диабет.2006; 55: 2256–64. [PubMed] [Google Scholar]6. Инь Дж., Гао З., Лю Д. и др. Берберин улучшает метаболизм глюкозы за счет индукции гликолиза. Am J Physiol Endocrinol Metab. в прессе. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]7. Мэтьюз Д.Р., Хоскер Дж.П., Руденски А.С. и соавт. Оценка модели гомеостаза: резистентность к инсулину и функция бета-клеток по концентрации глюкозы в плазме натощак и концентрации инсулина у человека. Диабетология. 1985; 28: 412–9. [PubMed] [Google Scholar]8. Ни YX. Терапевтическое действие берберина на 60 больных сахарным диабетом II типа и экспериментальное исследование.Чжун Си И Цзе Хэ За Чжи. 1988; 8: 711–3. 707. [PubMed] [Google Scholar]9. ДеФронзо Р., Гудман А. Эффективность метформина у пациентов с инсулиннезависимым сахарным диабетом. N Engl J Med. 1995; 333: 541–9. [PubMed] [Google Scholar] 10. Сериелло А., Джонс Д., Видел М. и др. Сравнение влияния пиоглитазона с метформином или производными сульфонилмочевины (монотерапия и комбинированная терапия) на постнагрузочную гликемию и суммарный индекс чувствительности к инсулину при пероральном тесте на толерантность к глюкозе у больных сахарным диабетом 2 типа.Уход за диабетом. 2005; 28: 266–72. [PubMed] [Google Scholar] 11. Тан Л.К., Вэй В., Чен Л.М. и др. Влияние берберина на диабет, вызванный аллоксаном и диетой с высоким содержанием жиров/холестерина у крыс. J Этнофармакол. 2006; 108:109–15. [PubMed] [Google Scholar] 12. Чжоу Л., Ян Ю., Ван С. и др. Берберин стимулирует транспорт глюкозы через механизм, отличный от инсулина. Метаболизм. 2007; 56: 405–12. [PubMed] [Google Scholar] 13. Гао Ч.Р., Чжан Д.К., Хуан К.Л. Экспериментальное исследование берберина повысило чувствительность к инсулину у крыс с резистентностью к инсулину.Чжунго Чжун Си И Цзе Хэ Цза Чжи. 1997; 17: 162–4. [PubMed] [Google Scholar] 14. Ко Б.С., Чой С.Б., Парк С.К. и др. Инсулиносенсибилизирующее и инсулинотропное действие берберина из корневища Cortidis. Биол Фарм Бык. 2005; 28:1431–7. [PubMed] [Google Scholar] 15. Пан Г.Ю., Ван Г.Дж., Сан Дж.Г. и др. Ингибирующее действие берберина на всасывание глюкозы. Яо Сюэ Сюэ Бао. 2003;38:911–4. [PubMed] [Google Scholar] 16. Пан Г.Ю., Хуан З.Дж., Ван Г.Дж. и др. Антигипергликемическая активность берберина возникает из-за снижения всасывания глюкозы.Планта Мед. 2003; 69: 632–6. [PubMed] [Google Scholar] 17. Конг В., Вей Дж., Абиди П. и др. Берберин — новый препарат для снижения уровня холестерина, работающий по уникальному механизму, отличному от статинов. Нат Мед. 2004; 10:1344–51. [PubMed] [Google Scholar] 18. Ленг С.Х., Лу Ф.Е., Сюй Л.Дж. Терапевтические эффекты берберина у крыс с нарушенной толерантностью к глюкозе и его влияние на секрецию инсулина. Акта Фармакол Син. 2004; 25: 496–502. [PubMed] [Google Scholar] 19. Доггелл СА. Берберин — новый подход к снижению уровня холестерина.Мнение эксперта по расследованию наркотиков. 2005; 14: 683–5. [PubMed] [Google Scholar] 20. Абиди П., Чжоу Ю., Цзян Д.Д. и др. Регулируемая внеклеточным сигналом киназозависимая стабилизация мРНК печеночного рецептора липопротеинов низкой плотности с помощью фитотерапии берберина. Артериосклеры Тромб Васк Биол. 2005;25:2170–6. [PubMed] [Google Scholar] 21. Бруск Дж. М., Анселлин Н., Грондин П. и соавт. Ингибирование синтеза липидов за счет активации АМФ-киназы: дополнительный механизм гиполипидемического действия берберина. J липидный рез.2006;47:1281–8. [PubMed] [Google Scholar]

    Эволюция иммунитета антител к SARS-CoV-2

    Представление данных

    Статистические методы не использовались для предварительного определения размера выборки. Эксперименты не были рандомизированы, и исследователи не были слепы к распределению во время экспериментов и оценки результатов.

    Участников исследования

    Ранее зарегистрированных участников исследования 1 попросили вернуться для последующего 6-месячного визита в университетскую больницу Рокфеллера с 31 августа по 16 октября 2020 года.Приемлемыми участниками были взрослые в возрасте 18–76 лет, у которых либо была диагностирована инфекция SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР (случаи), либо были тесные контакты (например, члены одной семьи, коллеги или члены одной религиозной общины) кто-то, у кого была диагностирована инфекция SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР (контакты). Тесные контакты без сероконверсии против SARS-CoV-2 по оценке серологических анализов (описанных в разделе «Высокопроизводительные автоматизированные серологические анализы») не были включены в последующий анализ.Большинство участников исследования были жителями трех штатов Большого Нью-Йорка, и их попросили вернуться примерно через шесть месяцев после появления симптомов COVID-19. Участники были доставлены в больницу Университета Рокфеллера для сбора образцов крови, и их попросили вспомнить симптомы и тяжесть клинических проявлений во время острой (первые шесть недель) и фазы выздоровления (семь недель до второго исследовательского визита) COVID-19 соответственно. Тяжесть острой инфекции оценивали по «Шкале порядкового клинического прогрессирования/улучшения» Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) (https://www.who.int/publications/i/item/covid-19-Therapy-Trial-Synopsis). Одышку оценивали по модифицированной шкале одышки Совета медицинских исследований 43 . Участники, у которых были стойкие симптомы, связанные с COVID-19, были идентифицированы на основе хронической одышки или усталости, дефицита спортивных способностей и/или трех или более дополнительных долгосрочных симптомов, таких как постоянная необъяснимая лихорадка, боль в груди, новые появление сердечных осложнений, артралгии, нарушение концентрации внимания или остроты зрения, нарушение обоняния или вкуса, невропатия или кожные проявления 3,4 .Все участники Рокфеллеровского университета дали письменное информированное согласие перед участием в исследовании, и исследование проводилось в соответствии с надлежащей клинической практикой. Сбор и обработка клинических данных осуществлялись с использованием программного обеспечения iRIS от iMedRIS. Исследование проводилось с соблюдением всех соответствующих этических норм, а протокол исследований с участием людей был одобрен Институциональным наблюдательным советом (IRB) Рокфеллеровского университета.

    Когорта биопсии желудочно-кишечного тракта

    Чтобы определить, может ли SARS-CoV-2 сохраняться в желудочно-кишечном тракте, мы набрали когорту из 14 человек с предварительным диагнозом COVID-19 и выздоровлением от него.Приемлемыми участниками были взрослые в возрасте от 18 до 76 лет, у которых ранее был диагностирован SARS-CoV-2 с помощью RT-PCR или по сочетанию клинических симптомов, соответствующих COVID-19, плюс признаки сероконверсии, и они были представлены в гастроэнтерологические клиники Маунт. Синайская больница. Эндоскопические процедуры проводились при клинически показанных состояниях, как подробно описано в дополнительной таблице 7. Все участники не имели симптомов во время эндоскопических процедур и были отрицательными на SARS-CoV-2 с помощью ПЦР мазка из носа (порог цикла ( C t ) отсечка < 38).

    Сертифицированная CLIA лаборатория системы здравоохранения Mount Sinai утвердила разработанный в лаборатории мазок из носоглотки в режиме реального времени ОТ-ПЦР в соответствии с процедурой валидации Центра Уодсворта Департамента здравоохранения штата Нью-Йорк для SARS-CoV-2 44 . Информированное согласие было получено от всех участников. Исследования, связанные с биопсией, были одобрены Комитетом по этике Mount Sinai / IRB (IRB 16-0583, «Влияние вирусных инфекций и их лечение на иммунные клетки желудочно-кишечного тракта»).

    ПЦР-тест слюны на SARS-CoV-2

    Метод ПЦР на SARS-CoV-2 для образцов слюны был разработан, и его рабочие характеристики были определены Лабораторией клинической геномики Университета Рокфеллера. Этот тест, разработанный в лаборатории, был одобрен штатом Нью-Йорк в соответствии с разрешением на использование в чрезвычайных ситуациях для использования уполномоченными лабораториями. Слюну собирали в гуанидинтиоцианатный буфер, как описано ранее 45 . РНК экстрагировали либо на колонке (Qiagen QIAmp DSP Viral RNA Mini Kit, 61904), либо на магнитных шариках, как описано ранее 46 .Обратно транскрибированную кДНК амплифицировали с использованием праймеров и зондов, утвержденных Центрами по контролю и профилактике заболеваний или Лабораторией геномики персонализированной медицины Колумбийского университета, соответственно, и одобренных Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США в соответствии с разрешением на использование в чрезвычайных ситуациях. Вирусная РНК считалась обнаруженной, если C t для двух комбинаций вирусных праймеров и зондов было < 40.

    Обработка и хранение проб крови FCS и ДМСО.Образцы гепаринизированной плазмы и сыворотки делили на аликвоты и хранили при температуре -20 °C или ниже. Перед экспериментами аликвоты образцов плазмы инактивировали нагреванием (56 °С в течение 1 ч) и затем хранили при 4 °С.

    Высокопроизводительные автоматизированные серологические анализы

    Образцы плазмы от 80 из 87 участников были протестированы с помощью высокопроизводительных автоматизированных серологических анализов. Анализ Roche Elecsys на антитела к SARS-CoV-2 был проведен на Roche Cobas e411 (Roche Diagnostics). В анализе Elecsys anti-SARS-CoV-2 используется рекомбинантный белок, представляющий антиген N, для определения антител против SARS-CoV-2.Этот тест получил разрешение на использование в чрезвычайных ситуациях от Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США 6 . Анализы Pylon COVID-19 IgG и IgM использовались для измерения антител IgG и IgM в плазме против SARS-CoV-2 соответственно. Образцы плазмы анализировали на анализаторе Pylon 3D (ET HealthCare), как описано ранее 5 . Этот анализ был реализован клинически как тест, разработанный в лаборатории, в соответствии с правилами Департамента здравоохранения штата Нью-Йорк. Вкратце, анализ проводили с использованием унифицированной тест-полоски, содержащей лунки с предварительно дозированными реагентами.Реагент COVID-19 содержит биотинилированные рекомбинантные версии RBD S-белка SARS-CoV-2 и следовые количества белка N в качестве антигенов, которые связывают IgG и IgM соответственно. Пороговые значения для обоих анализов Pylon были определены с использованием среднего значения образцов без COVID-19 плюс 6 sd. Результаты выборки сообщают в виде индекса отсечки или значения индекса, которые были определены путем деления показаний прибора на испытуемый образец на показания прибора при отсечке.

    ELISA

    ELISA 47,48 для оценки связывания антител к SARS-CoV-2 N (Sino Biological 40588-V08B), RBD и дополнительные RBD проводили путем покрытия 96-луночных планшетов с высоким связыванием (Corning 3690) с 50 мкл на лунку 1 мкг мл раствора белка -1 в фосфатно-солевом буфере (PBS) в течение ночи при 4 °C.Планшеты промывали 6 раз промывочным буфером (1× PBS с 0,05% Tween-20 (Sigma-Aldrich)) и инкубировали со 170 мкл блокирующего буфера на лунку (1× PBS с 2% BSA и 0,05% Tween-20 (Sigma)). ) в течение 1 ч при комнатной температуре. Сразу после блокировки моноклональные антитела или образцы плазмы добавляли в PBS и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Образцы плазмы анализировали при исходном разведении 1:67 и 7 дополнительных трехкратных серийных разведениях. Моноклональные антитела тестировали в исходной концентрации 10 мкг мл -1 и 10 дополнительных четырехкратных серийных разведениях.Планшеты промывали 6 раз промывочным буфером, а затем инкубировали с вторичными антителами против IgG, IgM или IgA человека, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP) (Jackson Immuno Research 109-036-088 109-035-129 и Sigma A0295) в блокирующем буфере. в разведении 1:5000 (IgM и IgG) или 1:3000 (IgA). Планшеты проявляли добавлением субстрата HRP, TMB (ThermoFisher) в течение 10 мин (образцы плазмы) или 4 мин (моноклональные антитела), затем реакцию проявления останавливали добавлением 50 мкл 1 MH 2 SO 4 и абсорбцию измеряли при 450 нм с помощью устройства для чтения микропланшетов ELISA (FluoStar Omega, BMG Labtech) с программным обеспечением Omega и Omega MARS для анализа.Для образцов плазмы положительный контроль (плазма от участника COV72, разведенная в 66,6 раз и 7 дополнительных трехкратных серийных разведений в PBS) был добавлен в каждый планшет для анализа для проверки. Среднее значение его сигнала использовали для нормализации всех других значений на том же планшете с помощью программного обеспечения Excel перед расчетом AUC с использованием Prism v.8.4 (GraphPad). Для моноклональных антител EC 50 определяли с использованием четырехпараметрической нелинейной регрессии (GraphPad Prism v.8.4).

    Экспрессия белков RBD

    Векторы экспрессии млекопитающих, кодирующие RBD SARS-CoV-2 (GenBank MN985325.1; остатки белка S 319–539) и восемь дополнительных мутантных белков RBD (E484K, Q493R, R346S, N493K, N440K, V367F, A475V, S477N и V483A) с N-концевым сигнальным пептидом человеческого IL-2 или фосфатазы Mu были ранее описаны 90–116. 49 .

    Псевдотипированный репортерный вирус SARS-CoV-2

    Псевдотипированные частицы SARS-CoV-2 были созданы, как описано ранее 1,8 . Вкратце, клетки 293T трансфицировали pNL4-3ΔEnv-nanoluc и pSARS-CoV-2-S Δ19 . Для создания RBD-мутантных псевдовирусов использовали pSARS-CoV-2-S Δ19 , несущий одну из следующих шиповидных мутаций, вместо своего аналога дикого типа: Q493R, R346S или E484G 50 .Частицы собирали через 48 ч после трансфекции, фильтровали и хранили при -80°С.

    Анализ нейтрализации псевдотипированного вируса

    Четырехкратно разведенную плазму лиц, выздоравливающих от COVID-19, или моноклональные антитела инкубировали с псевдотипированным вирусом SARS-CoV-2 в течение 1 ч при 37 °C. Затем смесь инкубировали с клетками 293T ACE2 в течение 48 ч, после чего клетки промывали PBS и лизировали реагентом Luciferase Cell Culture Lysis 5× (Promega).Активность люциферазы Nanoluc в лизатах измеряли с использованием системы анализа люциферазы Nano-Glo (Promega) с навигатором Glomax (Promega). Полученные относительные единицы люминесценции нормализовали к единицам, полученным из клеток, инфицированных псевдотипированным вирусом SARS-CoV-2, в отсутствие плазмы или моноклональных антител. Полумаксимальную ингибирующую концентрацию для плазмы (NT 50 ) или моноклональных антител (IC 50 ) определяли с использованием четырехпараметрической нелинейной регрессии (метод регрессии наименьших квадратов без взвешивания; ограничения: верх = 1, низ = 0) ( Графпад Приз).

    Многомерный анализ данных проточной цитометрии

    Многомерный анализ данных viSNE и FlowSOM и визуализация данных проточной цитометрии выполнялись на В-клетках с использованием платформы Cytobank (https://cytobank.org). Анализ viSNE был выполнен с использованием равной выборки 4893 ячеек из каждого файла FCS с 75 00 итерациями, степенью недоумения 30 и тета 0,5. Для создания карт viSNE использовали следующие маркеры: IgA, CD305, TGFb-RII, CD138, CD10, CD272, IgD, CD24, CD21, CD95, HLA-DR, IgG, CD279, CD38, IgM, CD274, CD27, CD23, CXCR5, CD32, CD86, CD40, CD85j, CD11c и CXCR3.Полученные карты viSNE были загружены в алгоритм кластеризации FlowSOM 51 . Самоорганизующаяся карта была сгенерирована с использованием иерархической консенсусной кластеризации на t -распределенных стохастических осях встраивания соседей.

    Визуализация тепловой карты

    Тепловые карты для отображения в масштабе столбцов z — баллы средней интенсивности флуоресценции для отдельных кластеров FlowSOM в соответствии с выражением маркера были созданы с использованием тепловой карты R-функции.

    Биотинилирование вирусного белка для использования в проточной цитометрии

    Очищенный и помеченный Avi RBD SARS-CoV-2 был биотинилирован с использованием набора Biotin-Protein Ligase-BIRA в соответствии с инструкциями производителя (Avidity), как описано ранее 1 .Овальбумин (Sigma, A5503-1G) биотинилировали с использованием набора EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotinylation в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Scientific). Биотинилированный овальбумин конъюгировали со стрептавидином-BV711 (BD biosciences, 563262), а RBD — со стрептавидином-PE (BD Biosciences, 554061) и стрептавидином-AF647 (Biolegend, 405237) 1 .

    Сортировка одиночных клеток с помощью проточной цитометрии

    Сортировка одиночных клеток с помощью проточной цитометрии была описана ранее 1 . Вкратце, мононуклеарные клетки периферической крови обогащали В-клетками путем отрицательной селекции с использованием набора для выделения пан-В-клеток в соответствии с инструкциями производителя (Miltenyi Biotec, 130-101-638).Обогащенные В-клетки инкубировали в буфере FACS (1× PBS, 2% FCS, 1 мМ ЭДТА) со следующими античеловеческими антителами (все в разведении 1:200): анти-CD20-PECy7 (BD Biosciences, 335793), анти-CD3-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0037-41), анти-CD8-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0086-42), анти-CD16-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0168) -41), анти-CD14-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0149-42), а также Zombie NIR (BioLegend, 423105) и меченные флуорофором RBD и овальбумин (Ova) в течение 30 мин на льду. Отдельные CD3 CD8 CD14 CD16 CD20 + Ova RBD–PE + RBD–AF696 B–9–луночные планшеты, содержащие 9 лунок 4 мкл лизирующего буфера (0.5 × PBS, 10 мМ DTT, 3000 единиц на мл ингибиторов рибонуклеазы РНКазина (Promega, N2615)) на лунку с использованием программного обеспечения FACS Aria III и FACSDiva (Becton Dickinson) для сбора данных и FlowJo для анализа. Отсортированные клетки замораживали на сухом льду, а затем хранили при -80 °С или сразу использовали для последующей обратной транскрипции РНК.

    Секвенирование антител, клонирование и экспрессия

    Антитела были идентифицированы и секвенированы, как описано ранее 1 . Вкратце, РНК из отдельных клеток подвергали обратной транскрипции (SuperScript III Reverse Transcriptase, Invitrogen, 18080-044), а кДНК хранили при температуре -20 °C или использовали для последующей амплификации вариабельных генов IGH, IGL и IGK с помощью вложенной ПЦР и Секвенирование по Сэнгеру.Анализ последовательности проводили с помощью MacVector. Ампликоны из первой реакции ПЦР использовали в качестве матриц для независимого от последовательности и лигирования клонирования в векторы экспрессии антител. Рекомбинантные моноклональные антитела и Fab-фрагменты получали и очищали, как описано ранее 1 .

    Компьютерный анализ последовательностей антител

    Последовательности антител были усечены на основе качества и аннотированы с использованием Igblastn v.1.14. с системой разграничения доменов IMGT.Аннотирование выполнялось систематически с использованием инструментария Change-O v.0.4.540 52 . Тяжелые и легкие цепи, полученные из одной и той же клетки, были объединены в пары, и клонотипы были назначены на основе их генов V и J с использованием собственных сценариев R и Perl (расширенные данные, рис. 5). Все сценарии и данные, используемые для обработки последовательностей антител, общедоступны на GitHub (https://github.com/stratust/igpipeline).

    Распределение частот генов V человека в антителах против SARS-CoV-2 из этого исследования сравнивали с 131 284 220 ранее сгенерированными последовательностями IgH и IgL 53 и загруженными из cAb-Rep 54 (база данных общих BCR человека). клонотипы доступны по адресу https://cab-rep.c2b2.columbia.edu/). На основе 82 различных генов V, которые составляют 1703 проанализированных последовательностей из репертуара иммуноглобулинов трех участников, присутствующих в этом исследовании, мы выбрали последовательности IgH и IgL из базы данных, которые частично кодируются одними и теми же генами V, и подсчитали их. по постоянной области. Частоты, показанные на (расширенные данные, рис. 5), относятся к анализируемому источнику и изотипу. Мы использовали двусторонний биномиальный тест, чтобы проверить, различается ли количество последовательностей, принадлежащих конкретному гену IGHV или IGLV в репертуаре, в зависимости от частоты одного и того же гена IGV в базе данных.Скорректированные значения P были рассчитаны с использованием поправки на частоту ложных открытий. На рис. расширенных данных. 5, 6 звездочками отмечены достоверные различия (* P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001, **** P < 0,0001).

    Соматическая гипермутация нуклеотидов и длина CDR3 определялись с использованием собственных сценариев R и Perl. Для соматических гипермутаций нуклеотидные последовательности IGHV и IGLV выравнивали с их ближайшими зародышевыми линиями с использованием Igblastn, и количество различий считали нуклеотидными мутациями.Средние мутации для генов V рассчитывали путем деления суммы всех нуклеотидных мутаций у всех участников на количество последовательностей, использованных для анализа. Для расчета показателей гидрофобности 55 по шкале GRAVY мы использовали шкалу Гидрофобности Гая HR, основанную на свободной энергии переноса (ккал на моль) 56 , реализованную пакетом R Peptides (https://CRAN.R-project.org/). пакет = пептиды). Мы использовали 532 аминокислотные последовательности CDR3 тяжелой цепи из этого исследования и 22 654 256 последовательностей CDR3 IGH из общедоступной базы данных последовательностей рецепторов В-клеток памяти 57 .Тест Шапиро-Уилка использовался для определения нормального распределения баллов GRAVY. Оценки GRAVY для всех 532 аминокислотных последовательностей IGH CDR3 из этого исследования использовали для выполнения теста, и 5000 оценок GRAVY для последовательностей из общедоступной базы данных были выбраны случайным образом. Значения Shapiro-Wilk P составили 6,896 × 10 -3 и 2,217 × 10 -6 для последовательностей из этого исследования и общедоступной базы данных, соответственно, что указывает на то, что данные не были нормально распределены.Поэтому мы использовали двусторонний непараметрический критерий Уилкоксона для сравнения образцов, который показал разницу в распределении гидрофобности ( P  = 5 × 10 -6 ) (расширенные данные, рис. 6h).

    Тепловая карта log 2 -трансформированных относительных кратных изменений EC 50 по сравнению с указанными мутантами RBD для пар клонов антител, полученных через 1,3 и 6,2 месяца (рис. 3e, расширенные данные, рис. 7k), была создана с помощью R пакет pheatmap (https://github.com/raivokolde/pheatmap) с использованием евклидова расстояния и Уорда.2 метод кластеризации.

    Биопсия и иммунофлуоресценция

    Эндоскопически полученные биоптаты слизистой оболочки фиксировали формалином и заливали парафином. Срезы (5 мкм) вырезали, депарафинизировали в ксилоле и повторно гидратировали в спирте и PBS. Индуцированный нагреванием поиск эпитопа выполняли в растворе для извлечения мишени (DAKO, S1699) с использованием имеющейся в продаже скороварки. Затем предметные стекла охлаждали до комнатной температуры, промывали в PBS и пермеабилизировали в течение 30 минут в 0,1% Triton X-100 в PBS. Неспецифическое связывание блокировали 10% козьей сывороткой (Invitrogen, 50062Z) в течение 1 ч при комнатной температуре.Затем срезы инкубировали с комбинацией первичных антител, разведенных в блокирующем растворе, в течение ночи при 4 °C. Предметные стекла промывали 3 раза в PBS, а затем инкубировали со вторичным антителом и DAPI (1 мкг мл -1 ) в течение 1 ч при комнатной температуре. Срезы трижды промывали в PBS, а затем монтировали с помощью Fluoromount-G (Electron Microscopy Sciences, 1798425). Контроли включали исключение первичных антител (без первичного контроля 995) или замену первичных антител нереактивными антителами того же изотипа (изотипический контроль).Для визуализации и изображения ткани использовали микроскоп Nikon Eclipse Ni и цифровую зеркальную камеру (Nikon, DS-Qi2).

    Антитело, используемое для окрашивания срезов на белок N, было получено у кроликов против N-белка SARS-CoV и обладает перекрестной реактивностью с белком N SARS-CoV-2 58 (дополнительная таблица 8).

    ПЦР на SARS-CoV-2 из биоптатов кишечника

    Чтобы определить, присутствует ли РНК SARS-CoV-2 в желудочно-кишечном тракте, мы выделили РНК из биоптатов слизистой оболочки, полученных эндоскопически, с использованием набора минипреп Direct-zol (Zymo research, R2050).Обратно транскрибированную кДНК амплифицировали с использованием набора 2019-nCov Ruo Kit (IDT) для обнаружения геномной РНК вирусного нуклеокапсида. Амплификацию субгеномной нуклеокапсидной РНК проводили с использованием следующих праймеров и зондов: sgLeadSARSCov2_F 5′-CGATCTCTTGTAGATCTGTTTCTC-3′ 28 , wtN_R4 5′-GGTGAACCAAGACGCAGTAT-3′, wtN_P4 5′-/56-FAM/TAACGBGAGAA/3GCIAGTGTG/TG /-3′.

    Количественную ПЦР проводили с использованием набора для ПЦР зонда QuantTect (Qiagen, 204345) при следующих условиях: 95°C 15 с, 95°C 15 с и 60°C 1 мин с использованием системы ПЦР в реальном времени Applied Biosystem QuantStudio 6 Flex.Вирусная РНК считалась обнаруженной, если C t для комбинаций вирусных праймеров и зондов было < 40. Образцы из положительных лунок очищали на колонке, а наличие последовательностей N1 дополнительно подтверждали секвенированием по Сэнгеру.

    Обнаружение РНК SARS-CoV-2 с помощью лигирования близлежащих зондов

    Зонды были разработаны с гомологией 20–25 нуклеотидов с геномной РНК SARS-CoV-2. Зонды оценивали с помощью NCBI BLAST, чтобы исключить нецелевое связывание с другими клеточными транскриптами.IDT OligoAnalyzer (Integrated DNA Technologies) использовали для идентификации пар зондов со сходными термодинамическими свойствами; температура плавления 45–60 °C, содержание GC 40–55 % и низкая самокомплементарность. 3′-конец каждого из зондов, используемых для усиления сигнала лигирования близости, разработан с частично комплементарной последовательностью остову длиной 61 п.н. и частично вставке 21 п.н. (дополнительная таблица 8). Зонды для одномолекулярной флуоресцентной гибридизации in situ (smFISH) были разработаны с комплементарным 3′-концом зонду для обнаружения биотина (дополнительная таблица 8).

    Образцы, залитые парафином, были срезаны по 10 мкм. Срезы депарафинизировали 100% ксилолом, 5 мин при комнатной температуре, дважды. Предметные стекла ополаскивали в 100% этаноле, 1 мин при комнатной температуре, дважды и сушили на воздухе. Эндогенную пероксидазную активность устраняли обработкой образцов 0,3% перекисью водорода в течение 10 мин при комнатной температуре с последующей промывкой водой, обработанной ДЭПК. Образцы инкубировали 15 мин при 95–100°С в растворе для извлечения антигена (ACDBio), промывали водой, обработанной ДЭПК, и обезвоживали в 100% этаноле, 3 мин при комнатной температуре и сушили на воздухе.Срезы ткани подвергали пермеабилизации в течение 30 минут при 40°C с использованием раствора протеазы RNAscope plus (ACDBio) и промывали водой, обработанной DEPC.

    Гибридизацию проводили в течение ночи при 40 °C в буфере на основе обработанной DEPC воды, содержащей 2×SSC, 20% формамида (Thermo Fischer Scientific), 2,5% (об./об.) поливинилсульфоновой кислоты, 20 мМ рибонуклеозид-ванадилового комплекса (New England Biolabs), 40 ед. мл −1 РНКазин (Promega), 0,1 % (об./об.) Tween 20 (Sigma Aldrich), 100 мкг мл −1 ДНК спермы лосося (Thermo Fisher Scientific), 100 мкг мл -1 дрожжевой РНК (Thermo Fisher Scientific).Пробы ДНК, растворенные в воде, обработанной DEPC, добавляли в конечной концентрации 100 нМ (Integrated DNA Technologies). Образцы быстро промывали и инкубировали в буфере, содержащем 2× SSC, 20% формамид, 40 ЕД мл -1 РНКазина при 40 °C, а затем промывали четыре раза (по 5 мин каждый) в промывочном буфере, PBS, 0,1% (v /v) Tween 20 и 4 ЕД мл -1 RNasin (Promega). Затем предметные стекла инкубировали со 100 нМ олигонуклеотидов вставки и скелета в PBS, 1× SSC, 0,1% (об./об.) Tween 20, 100 мкг мл -1 ДНК спермы лосося (Thermo Fisher Scientific), 100 мкг мл -1 дрожжевая РНК (Thermo Fisher Scientific), 40 ед. мл -1 РНКазин при 37 °C.После четырех промывок ткани инкубировали при 37°С с 0,1 ед. мкл -1 ДНК-лигазы Т4 (New England Biolabs) в 50 мМ Трис-HCl, 10 мМ MgCl 2 , 1 мМ АТФ, 1 мМ ДТТ, 250 мкг мл -1 БСА, 0,05% Твин 20, 40 ЕД мл -1 РНКазин с последующей инкубацией с 0,1 ЕД мкл -1 ДНК-полимераза phi29 в 50 мМ Трис-HCl, 10 мМ MgCl 5 ,

    10 мМ (NH 4 ) 2 SO 4 , 250 мкМ dNTP, 1 мМ DTT, 0,05% твин 20, 40 ед. мл -1 РНКазин, рН 7.5 при 30 °С. Предметные стекла промывали и блокировали эндогенный биотин с помощью набора для блокирования авидина/биотина (Vector Laboratories) в соответствии с инструкциями производителя. Ампликоны циркулирующего цикла идентифицировали с использованием ДНК-зонда, меченного биотином, в концентрации 5 нМ при 37 °C в PBS, 1× SSC, 0,1% Tween 20, 100 мкг мл -1 ДНК спермы лосося, 100 мкг мл — 1 РНК дрожжей. После промывки образцы инкубировали со стрептавидином-HRP, разбавленным 1:100 (Thermo Fisher Scientific) в PBS, 60 мин при комнатной температуре с последующей промывкой.Флуоресцентное мечение выполняли с помощью Alexa Fluor 647 Tyramide SuperBoostKit (Thermo Fischer Scientific) в соответствии с инструкциями производителя. Hoechst 33342 использовали для контрастного окрашивания ядер (Thermo Fischer Scientific), а образцы помещали в золотой антифейд ProLong (Thermo Fischer Scientific).

    Обнаружение РНК SARS-CoV-2 с помощью smFISH

    Гибридизацию проводили в течение ночи при 40 °C в буфере на основе обработанной DEPC воды, содержащей 2× SSC, 20% формамида (Thermo Fischer Scientific), 2.5 % (об./об.) поливинилсульфоновой кислоты, 20 мМ рибонуклеозид-ванадилового комплекса (New England Biolabs), 40 ед. мл -1 РНКазин (Promega), 0,1 % (об./об.) Tween 20 (Sigma Aldrich), 100 мкг мл -1 ДНК спермы лосося (Thermo Fisher Scientific), 100 мкг мл -1 РНК дрожжей (Thermo Fisher Scientific). Пробы ДНК, растворенные в воде, обработанной DEPC, добавляли в конечной концентрации 10 нМ (Integrated DNA Technologies). Образцы быстро промывали и инкубировали в буфере, содержащем 2× SSC, 20% формамида, 40 ЕД мл -1 РНКазина при 40 °C, а затем четыре раза промывали в промывочном буфере, PBS, 0.1% (об./об.) Tween 20 и 4 ЕД мл -1 RNasin (Promega). Образцы промывали и блокировали эндогенный биотин с помощью набора для блокирования авидина/биотина (Vector Laboratories) в соответствии с инструкциями производителя. Предметные стекла инкубировали с меченым биотином ДНК-зондом в концентрации 10 нМ при 37 °C в PBS, 1× SSC, 0,1% Tween 20, 100 мкг мл -1 ДНК спермы лосося, 100 мкг мл -1 РНК дрожжей. После промывки образцы инкубировали со стрептавидином-HRP, разбавленным 1:100 (Thermo Fisher Scientific) в PBS, 60 мин при комнатной температуре с последующей промывкой.Образцы были помечены с использованием субстрата ImmPACT-DAB, контрастно окрашены гематоксилином QS и помещены в монтажную среду VectaMount AQ (Vector Laboratories) в соответствии с инструкциями производителя.

    Представление данных

    Расширенные данные Рисунки представлены в Adobe Illustrator 2020.

    Лыжный отчет | Tacoma News Tribune

    Аризона Сноубоул — Среда 5:20 машина подготовлена ​​46 — 46 база 42 из 48 трасс Открыто 88%, 8 из 8 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Sunrise Park — среда 6:31 машина подготовлена ​​38 — 38 база 45 из 65 трасс 69% открыто, 4 из 6 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Медвежья гора — Среда 7:14a 4 новые машины подготовлены 42 — 60 база 23 из 30 трасс, 77% открыты, 6 из 12 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 8:30-16:00.

    Медвежья долина — Среда 5:35 машинная обработка 50 — 50 база 57 из 75 трасс Открыто 76%, 4 из 10 подъемников, Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Boreal — Ср 5:41a машина подготовлена ​​138 — 138 база 34 из 35 трасс, 97% открыты 5 из 8 подъемников, СМ Пн-Пт: 9a-8p; Сб/Вс: 9a-8p.

    China Peak — Ср. Открытие 17.02 Упакованный порошок, машинная обработка 85–85 базис Пн/Чт/Пт: 9a–4p; Сб/Вс: 9a-4p; Открыто Чт-Пн.

    Dodge Ridge — ср 9:26 машина подготовлена ​​28 — 31 база 64 из 67 трасс 97% открытых, 840 акров, 7 из 12 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Лыжный ранчо Доннер — Среда 5:54a машинная обработка 45-45 база 75% открыто 6 из 8 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Heavenly — Среда 7:15 1 новая машина подготовлена ​​47–77 база 97 из 97 трасс Открыто на 99%, 7 миль, 4752 акра, 23 из 29 подъемников, Пн-Пт: 9a-4p Сб/Вс: 8:30- 4п; 21 февраля: владелец пропуска, понедельник, 8:30–16:00.

    Хоумвуд — Среда 6:31 35-75 база 67 из 67 трасс 100% открыто, 1260 акров, 5 из 8 подъемников, Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Июнь — Среда 7:20 машина подготовила 65 — 65 базу 41 из 43 трасс, 95% открыты 6 из 6 подъемников, пн-пт: 8a-4p; Сб/Вс: 8a-4p.

    Кирквуд — Среда 7:20 2 новые машины подготовлены 60-63 базы 89 из 90 трасс 100% открыты, 4 мили, 2300 акров, 13 из 13 подъемников, Пн-Пт: 9a-4p Сб/Вс: 9a-4p.

    Mammoth — Среда 7:20 2 новых упакованных порошковых машины подготовлены 68 ​​- 130 база 154 из 154 трасс 100% открыты, 3500 акров, 20 из 25 подъемников, пн-пт: 8:30-4p, сб/вс: 8:30 -4р.

    Mountain High — Среда 7:30 3–5 новых трасс, обработанных 12–40 баз 33 из 59 трасс, 56% открытых, 8 из 14 подъемников, СМ Пн/Вт: 9:00-4:00 Ср-Пт: 9:00-10:00 Сб -Вс: 8:30-10:00. 17.02 : 9а-7р; Сб: 9a-6p Вс: 9a-4p.

    Northstar — Среда 6:34 машинный уход 30 — 81 база 97 из 100 трасс Открыто 97%, 3016 акров, 14 из 20 подъемников, пн-пт: 8:30a-4p; Сб/Вс: 8:30-16:00.

    Палисейдс Тахо — Среда 6:56 машинный уход 46 — 96 база 151 из 270 трасс 56% открытых, 5500 акров, 26 из 42 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Sierra at Tahoe — Скоро открытие снежных видов спорта

    Snow Summit — Среда 8:51a 4 новых базы 60-60 26 из 32 трасс Открыто 84%, 8 из 15 подъемников, sm Пн-Пт: 8:30a-4p; Сб/Вс: 8:30-16:00.

    Снежная долина — Ср 7:04a 6–8 новая машина подготовлена ​​24–40 база 19 из 30 трасс, 63% открыты, 4 из 12 подъемников, Пн-Чт: 9a-4p Пт: 9a-8p; Сб: 8:30–20:00 Вс: 8:30–16:00.

    Сода-Спрингс — Ср. Открытие 17.02. Упакованный порошок, машинная обработка 138 — 138 база Пн.-Пт.: 9:30 — 16:00; Сб/Вс: 9:30-16:00; Открыто Чт-Пн.

    Sugar Bowl — Среда 5:56утрамбованная машина подготовлена ​​49 — 94 базы 102 из 103 трасс 99% открыты, 9 из 13 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс 9a-4p.

    Тахо Доннер — Среда 6:08 1 новая машина подготовлена ​​45 — 45 база 15 из 15 трасс 100% открыты, 4 из 5 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Горнолыжный курорт Йосемити — Работает, нет данных

    Даймонд Пик — Среда 5:45a 2 новые машины подготовлены 40-90 база 31 из 31 трасс 100% открыто, 4 из 7 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Ли-Каньон — Среда 7:21 машина подготовлена ​​34 — 34 база 26 из 27 трасс Открыто 96%, 3 из 3 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Маунт-Роуз — Среда, 6:40, обработано машиной 36–72 базы, 51 из 65 трасс, 78 % открытых 1200 акров, 7 из 8 подъемников, пн–пт: 9–4 дня; Сб/Вс: 9a-4p.

    Bogus Basin — Среда 5:33 Упакованный порошок Машина подготовлена ​​46 — 46 база 78 из 82 трасс 7 из 10 подъемников, открыто 95%, Пн-Пт: 10a-10p; Сб/Вс: 9:00-10:00.

    Brundage — Среда 5:05 1 новая машина подготовлена ​​41 — 65 база 67 из 67 трасс 6 из 6 подъемников, 100% открыт, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Kelly Canyon — Ср Работает нет данных 24-24 база Пн-Чт: 12:30-20:30 Пт: 10:00-20:30 Сб: 10:00-20:30 Вс: 10:00-16:30.

    Lookout Pass — Среда 9:33 4 новых упакованных порошковых машины подготовлены 72 — 92 база 38 из 38 трасс 20 миль, 560 акров, 4 из 4 подъемников, 100% открыт, Пн-Пт: 9a-4p Сб/Вс: 8 :30a-4p; 21 февраля: 8:30–16:00.

    Magic Mountain — Ср Открытие 17 февраля 60–60 базис Чт/Пт: 9:00–4:00 Сб/Вс: 9:00–4:00; Открыто чт-вс.

    Пеббл-Крик — Ср 7:29 2 новые машины подготовлены 20 — 38 базы 20 из 30 трасс 3 из 3 подъемников, 67% открыт, Пн-Чт: 9a-4p Пт: 9a-9:30p; Сб: 9:00-21:30 Вс: 9:00-16:00.

    Pomerelle — Ср. 7:31 2 новые машины подготовлены 58 — 58 базы 31 из 31 трасс 3 из 3 подъемников, 100% открыто, Пн-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Schweitzer — Среда 11:48 Ухоженная машина для упаковывания порошка 54 — 76 база 92 из 92 трасс, 2900 акров 8 из 10 подъемников, 100% открыт, Пн-Пт: 9a-3:30p; Сб/Вс: 8a-7p.

    Серебряная гора — Среда 5:50 2 новых упакованных порошковых машины подготовлены 69 — 69 база 75 из 80 трасс 6 из 7 подъемников, открыто 94%, Пн-Пт: 9:00-15:30; Сб/Вс: 9a-4p.

    Солнечная долина — среда 5:48 машина подготовлена ​​52 — 82 база 116 из 128 трасс 2542 акра, 15 из 17 подъемников, 91% открыт, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Тамарак — Среда 8:05 утра Ухоженная машина для упаковывания порошка 35 — 61 база 48 из 48 трасс, 1100 акров 5 из 6 подъемников, 100% открыт, Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Энтони Лейкс — Ср Открытие 17.02 машинная обработка База 64–64 Чт/Пт: 9a–4p Сб/Вс: 9a–4p; Открыто чт-вс.

    Cooper Spur — Ср Открытие 02/18 машинная обработка 13–13 база Пт: 4–8 часов Сб/Вс: 9–4 часа; Открыто Пт-Вс.

    Худу — ср. 5:22 машина подготовлена ​​58 — 58 база 29 из 40 трасс, 5 из 5 подъемников открыты на 73%, ср-пт: 9a-9p; Сб: 9a-9 Вс: 9a-4p; 21 февраля: 9a-4p Открыто ср-вс.

    Mt Ashland — Ср Открытие 17.02 машинная обработка 32–36 база Пн, Чт-Пт: 9:00-9:00 Сб/Вс: 9:00-4:00; Открыто Чт-Пн.

    Маунт Бакалавр — Ср 7:12 машина подготовлена ​​67 — 67 база 118 из 121 трасс 10 из 15 подъемников, открыто 98%, Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Mt Hood Meadows — Среда 5:05a 1 новая уложенная порошковая машина подготовлена ​​84 — 100 база 80 из 87 трасс 7 из 12 подъемников, открыто 92%, Пн/Вт: 9a-4p; Ср-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Mt Hood Skibowl — Среда 7:03a 3 новые машины подготовлены База 45–64 5 из 8 подъемников Открыты на 63%, Пн-Пт: 3–10 часов; Сб/Вс: 9:00-10:00.

    Timberline — Среда 7:05 10 новых пороховых машин подготовлены База 99 — 99 9 из 9 подъемников 100% открыты, Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Перевал Уилламетт — Ср. 6:09 4 новых машины подготовлены База 60–60 2 из 6 подъемников Открыто 33%, Ср-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p; Открыто ср-вс.

    49 градусов северной широты — ср. Открытие 18.02 упакованный порошок машинная обработка 63–81 база Пн/Вт/Пт: 9a–4p; Сб/Вс: 9a-4p; Открыто пт-вт.

    Badger Mountain — Ср Открыто 19.02 машинная обработка 32 — 32 база Сб/Вс: 11a-4p Открыто Сб/Вс.

    Блювуд — Ср 5:14a 5 новых машин подготовлено 43 — 48 база Ср-Пт: 9a-4p Сб/Вс: 9a-4p; 21 февраля: 9a-4p Открыто ср-вс.

    Хрустальная гора — ср. 12:22 переменная машинная обработка 70–70 база 57 из 85 трасс 9 из 11 подъемников, 67% открыто, пн-чт: 9:00–4:00, пт: 8:30–8:00; Сб/Вс: 8:30-20:00.

    Loup Loup Ski Bowl — открытие уточняется Ср/Пт: 9:00–15:45 Сб/Вс: 9:00–15:45; Открыто ср/пт-вс.

    Mission Ridge — Ср. Сб: 9a-9p Вс: 9a-4p.

    Mt Baker — среда 5:14 1 новая машина подготовлена ​​98 — 121 база 38 из 38 трасс 7 из 8 подъемников, 100% открыт, пн-пт: 9a-15:30; Сб/Вс: 9:00-15:30.

    Маунт Спокан — Среда 5:47 машина подготовлена ​​46 — 60 база 52 из 58 трасс 6 из 6 подъемников, открыто 90%, пн-вт: 9a-4p; Ср-Пт: 9a-9p; Сб: 9a-9p Вс: 9a-4p.

    Стивенс-Пасс — Ср. Сб/Вс: 9:00-10:00.

    Вершина в Сноквалми — среда 7:09 5 новых машин подготовлены 68 ​​— 68 базы 25 из 83 трасс, 4 из 26 подъемников, открыто 30%, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Вершина в Snoqualmie Alpental — ср. 7:21 машина подготовлена ​​84 — 117 база 18 из 24 трасс, 2 из 5 подъемников, открыто 75%, вт-пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-4p; Открыто вт-вс.

    White Pass — Ср. Сб/Вс: 8:45–16:00.

    Apex Mountain — ср 1:48 2 новые машины подготовлены 64 — 64 базы 79 из 80 трасс открыты на 99%, 4 из 4 подъемников Пн-Чт: 9:00-15:30 Пт: 9:00-9:00; Сб: 9:00-9:00 Вс: 9:00-15:30.

    Лысая гора — Ср Открыто 17.02 машинная обработка 51 — 51 база 83% Открыто Пн/Чт: 9:00-15:30; Сб/Вс: 9:00-15:30; Открыто Чт-Пн.

    Big White — Среда 4:00 1 новая машина подготовлена ​​62 — 62 база 101 из 119 трасс Открыто 85%, 12 из 15 подъемников Пн-Пт: 7:45a-8p; Сб/Вс: 7:45–20:00.

    Кипарисовая гора — ср 11:34 машина подготовлена ​​102 — 102 база 30 из 53 трасс 57% открыто, 6 из 9 подъемников, пн-пт: 9а-10п; Сб/Вс: 9:00-10:00.

    Хот-Спрингс Fairmont — среда 1:54 машинная обработка 22 — 22 базы 12 из 14 трасс открыты на 86%, 3 из 3 подъемников пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Fernie Alpine — Среда 8:13a 1 новая переменная машина подготовлена ​​73 — 104 базы 112 из 142 трасс 79% открыты, 9 из 10 подъемников Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Grouse Mountain — ср 11:37 машина подготовлена ​​83 — 110 база 31 из 33 трасс 94% открыто, 4 из 5 подъемников, пн-чт: 9a-9p пт: 9a-10p; Сб: 8:00-10:00 Вс: 8:00-9:00.

    Гудзонов залив — Ср. Сб/Вс: 9:30-16:00; 21 февраля: 9:30–16:00 Открыто ср–вс.

    Kicking Horse — ср. 3:01a 1 новая упакованная порошковая машина подготовлена ​​81 — 81 база 86 из 129 трасс 67% открыто пн-пт: 10a-3p; Сб: 9:00-19:00 Вс: 9:00-15:30.

    Кимберли — Ср. Сб: 9:00-20:30 Вс: 9:00-16:20.

    Last Frontier Heli Bell 2 — Ср 1:56a 2 новых пороха 136 — 136 база Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Last Frontier Heli Ripley Creek — ср. 1:57a порошковый 157 — база 157 пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Manning Park Resort — Среда 5:31 1 новая машина подготовлена ​​42–75 база 25 из 34 трасс, 74% открыты, 2 из 4 подъемников Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Mount Seymour — среда 2:02 машинная обработка 80–110 баз 21 из 40 трасс 53% открытых, 4 из 5 подъемников Пн-Пт: 9:30–9:30; Сб/Вс: 8:30-9:30.

    Маунт Вашингтон Альпийский курорт — ср. 6:49 переменная машинная обработка 45–45 база 68 из 81 трассы, 84% открыты, 8 из 10 подъемников -9р.

    Панорама Маунтин — Ср 6:00упакованный порошок машинная обработка 28 — 52 базы 135 из 135 трасс 100% открыты, 10 из 10 подъемников Пн-Пт: 9а-4п; Сб/Вс: 9a-4p.

    Powder King — Ср Открытие 17.02 Машинная обработка 43 — 124 базы 37 из 37 трасс 100% открыты, 1 из 3 подъемников Пн/Чт/Пт: 9a-3p; Сб/Вс: 9:00-15:30 Открыто с четверга по понедельник.

    RED Mountain Resort — Среда 5:05 утра Ухоженная машина для порошка 21–55 база 110 из 119 трасс Открыто 92%, 3000 акров, 8 из 8 подъемников Пн-Ср; 9a-3p Чт: 9a-3p/6p-9p Пт: 9a-3p; Сб/Вс: 9a-3p.

    Гора Ревелстоук — Ср. 2:06 2 новые машины подготовлены База 93 — 93 42 из 42 трасс, 100% открыта, 5 из 5 подъемников Пн-Пт: 8:30a-3p; Сб/Вс: 8:30-15:00.

    Sasquatch Mountain Resort — Среда 4:05 3 новые машины подготовлены 78 — 78 базы 35 из 35 трасс, 100% открыты, 4 из 5 подъемников Пн-Чт: 9a-4p Пт: 9a-8p; Сб: 9a-8p Вс: 9a-4p.

    SilverStar — Среда 4:11a 3 новых упакованных порошковых машины подготовлены 51-65 базы 123 из 133 трасс 92% открыты, 10 из 11 подъемников Пн-Чт: 8:30-15:30 Пт: 8:30-20:30 Сб: 8:30–20:30 Вс: 8:30–15:30.

    Sun Peaks — среда 4:41 2 новые машины подготовлены База 59–75 137 из 137 трасс открыты на 100%, 11 из 13 подъемников Пн-Пт: 8:30–15:30; Сб/Вс: 8:30–15:30.

    Уистлер Блэккомб — Среда 6:07 набитая машина ухоженная 91 — 91 база 239 из 240 трасс 99% открытых, 8171 акров, 24 из 37 подъемников, пн-пт: 8:30a-3p; Сб/Вс: 8:30-15:00.

    Уайтуотер — среда 5:45 машинная обработка 95 — 95 база 82 из 82 трасс, 100% открыты 4 из 4 подъемников пн-пт: 9a-15:30; Сб/Вс: 9:00-15:30.

    Duck Mountain — Ср Открытие 18.02 машинная обработка 8–8 база Пт: 9a–4p Сб/Вс: 9a–4p; Открыто Пт-Вс.

    Горнолыжный курорт Асессиппи — Ср. 7p Сб: 9:30–19:00 Вс: 9:30–16:30.

    Falcon Ridge — Ср. Открытие 19 февраля 12–12, сб/вс: 10:30–16:30; Открыто Сб/Вс.

    Bromont — ср 5:57 машинная обработка 35 — 35 база 49 из 141 трасс, 88% открыты 3 из 9 подъемников Пн-Чт: 8:30-10:00 Пт: 8:30-22:30; Сб: 8:30-22:30 Вс: 8:30-22:00.

    Кэмп Форчун — Ср. 6:00 машинная обработка 41 — 41 база 17 из 25 трасс, 68% открыты 5 из 6 подъемников, пн-пт: 9a-9p; Сб: 9a-9p Вс: 9a-7p.

    Le Massif — Ср. Сб/Вс: 8:30–15:30.

    Mont Belu — Ср. Сб/Вс: 9:30-16:00 Открыто Ср-Вс.

    Монблан — Среда 6:05 машинная обработка 51 — 51 база 42 из 42 трасс, 100% открыто 6 из 7 подъемников Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 8:30-16:00.

    Mont Cascades — среда 6:07 машинная обработка 35-35 база 14 из 20 трасс открыты на 70%, 4 из 5 подъемников пн-пт: 10a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Монт-Глисон — Ср. Сб: 9:00-21:30 Вс: 10:00-16:00.

    Mont Habitant — ср 6:17 машина подготовлена ​​31 — 31 база 11 из 11 трасс 100% открыты, 2 из 3 подъемников Пн: 9a-4p Вт-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 8:30-21:00.

    Монт-Орфорд — ср. 6:21 1 новая машина подготовлена ​​35–35 база 38 из 61 трасс Открыто 98%, 6 из 7 подъемников Пн-Пт: 8:30–4п; Сб/Вс: 8:30-16:00.

    Мон-Риго — Ср 6:23 машинная обработка 31 — 31 база 15 из 15 трасс, 100% открыто 2 из 2 подъемников Пн-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Mont Sainte Anne — среда 6:20 машинная обработка 14–26 баз 70 из 71 трасс Открыто 99%, 45 миль, 528 акров, 6 из 9 подъемников Пн-Пт: 9a-4p Сб/Вс: 8:30a-4p .

    Мон-Сент-Мари — Среда, 6:25, обработано машиной 31–31 база 19 из 20 трасс открыты на 95%, 2 из 3 подъемников Пн-Пт: 9а-4п; Сб/Вс: 9a-4p.

    Mont Sutton — Среда 7:04 сыпучих гранулированных машин обработано 12–26 баз 56 из 60 трасс Открыто 93%, 23 мили, 214 акров, 6 из 10 подъемников Пн-Пт: 9a-4p Сб/Вс: 8:30- 4п.

    Owls Head — Среда 6:31a Машинная обработка 31 — 31 база 50 из 52 трасс, 96% открыты 5 из 8 подъемников Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Ski La Reserve — Ср. Сб/Вс: 8:30–15:45.

    Sommet Edelweiss — Среда 6:37 машина подготовлена ​​28 — 28 база 17 из 20 трасс открыты на 85%, 2 из 4 подъемников Пн-Чт: 9a-9p Пт: 9a-10p; Сб: 9:00-10:00 Вс: 8:30-21:00.

    Соммет Габриэль — Ср. 9:10 машинная обработка 28 — 28 база 21 из 21 трасс 100% открыта, 3 из 5 подъемов Ср-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 8:30-16:00; Открыто ср-вс, 28 февраля, 04 марта: 9a-4p.

    Соммет Морин-Хайтс — Ср Открыто 17.02 машинная обработка 31–31 база Открыто на 100% Пн/Чт: 9:00–4:00 Пт: 9:00–9:00; Сб: 8:30–21:00 Вс: 8:30–17:00; Открыто Чт-Пн.

    Sommet Olympia — Ср Открыто 17.02 машинная обработка 31 — 31 база 100% открыто Пн/Чт: 9a-4p Пт: 9a-9p; Сб: 8:30–21:00 Вс: 8:30–17:00; Открыто Чт-Пн.

    Sommet Saint Sauveur — Среда 6:39 машинный уход 31 — 31 база 31 из 40 трасс Открыто 78%, 7 из 8 подъемников Пн-Пт: 8:30a-10p; Сб/Вс: 8:30-22:00.

    Stoneham — среда 6:52 машина подготовила 26 — 26 базу 43 из 43 трасс, 100% открыто 19 миль, 333 акра, 5 из 6 подъемников пн-пт: 9a-9:30p; Сб-Вс: 8:30-9:30.

    Tremblant — ср. Сб/Вс: 8:30–15:45.

    Val D Irene — Среда, 16:04, обработано машиной 39 — 39 база 27 из 27 трасс, 100% открыто 2 из 4 подъемников Пн-Пт: 9a-3p; Сб/Вс: 9a-3p.

    versant Авила — Ср 6:45 машинная обработка 31 — 31 база 12 из 13 трасс открыты на 92%, 2 из 3 подъемников Пн-Пт: 8:30-10:00; Сб/Вс: 8:30-22:00.

    Vorlage — Ср. Сб: 9a-9p Вс: 9a-4p.

    Batawa Ski Hill — Среда 15:27 Машинная обработка 28-28 база 11 из 11 трасс 100% открыты, 3 из 3 подъемников Ср-Пт: 1-9 часов; Сб: 9:00-9:00 Вс: 9:00-17:00. 21 февраля: 9:00-17:00 Открыто: ср-вс.

    Голубая гора — Ср 5:21a 5 новых машин подготовлено 39 — 39 база 42 из 43 трасс Открыто 98%, 10 из 15 подъемников Пн-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Гора Болер — Среда 5:23 Ухоженная машина 24 — 24 базы 15 из 15 трасс 100% открыты, 4 из 5 подъемников, смПн: 10:00-9:30 Вт-Пт: 9:30-9:30 Сб: 8: 30:00–21:30 Вс: 8:30–19:00.

    Brimacombe — Ср. Сб: 9:00-21:30 Вс: 9:00-16:30; Открыто ср-пн.

    Calabogie Peaks — Среда 11:02 машинная обработка 20 — 25 база 23 из 24 трасс Открыто 92%, 3 из 3 подъемников, пн-пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Чикопи — Среда 5:27a Машина подготовлена ​​28 — 28 база 11 из 14 трасс, 79% открыты 5 из 6 подъемников Пн-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Горнолыжный курорт Дагмар — ср. 5:29 машинная обработка 31-31 база 18 из 18 трасс открыты на 100%, 6 из 6 подъемников ср-пт: 10:00-9:30; Сб: 9:00-21:30;Вс: 9:00-21:30 Открыто: Ср-Вс.

    Лыжный центр Earl Bales — ср. 5:31 машинная обработка 12-12 база 4 из 4 трасс открыты на 100%, 2 из 3 подъемников, пн-пт: 10:00-9:30; Сб: 9a-8p Вс: 9a-6p.

    Глен-Эден — Среда 5:33 машина подготовила 24-24 базы 15 из 17 трасс, 88% открыты 3 из 7 подъемников Пн-Пт: 8:30-9:30; Сб/Вс: 8:30-9:30.

    Hidden Valley — Ср Открыто 17.02 машинная обработка 31–31 база Открыто 93% Пн: 9:00–4:00 Чт/Пт: 9:00–9:00; Сб: 9a-9p Вс: 9a-4p; Открыто Чт-Пн.

    Hockley Valley — Среда 6:49a Машинная обработка 28 — 28 база 15 из 15 трасс 100% открыта, 4 из 5 подъемников, смПн-9а-4п Вт-Пт: 9а-4п/5п-9п Сб: 9а-4: 30p/5p-9p Вс: 9a-16:30.

    Horseshoe Resort — Среда 5:39 машинный уход 35 — 35 база 28 из 28 трасс открыты на 100%, 4 из 8 подъемников Пн-Пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Горнолыжный курорт Лейкеридж — Ср. 9:00–21:30; Открыто вт-вс.

    Лох-Ломонд — Среда 5:44 машинный уход 39 — 39 база 17 из 17 трасс, 100% открыто 3 из 3 подъемников Ср-Пт: 10:00-9:00; Сб: 10:00-9:00 Вс: 10:00-17:00; Открыто ср-вс.

    Лыжный клуб Мэнсфилда — Ср Открытие 02/17 машинная обработка 22–26 база Чт/Пт: 9a–4p; Сб/Вс: 9a-4p; Открыто чт-вс.

    Маунт-Пакенхэм — Ср. Сб 9a-9p; вс 9а-5п; Открыто вт-вс.

    Маунт-Сент-Луис Мунстоун — среда 5:48 машинная обработка 31–43 базы 36 из 36 трасс открыты на 100%, 5 из 13 подъемников Пн/Вт: 9:00–16:30; Ср-Пт: 9:00-9:00 Сб/Вс: 9:00-9:00.

    Searchmont Resort — ср. 5:50 машинная обработка 24–35 баз 19 из 22 трасс открыты на 86%, 2 из 4 подъемников ср.–пт.: 9:30–4:00; Сб/Вс: 9:30-16:00; Открыто ср-вс.

    Sir Sams — Ср Открыто 17.02 машинная обработка База 22–22 Открыто на 100% Пн/Чт/Пт: 9:30–16:00; Сб/Вс: 9:00-16:30; Открыто Чт-Пн.

    Снежная Долина — Среда 5:53a машина подготовлена ​​33 — 33 база 20 из 20 трасс, 100% открыто 7 из 9 подъемников пн-пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Martock — Ср. 6:14a машина подготовлена ​​24 — 24 база 11 из 11 трасс, 100% открыто 3 из 3 подъемников, пн-пт: 9a-9p; Сб/Вс: 9a-9p.

    Crabbe Mountain — Среда 5:09 машинная обработка 35 — 35 база 33 из 34 трасс 97% открыты, 2 из 3 подъемников, СМ Ср: 9:00-16:30 Чт/Пт: 9:00-9:00; Сб: 9:00-9:00 Вс: 9:00-16:30; Открыто ср-вс.

    Mont Farlagne — Ср 5:12 машинная обработка 24 — 24 базы 22 из 22 трасс 100% открыты, 5 из 5 подъемников Ср: 10:00-9:00 Чт: 10:00-5:00 Пт: 10:00-9:00 Сб: 10:00-9:00 Вс: 10:00 -5р; Открыто ср-вс.

    Banff Norquay — Среда 7:51a 1 новая машина подготовлена ​​46 — 46 база 57 из 60 трасс Открыты на 95%, 6 из 6 подъемников Пн-Пт: 9a-4p; Сб-Вс: 9a-9p.

    Олимпийский парк Канады — Среда, 12:23. Машинная обработка. 20–20 баз. Сб/Вс: 9a-5p.

    Каньон — Ср. Сб/Вс: 9a-5p; 21-27 февраля: 9a-5p Открыто ср-вс.

    Касл-Маунтин — Среда 5:38a 4 новых машины для пороха, подготовленные 35-59 базы 80 из 95 трасс 84% открытых, 3000 акров, 5 из 6 подъемников Пн-Пт: 9a-4p; Сб/Вс: 9a-4p.

    Ответить

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *